甘肅用于自動(dòng)化系統(tǒng)的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究

Core 1型O-聚糖的水解：O-糖基化不僅難以研究，其自然異質(zhì)性也會(huì)導(dǎo)致其他分析出現(xiàn)問(wèn)題。例如，由于樣品中存在許多不同的糖型，因此對(duì)完整或中等水平的重糖基化蛋白質(zhì)進(jìn)行質(zhì)譜分析可能非常困難。酶法去除N-聚糖的解決方案已經(jīng)存在多年，Genvois的PNGase F是一種非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑戰(zhàn)性，現(xiàn)有的O-糖釋放化學(xué)方法通常會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)發(fā)生重大修飾，因此不太適合下游分析。1. 用于方法開(kāi)發(fā)的靈活產(chǎn)品形式；2. 可以結(jié)合酶以提高效率；3. 適用于自動(dòng)化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。人血清中 O-糖蛋白的富集：GlycOCATCH還可用于從復(fù)雜的樣品混合物（如人血清）中選擇性富集O-糖基化蛋白。甘肅用于自動(dòng)化系統(tǒng)的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究

Genovis 集團(tuán)由瑞典 Genovis AB 和美國(guó)全資子公司 Genovis Inc. 組成。該公司的在納斯達(dá)克北方增長(zhǎng)市場(chǎng)上市。如需了解更多信息，請(qǐng)?jiān)L問(wèn)投資者關(guān)系。 Genovis的經(jīng)營(yíng)理念是為生物制藥和研究行業(yè)的客戶(hù)提供工具，以促進(jìn)和節(jié)省開(kāi)發(fā)新治療方法和診斷的時(shí)間。Genovis 酶產(chǎn)品，稱(chēng)為 SmartEnzymes，被世界各地的科學(xué)家使用，創(chuàng)新的產(chǎn)品形式促進(jìn)了生物藥物的開(kāi)發(fā)和質(zhì)量控制。 通過(guò)在2020年收購(gòu)QED Bioscience，產(chǎn)品組合已擴(kuò)大到包括用于研究、生物藥物開(kāi)發(fā)和診斷檢測(cè)的抗體和試劑。在 網(wǎng)站 上閱讀有關(guān)QED的更多信息 Genovis 研發(fā)活動(dòng)的基石是客戶(hù)關(guān)系，使產(chǎn)品開(kāi)發(fā)能夠滿(mǎn)足客戶(hù)需求。與專(zhuān)注于表征新酶、開(kāi)發(fā)新工作流程和新靶點(diǎn)抗體的學(xué)術(shù)團(tuán)體的合作同樣有價(jià)值。青海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶瑞典GenovisFucosEXO 可在 1 至 2 小時(shí)內(nèi)水解糖蛋白上的末端 α1-2,3,4 。

在Genovis的PNGaseF去除N-聚糖并用SialEXO和GalactEXO截?cái)郞-聚糖后，在質(zhì)譜圖中觀察到幾個(gè)與GalNAcs相關(guān)的峰。為了去除剩余的GalNAc殘基，應(yīng)用GalNAcEXO酶。用GalNAcEXO處理后觀察到的單個(gè)蛋白峰顯示完全去除剩余的GalNAcs。?GalNAcEXO在生理緩沖液和中性pH值中具有活性，使其與大多數(shù)樣品相容。此外，GalNAcEXO的活性不依賴(lài)于任何可能影響LC-MS分析的輔因子，如BSA。根據(jù)底物的性質(zhì)，糖蛋白的GalNAcEXO反應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)完成，而更復(fù)雜的樣品可能需要孵育過(guò)夜。Genovis的GalNAcEXO也可固定在離心柱中，以便快速方便地處理樣品，在制備過(guò)程中不會(huì)殘留酶。

Genvis測(cè)試去除唾液酸以揭示電荷變體：唾液酸是帶負(fù)電荷的糖殘基，存在于 N- 和 O-連接的聚糖上。唾液酸的固有電荷可能會(huì)使分析工作流程復(fù)雜化，從而掩蓋其他重要的修飾。Microspin 色譜柱可用于 2 x 0.5 mg、5 x 0.5 mg 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3. 樣品中不含酶。因此，唾液酸的去除有助于研究蛋白質(zhì)中的潛在變體。該應(yīng)用展示了一種快速簡(jiǎn)便的樣品制備方法，可在電荷異構(gòu)體分析之前去除所有唾液酸。GlycOCATCH的應(yīng)用包括O糖蛋白和肽的特異性富集或去除、糖組學(xué)、復(fù)雜樣品的研究和生物制藥的表征。

為了研究 OglyZOR 對(duì)天然糖蛋白的活性，將該酶與依那西普、TNFR 和阿巴西普在 37°C 下有或沒(méi)有 SialEXO 孵育 1 小時(shí)。當(dāng)唾液酸被去除時(shí)，OglyZOR酶有效地水解了所有三種底物中的O-聚糖。Genovis的OglyZOR 酶可有效水解天然糖蛋白中的he心 1 二糖 （Gal-β1,3-GalNAc）。這使得這些酶適合在LC-MS分析之前制備樣品，以鑒定其他PTM或確認(rèn)氨基酸序列O-糖基化生物制藥的全去糖基化：O-糖基化生物制藥（如依那西普）很難表征。為了能夠通過(guò)質(zhì)譜法測(cè)定完整質(zhì)量數(shù)，我們進(jìn)行了酶促總?cè)ヌ腔?。N-聚糖被Genovis的PNGase F裂解，而O-聚糖可以與OglyZOR和SialEXO一起去除。。可以用8M尿素進(jìn)行洗脫；或使用活性O(shè)peRATOR酶進(jìn)行洗脫。青海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

Genvois展示了使用兩種zhiliao蛋白作為底物的OmniGLYZOR的性能：依那西普和促紅xibao生成素 （EPO）。甘肅用于自動(dòng)化系統(tǒng)的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究

ImpaRATOR 是一種 O-聚糖依賴(lài)性蛋白酶，可催化糖蛋白和糖肽中與糖基化絲氨酸或蘇氨酸殘基相鄰的肽鍵的水解。它切割用粘蛋白型O-聚糖修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基的N-末端，包括唾液酸化物種。粘蛋白型O-聚糖是ImpaRAT活性所必需的，該酶不會(huì)消化未修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基，也不會(huì)在糖蛋白的N-糖基化位點(diǎn)。該酶接受 O-聚糖結(jié)構(gòu)，包括唾液酸化he心 1 和he心 2 結(jié)構(gòu)以及 Tn 抗原。Genovis的ImpaRATOR 來(lái)源于銅綠假單胞菌，在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 97 kDa。甘肅用于自動(dòng)化系統(tǒng)的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究