固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

Genovis的SialEXO Immobilized是一種微離心柱，用于在室溫下孵育30分鐘后完全去除0.5mg天然糖蛋白上的唾液酸。為了研究依那西普的潛在電荷變體，開(kāi)發(fā)了一種使用SialEXO固定化柱對(duì)糖蛋白進(jìn)行去唾液酸化的一般工作流程。毛細(xì)管電泳通常用于在生物制劑的表征和質(zhì)量控制過(guò)程中確定電荷變體。使用SialEXO Imfixedized對(duì)糖蛋白進(jìn)行去唾液酸化，并使用ProteinSimple的Maurice在成像等電聚焦中進(jìn)行分析。綜合起來(lái)，該分析工作流程改進(jìn)了糖蛋白的分離并實(shí)現(xiàn)了電荷異構(gòu)體分析。依那西普，如果不首先去除唾液酸，將很難分析，但使用SialEXO固定化分離峰可以獲得。ImpaRATOR? 可用于多種 O-聚糖結(jié)構(gòu)表征。固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

GlycOCATCH?親和純化：用于粘蛋白型O-糖蛋白和肽親和純化的富集樹(shù)脂。GlycOCATCH親和純化以方便的離心柱形式提供。該產(chǎn)品包含：4 個(gè) GlycOCATCH 親和純化微離心柱，每個(gè)柱能夠結(jié)合 50 μg 粘蛋白型 O-糖蛋白（總共 200 μg）。Genovis的SialEXO 凍干 200 單位，用于去除唾液酸；OpeRATOR 凍干 200 單位，用于結(jié)合的 O-糖蛋白的可選洗脫方法。1. 靶向 O-糖蛋白富集；2. 復(fù)雜樣品的特異性?xún)艋?. 用于改進(jìn) MS 分析的樣品制備。O-糖基化蛋白和肽的特異性富集：O-連接聚糖參與多種生物過(guò)程，包括抑制病原體引起的gan染、炎癥反應(yīng)、造血和細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)。甘肅用于自動(dòng)化系統(tǒng)的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶疾病機(jī)理研究ImpaRATOR處理的依那西普顯示出與相應(yīng)的去唾液酸化OpeRATOR處理樣品略有不同的消化模式。

與PNGase F類(lèi)似，Genvois的OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物，可快速有效地去除抗體、融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和簡(jiǎn)單的粘蛋白型 O-聚糖。聚糖的去除被用于減少異質(zhì)性，以促進(jìn)蛋白質(zhì)的分析，例如質(zhì)譜法。去糖基化也可用于研究聚糖的功能作用。N-和粘蛋白型O-連接聚糖的快速高效去糖基化；即用型離心柱形式 - 無(wú)酶干擾分析；與LC-MS兼容。與PNGase F類(lèi)似，Genvois的與PNGase F類(lèi)似，Genvois的OmniGLYZOR 含有去除 N-糖和最常見(jiàn)的粘蛋白型 O-糖所需的酶，即單唾液酸和二唾液酸he心 1 和 Tn 抗原 （α-GalNAc）。OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下組分：PNGase?F；O-糖苷酶。

genvois的OpeRATOR 是一種內(nèi)切蛋白酶，可催化直接靠近 O-聚糖的天然粘蛋白型 O-糖基化蛋白的肽鍵的水解。內(nèi)切蛋白酶具有高特異性，可消化絲氨酸或蘇氨酸殘基的O-聚糖N端的蛋白質(zhì)。 OpeRATOR 活性需要粘蛋白型的 O-聚糖，并且該酶不會(huì)用 N-連接聚糖消化糖蛋白。該酶對(duì)具有亞洲化he心1 O-聚糖的位點(diǎn)z活躍。它還消化唾液酸化的he心 1 和he心 3，但程度要低得多。為了獲得z佳性能，需要去除唾液酸，因此，SialEXO凍干（唾液酸酶混合物）包含在購(gòu)買(mǎi)中。 曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數(shù)據(jù)，進(jìn)行了釋放的N-聚糖分析。

Genovis的SialEXO產(chǎn)品是用于去除和分析唾液酸的唾液酸酶。這些酶對(duì)天然糖蛋白或游離的聚糖結(jié)構(gòu)上存在的 N- 和 O-連接聚糖均具有活性。SialEXO用于在用OpeRATOR或OglyZOR消化之前預(yù)處理O-糖基化蛋白。其他應(yīng)用包括降低樣品復(fù)雜性、電荷異構(gòu)體分析和外切糖苷酶陣列。N-連接、O-連接和游離聚糖的高效去唾液酸化快速去除唾液酸，增強(qiáng)對(duì)蛋白質(zhì)電荷變體的分析可固定在即用型離心柱中。然后可以用FabRICATOR消化所得的去糖基化蛋白，并通過(guò)中級(jí)質(zhì)譜分析。我們將該工作流程應(yīng)用于依那西普的分析，雖然未經(jīng)處理的TNFR結(jié)構(gòu)域過(guò)于復(fù)雜而無(wú)法分析，但O-聚糖組成可以在用PNGase F處理后進(jìn)行分離和比較。OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物可快速有效地去除抗體、融合蛋白；山西凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

OpeRATOR用于質(zhì)譜法進(jìn)行O-糖分析、O-糖肽圖譜以及中級(jí)分析，消化發(fā)生在O-糖基化位點(diǎn)的N端。固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

GlycOCATCH設(shè)計(jì)用于特異性結(jié)合粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。親和樹(shù)脂基于無(wú)活性的Genovis的OpeRATOR酶，該酶經(jīng)過(guò)工程設(shè)計(jì)，可以高親和力結(jié)合O-糖基化蛋白和肽。 結(jié)合在pH 5-8的生理緩沖液中進(jìn)行。由于GlycOCATCH樹(shù)脂和O-糖蛋白/肽之間的強(qiáng)相互作用，可以用8M尿素進(jìn)行洗脫?；蛘?，可以使用活性O(shè)peRATOR酶進(jìn)行洗脫，該酶消化O-聚糖位點(diǎn)的N末端結(jié)合的O-糖蛋白。在后一種情況下，肽在天然條件下回收。OpeRATOR 凍干酶包含在購(gòu)買(mǎi)中。由于 O-糖蛋白上的旋亞氨酸化 O-聚糖與樹(shù)脂結(jié)合效率更高，因此唾液酸酶混合物 SialEXO 凍干也包含在購(gòu)買(mǎi)中。固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究