江蘇PNGaseF去糖基化酶

用于水解β1-3,4-連接半乳糖的固定化酶在離心柱中的糖蛋白上。Genovis的GalactEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的GalactEXO酶，用于糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的水解，而不會(huì)用酶污染z終制劑。Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3. z終樣品中不含酶。GalactEXO 酶來(lái)源于 Akkermansia muciniphila 并重組表達(dá)，可有效水解 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖。GalactEXO微離心柱經(jīng)過(guò)格式化，可在30-60分鐘內(nèi)水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。ImpaRATOR 凍干劑以?xún)龈煞勰┑男问教峁?，裝在 2000 單位小瓶中，用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。江蘇PNGaseF去糖基化酶

在這里，Genovis分析了 C1 抑制劑——一種人血漿衍生的生物zhiliao藥物，由 6 種 N-聚糖和多達(dá) 28 種 O-聚糖修飾，主要由唾液酸he心 1 結(jié)構(gòu)組成。在不對(duì)這種高度異質(zhì)的蛋白質(zhì)進(jìn)行任何預(yù)處理的情況下，反相LC-MS分析產(chǎn)生了無(wú)法詳細(xì)解釋的復(fù)雜質(zhì)譜圖。在天然條件下使用OmniGLYZOR Microspin色譜柱，可在3小時(shí)內(nèi)有效去除所有O-聚糖。然而，蛋白質(zhì)上仍殘留著 1 到 3 個(gè) N-聚糖。使用凍干的PNGase F和OmniGLYZOR試劑盒中包含的MS友好型RapiGest? SF表面活性劑*，在變性條件下通過(guò)額外的去糖基化步驟去除這些不可接近的N-聚糖。觀察到所有聚糖的完全去除，但分子上存在的少量he心 2 O-聚糖除外。水解O-聚糖的酶不會(huì)從變性中獲益，這就是為什么OmniGLYZOR Microspin色譜柱只能在非變性條件下使用的原因。吉林固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶實(shí)現(xiàn)高通量 N-糖去除，簡(jiǎn)化糖蛋白底物的下游分析。

該酶適用于在釋放的聚糖結(jié)構(gòu)上修剪半乳糖，用于外切糖苷酶陣列，或用于生成具有均相 G0/G0F 聚糖譜的抗體。1. 高效β-半乳糖苷酶混合物 – 快速去除末端 β1-3 和 β1-4-連接的半乳糖；2. 有助于在亞基水平上識(shí)別糖基化修飾；3. 可固定在即用型離心柱中。Genovis的GalactEXO是一種外切糖苷酶，含有β-半乳糖苷酶的混合物，可有效去除N-和O-糖基化蛋白或寡糖上的半乳糖殘基。該混合物由兩種半乳糖苷酶組成，可高效水解 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖酶。GalactEXO在天然條件下水解糖蛋白，并在5.5至7.5的寬pH值范圍內(nèi)顯示活性。

Genovis的PNGase F 是一種糖酰胺酶，可水解多肽天冬酰胺與所有哺乳動(dòng)物天冬酰胺連接復(fù)合物、雜交體或高甘露糖寡糖的內(nèi)層 GlcNAc 之間的酰胺鍵。 在反應(yīng)過(guò)程中，從中去除聚糖的天冬酰胺殘基被脫酰胺為天冬氨酸。釋放的低聚糖完好無(wú)損，可用于進(jìn)一步分析。N-糖的去除被用于MS分析的樣品制備，以降低蛋白質(zhì)的異質(zhì)性，使游離的糖分析成為可能，并研究N-糖的功能作用。 該酶在大腸桿菌中表達(dá)，該重組基因來(lái)源于伊麗莎白金氏腦膜敗血癥。 評(píng)價(jià)抗體片段對(duì)完整蛋白聚集的影響。 IgG1 mAb1和mAb2在Biogen生產(chǎn)。 mAb1被糖基化，主要的糖型是具有0和1半乳糖的he心聚焦雙觸角聚糖(FA2和FA2G1); mAb2被糖基化。OglyZOR 是一種內(nèi)切糖苷酶用于確認(rèn)O-糖的存在和降低樣品的異質(zhì)性。

我們測(cè)量了FucosEXO從一組dai表不同鍵的不同寡糖底物中釋放的巖藻糖。FucosEXO可有效釋放α1-2、α1-3和α1-4連接的巖藻糖，對(duì)α1-6連接的巖藻糖殘基沒(méi)有活Genovis的FucosEXO的底物特異性：巖藻糖以不同的鍵存在于N-和O-聚糖上。α1-2、α1-3 和 α1-4 連接的巖藻糖常見(jiàn)于 O-聚糖中，并作為 N-聚糖的天線(xiàn)巖藻糖基化，而 α1-6 連接的巖藻糖被發(fā)現(xiàn)是 N-聚糖he心的修飾。β1-3,4半乳糖的水解：Genovis的GalactEXO 是一種β-半乳糖苷酶混合物，可水解 N-和 O-糖基化蛋白中的 β1-3,4-連接末端半乳糖。GalNAcEXO酶是可降低樣品異質(zhì)性，用于分析攜帶α連接的 GalNAc 殘基作為未成熟截短he心 1 的復(fù)雜 O-糖蛋白。安徽N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究

PNGase F去除N-糖，被用于MS分析的樣品制備，以降低蛋白質(zhì)的異質(zhì)性，分析游離的糖，并研究N-糖的功能作用。江蘇PNGaseF去糖基化酶

為了研究 OglyZOR 對(duì)天然糖蛋白的活性，將該酶與依那西普、TNFR 和阿巴西普在 37°C 下有或沒(méi)有 SialEXO 孵育 1 小時(shí)。當(dāng)唾液酸被去除時(shí)，OglyZOR酶有效地水解了所有三種底物中的O-聚糖。Genovis的OglyZOR 酶可有效水解天然糖蛋白中的he心 1 二糖 （Gal-β1,3-GalNAc）。這使得這些酶適合在LC-MS分析之前制備樣品，以鑒定其他PTM或確認(rèn)氨基酸序列O-糖基化生物制藥的全去糖基化：O-糖基化生物制藥（如依那西普）很難表征。為了能夠通過(guò)質(zhì)譜法測(cè)定完整質(zhì)量數(shù)，我們進(jìn)行了酶促總?cè)ヌ腔?。N-聚糖被Genovis的PNGase F裂解，而O-聚糖可以與OglyZOR和SialEXO一起去除。。江蘇PNGaseF去糖基化酶