天津N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

來源: 發(fā)布時間:2024-07-17

糖蛋白性能測試:O-聚糖的巖藻糖基化參與功能上重要的聚糖表位的合成,例如血型抗原和劉易斯結構。分析用這種復雜的聚糖結構修飾的糖蛋白可能具有挑戰(zhàn)性,需要高效和特異性的酶工具。我們在許多糖基工程TNFR蛋白上測試了Genovis的FucosEXO,這些蛋白攜帶多達11個O-聚糖,這些O-聚糖以不同的鍵裝飾。我們將該活性與其他市售巖藻苷酶進行了比較。FucosEXO 能夠在 1 小時內對所有三種 TNFR 蛋白進行去巖藻糖磺酸處理,而用其他巖藻糖酶處理導致部分去除巖藻糖或根本沒有去除。GlycOCATCH?用于結合的 O-糖蛋白的可選洗脫方法:靶向 O-糖蛋白富集;天津N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

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Genovis的ImpaRATOR? 和 OpeRATOR? - 兩種協同的作用:O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化區(qū)域O-聚糖位點的覆蓋率(圖3)。使用OpeRATOR鑒定對應于所有13個O-聚糖位點的肽,而使用ImpaRATOR只能明確鑒定10個位點。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR (1) 具有更具選擇性的氨基酸序列偏好,此處由 S186 和 T245 位點缺乏消化來表明。此外,ImpaRATOR 在兩個相鄰的 O-糖基化氨基酸之間顯示出有限的裂解,如 S213 位點酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位點酶解肽的低強度所證明的那樣。在OpeRATOR酶解樣品(T184-S199和T200-H204;圖2b和d),而在ImpaRATOR消化的樣品中,具有漏裂的相應肽(S184-H204)的強度更高。 雖然OpeRATOR顯示出更高的O-聚糖位點覆蓋率,但使用ImpaRATOR進行消化可以表征O-聚糖結構,包括唾液酸化物種。例如,條形圖插入顯示了兩種糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖種類。這應該與使用OpeRATOR的消化進行比較,在OpeRATOR中,必須去除唾液酸才能產生酶活性,這意味著有關唾液酸化的信息丟失??偠灾琁mpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有關聚糖組成和 O-聚糖位點的完整信息。吉林PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究上海倍篤生物科技有限公司(簡稱“倍篤生物”)代理Genovis的IdeS酶等。

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genvois的OpeRATOR 是一種內切蛋白酶,可催化直接靠近 O-聚糖的天然粘蛋白型 O-糖基化蛋白的肽鍵的水解。內切蛋白酶具有高特異性,可消化絲氨酸或蘇氨酸殘基的O-聚糖N端的蛋白質。 OpeRATOR 活性需要粘蛋白型的 O-聚糖,并且該酶不會用 N-連接聚糖消化糖蛋白。該酶對具有亞洲化he心1 O-聚糖的位點z活躍。它還消化唾液酸化的he心 1 和he心 3,但程度要低得多。為了獲得z佳性能,需要去除唾液酸,因此,SialEXO凍干(唾液酸酶混合物)包含在購買中。

用于糖蛋白去唾液酸化的凍干酶混合物。Genovis的SialEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在 2000 個單位的小瓶中,用于 2 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式;2. 可以結合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。用于水解ɑ2-3-連接唾液酸的凍干酶。 Genovis的SialEXO 2-3凍干劑以凍干粉末的形式提供,裝在500個單位的小瓶中,用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。 與唾液酸酶混合物 SialEXO 相比,SialEXO 2-3 是一種 α2-3 特異性唾液酸酶,允許對 α2-3 連接的唾液酸進行靶向分析。O-和N-糖基化蛋白的高效α2-3去唾液酸化可以在1小時內實現。ImpaRATOR 凍干劑以凍干粉末的形式提供,裝在 2000 單位小瓶中,用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。

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該酶適用于在釋放的聚糖結構上修剪半乳糖,用于外切糖苷酶陣列,或用于生成具有均相 G0/G0F 聚糖譜的抗體。1. 高效β-半乳糖苷酶混合物 – 快速去除末端 β1-3 和 β1-4-連接的半乳糖;2. 有助于在亞基水平上識別糖基化修飾;3. 可固定在即用型離心柱中。Genovis的GalactEXO是一種外切糖苷酶,含有β-半乳糖苷酶的混合物,可有效去除N-和O-糖基化蛋白或寡糖上的半乳糖殘基。該混合物由兩種半乳糖苷酶組成,可高效水解 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖酶。GalactEXO在天然條件下水解糖蛋白,并在5.5至7.5的寬pH值范圍內顯示活性。復雜樣品的特異性凈化;改進 MS 分析的樣品制備。海南N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

在變性反應條件下,PNGase F 在 30 分鐘內成功將更復雜的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。天津N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

GlycOCATCH?親和純化:用于粘蛋白型O-糖蛋白和肽親和純化的富集樹脂。GlycOCATCH親和純化以方便的離心柱形式提供。該產品包含:4 個 GlycOCATCH 親和純化微離心柱,每個柱能夠結合 50 μg 粘蛋白型 O-糖蛋白(總共 200 μg)。Genovis的SialEXO 凍干 200 單位,用于去除唾液酸;OpeRATOR 凍干 200 單位,用于結合的 O-糖蛋白的可選洗脫方法。1. 靶向 O-糖蛋白富集;2. 復雜樣品的特異性凈化;3. 用于改進 MS 分析的樣品制備。O-糖基化蛋白和肽的特異性富集:O-連接聚糖參與多種生物過程,包括抑制病原體引起的gan染、炎癥反應、造血和細胞信號傳導。天津N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)