福建用于自動化系統(tǒng)的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

Genovis 集團由瑞典 Genovis AB 和美國全資子公司 Genovis Inc. 組成。該公司的在納斯達克北方增長市場上市。如需了解更多信息，請訪問投資者關(guān)系。 Genovis的經(jīng)營理念是為生物制藥和研究行業(yè)的客戶提供工具，以促進和節(jié)省開發(fā)新治療方法和診斷的時間。Genovis 酶產(chǎn)品，稱為 SmartEnzymes，被世界各地的科學(xué)家使用，創(chuàng)新的產(chǎn)品形式促進了生物藥物的開發(fā)和質(zhì)量控制。 通過在2020年收購QED Bioscience，產(chǎn)品組合已擴大到包括用于研究、生物藥物開發(fā)和診斷檢測的抗體和試劑。在 網(wǎng)站 上閱讀有關(guān)QED的更多信息 Genovis 研發(fā)活動的基石是客戶關(guān)系，使產(chǎn)品開發(fā)能夠滿足客戶需求。與專注于表征新酶、開發(fā)新工作流程和新靶點抗體的學(xué)術(shù)團體的合作同樣有價值。生物制劑的表征和質(zhì)量控制過程中確定電荷變體；福建用于自動化系統(tǒng)的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

我們展示了使用兩種蛋白作為底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一種 Fc 融合蛋白，含有 TNFα 受體的胞外結(jié)構(gòu)域。該結(jié)構(gòu)域用 2 個 N-糖和 8-11 個 1 個具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修飾。在 37°C 下將這種重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小時，可完全去除所有 N-和 O-糖，如中級 LC-MS 分析所示。促紅xibao生成素 （EPO） 是一種攜帶 3 個 N-聚糖和 1 個he心 1 個 O-聚糖的小蛋白質(zhì)，其總質(zhì)量的近 40% 由聚糖組成。O-連接聚糖通常存在于蛋白質(zhì)的暴露位置，因為它們在蛋白質(zhì)折疊發(fā)生后附著。只有負(fù)責(zé)其合成的糖基轉(zhuǎn)移酶才能接觸到這些暴露的位點。天津N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶水解ɑ2-3-連接唾液酸的凍干酶SialEXO 2-3，裝在500個單位的小瓶中，用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。

Genovis的ImpaRATOR? 可用于多種 O-聚糖：依那西普是一種融合蛋白，由TNF受體的胞外結(jié)構(gòu)域與人IgG1的Fc部分相連。該蛋白質(zhì)在Fc區(qū)域上方含有多達13個O-糖基化的Ser/Thr殘基簇，使其成為一種非常難以在結(jié)構(gòu)上表征的生物制藥。為了證明ImpaRATOR的聚糖特異性，制備了三種具有不同聚糖組成的依那西普樣品：（i）攜帶單唾液酸和二唾液酸化he心1結(jié)構(gòu)混合物的未經(jīng)處理的糖蛋白，（ii）用SialEXO處理的糖蛋白去除唾液酸并產(chǎn)生裸核1結(jié)構(gòu)，以及（iii）用SialEXO和GalactEXO處理的糖蛋白產(chǎn)生單個GalNAc殘基， 也稱為Tn抗原。用ImpaRATOR和FabRICATOR在一鍋反應(yīng)中處理三個樣品（圖1）。作為比較，SialEXO處理的依那西普用OpeRATOR和FabRICATOR處理。將所得肽還原、烷基化并用HILIC-MS進行分析。FabRICATOR被包括在反應(yīng)中，以將Fc區(qū)與大多數(shù)C端糖肽分離，以促進其表征。

C1抑制劑的去糖基化：在O-糖基化生物制藥的生產(chǎn)過程中，由于he心GalNAc殘基的加工不完全，可能會出現(xiàn)Tn抗原。這表現(xiàn)為具有 203 Da HexNAc 單位差異的重復(fù)質(zhì)量位移。為了確認(rèn) Tn 抗原的存在，可以應(yīng)用以下工作流程，此處在重度（26 個位點）O-糖基化 C1 抑制劑上演示。首先，使用PNGaseF修剪糖蛋白的N-糖，使用Genovis的OglyZOR和SialEXO修剪he心1 O-糖。依那西普的磷性能測試?：依那西普是另一種具有挑戰(zhàn)性的生物制藥模型分子，攜帶 13 個 O-聚糖位點，其中平均 9 至 10 個位點被占用。由于GlycOCATCH樹脂和O-糖蛋白/肽之間的強相互作用。

使用Genovis的GalNAcEXO 對 O-糖基化生物制藥進行 Tn 抗原表征：未成熟的截短O-聚糖導(dǎo)致了復(fù)雜生物制藥的異質(zhì)性，使其分析更具挑戰(zhàn)性。 O-聚糖的he心由n-α-GalNAc殘基組成，通過糖苷鍵與絲氨酸或蘇氨酸連接，稱為Tn抗原。 現(xiàn)在，使用GalNAcEXO可以采用合適的酶策略來去除這些GalNAc并簡化生物制藥的表征。在質(zhì)譜圖中可以觀察到重復(fù)峰的模式。其次，在與GalNAcEXO酶孵育后，剩余的GalNAc殘基被完全去除，留下一個峰。因此，該工作流程確認(rèn)了 O-糖基化生物制藥上存在 Tn 抗原，并允許定量he心 GalNAc 水平。這種工作流程的另一個好處是減少了剩余的異質(zhì)性，這有助于確認(rèn)蛋白質(zhì)的完整質(zhì)量，并揭示截短的片段。親和純化微離心柱，SialEXO 凍干 200 單位，OpeRATOR 凍干 200 單位。湖北凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

GlycOCATCH的應(yīng)用包括O糖蛋白和肽的特異性富集或去除、糖組學(xué)、復(fù)雜樣品的研究和生物制藥的表征。福建用于自動化系統(tǒng)的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

上海倍篤生物科技有限公司（簡稱“倍篤生物”），由中國科學(xué)院及生物醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)界人士，于2018年1月共同創(chuàng)立。公司代理多個品牌的儀器、試劑及耗材（如Genovis的IdeS酶），遵守相關(guān)法規(guī)要求，如cGMP規(guī)范、ISO13485質(zhì)量管理體系認(rèn)證等，致力于為診斷領(lǐng)域如分子診斷及病原微生物檢測研發(fā)等，藥物研發(fā)領(lǐng)域如細(xì)胞基因藥物、核酸藥物、抗體藥物、干細(xì)胞及外泌體研究等客戶提供合規(guī)、高質(zhì)量物料及專業(yè)服務(wù)，以期與客戶共同協(xié)作，加快研發(fā)及生產(chǎn)進度，為客戶提供更多價值。福建用于自動化系統(tǒng)的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究