湖北凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開(kāi)發(fā)

Genovis的PNGase F 是一種糖酰胺酶，可水解多肽天冬酰胺與所有哺乳動(dòng)物天冬酰胺連接復(fù)合物、雜交體或高甘露糖寡糖的內(nèi)層 GlcNAc 之間的酰胺鍵。 在反應(yīng)過(guò)程中，從中去除聚糖的天冬酰胺殘基被脫酰胺為天冬氨酸。釋放的低聚糖完好無(wú)損，可用于進(jìn)一步分析。N-糖的去除被用于MS分析的樣品制備，以降低蛋白質(zhì)的異質(zhì)性，使游離的糖分析成為可能，并研究N-糖的功能作用。 該酶在大腸桿菌中表達(dá)，該重組基因來(lái)源于伊麗莎白金氏腦膜敗血癥。 評(píng)價(jià)抗體片段對(duì)完整蛋白聚集的影響。 IgG1 mAb1和mAb2在Biogen生產(chǎn)。 mAb1被糖基化，主要的糖型是具有0和1半乳糖的he心聚焦雙觸角聚糖(FA2和FA2G1); mAb2被糖基化。GalactEXO由兩種半乳糖苷酶組成，均帶有His標(biāo)簽，組分的分子量為87 kDa和109 kDa。湖北凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開(kāi)發(fā)

在這里，Genovis分析了 C1 抑制劑——一種人血漿衍生的生物zhiliao藥物，由 6 種 N-聚糖和多達(dá) 28 種 O-聚糖修飾，主要由唾液酸he心 1 結(jié)構(gòu)組成。在不對(duì)這種高度異質(zhì)的蛋白質(zhì)進(jìn)行任何預(yù)處理的情況下，反相LC-MS分析產(chǎn)生了無(wú)法詳細(xì)解釋的復(fù)雜質(zhì)譜圖。在天然條件下使用OmniGLYZOR Microspin色譜柱，可在3小時(shí)內(nèi)有效去除所有O-聚糖。然而，蛋白質(zhì)上仍殘留著 1 到 3 個(gè) N-聚糖。使用凍干的PNGase F和OmniGLYZOR試劑盒中包含的MS友好型RapiGest? SF表面活性劑*，在變性條件下通過(guò)額外的去糖基化步驟去除這些不可接近的N-聚糖。觀(guān)察到所有聚糖的完全去除，但分子上存在的少量he心 2 O-聚糖除外。水解O-聚糖的酶不會(huì)從變性中獲益，這就是為什么OmniGLYZOR Microspin色譜柱只能在非變性條件下使用的原因。江蘇PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究用SialEXO對(duì)依那西普糖蛋白去唾液酸化，并用ProteinSimple成像等電聚焦分析。

當(dāng)在完整狀態(tài)下進(jìn)行分析時(shí)，EPO的聚糖異質(zhì)性導(dǎo)致了非常復(fù)雜的質(zhì)譜圖。通過(guò)在 37°C 下在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小時(shí)，可以有效地去除 N 糖（含有PNGase F酶）和 O-糖，如對(duì)應(yīng)于未修飾蛋白質(zhì)的單個(gè)峰所示。EPO上殘留了少量用乙酰化唾液酸修飾的O-聚糖，因?yàn)镺mniGLYZOR對(duì)這種結(jié)構(gòu)的水解效率低下。根據(jù)制造商Genvois的建議（在37°C下進(jìn)行O/N孵育），兩種底物蛋白也用另一種市售的去糖基化產(chǎn)物處理，并顯示數(shù)據(jù)以供比較。另一方面，N-聚糖在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中翻譯地連接到未折疊的蛋白質(zhì)上。這導(dǎo)致某些 N-糖基化位點(diǎn)難以被 Genovis的PNGase F 接近，或者一旦底物蛋白折疊成其天然狀態(tài)，就根本無(wú)法接近。因此，這種N-聚糖的水解需要底物蛋白以與酶活性相容的方式變性。

genovis分析依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖：為了確認(rèn)依那西普和曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數(shù)據(jù)，進(jìn)行了釋放的N-聚糖分析。標(biāo)記的N-聚糖的分離清楚地表明了依那西普和曲妥珠單抗上半乳糖的丟失，如半乳糖基化聚糖物種的信號(hào)丟失所示。該酶是一種有價(jià)值的工具，可降低樣品異質(zhì)性，用于分析攜帶α連接的 GalNAc 殘基作為未成熟截短he心 1 的復(fù)雜 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-連接的 GalNAc；2. 實(shí)現(xiàn)完全糖基去除，以改善蛋白質(zhì)表征；3. 可固定在即用型離心柱中。FucosEXO凍干劑以?xún)龈煞鄣男问教峁?，裝在2000單位的小瓶中，用于2mg糖蛋白的去碳基化。

用于離心柱中糖蛋白去膠基化的固定化酶。Genovis的FucosEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的FucosEXO酶，用于糖蛋白的去氟糖基化，而不會(huì)用酶污染z終制劑。Microspin 色譜柱可用于 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去膠基化。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3. z終樣品中不含酶。有效去除α1-2,3,4連接巖藻糖：分析用復(fù)雜聚糖結(jié)構(gòu)修飾的糖蛋白可能具有挑戰(zhàn)性，需要高效和特異性的酶學(xué)工具。Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物，用于有效水解 N-和 O-糖蛋白或寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4 連接的巖藻糖殘基，無(wú)需輔助因子或添加GalNAcEXO 在 pH 值 6.0 至 7.6 范圍內(nèi)具有高度活性，來(lái)源于Akkermansia muciniphila。上海瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶生物藥物開(kāi)發(fā)

為了測(cè)試選擇性，將一系列 O-糖基化、N-糖基化和非糖基化蛋白與 GlycOCATCH 一起孵育：洗脫O-糖基化蛋白。湖北凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開(kāi)發(fā)

Genovis 是一家瑞典生物技術(shù)公司，自2010年起，為生物制藥公司提供SmartEnzymes?工具酶。Genovis提供一系列獨(dú)特、快速且易于使用的酶學(xué)工具，主要用于生物制藥行業(yè)和學(xué)術(shù)界。 我們?cè)谌蚍秶鷥?nèi)提供創(chuàng)新的智能酶SmartEnzymes?，用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開(kāi)發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。您可以在我們的網(wǎng)站上“Application頁(yè)面”獲得更多應(yīng)用信息，如果您有興趣，可以和我們一起做一個(gè)“SmartStories”，也可以聯(lián)系我們。?湖北凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開(kāi)發(fā)