海南高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶

由于蛋白質(zhì)的O-糖模式的異質(zhì)性和O-糖結(jié)構(gòu)的OpeRATOR特異性，形成了重疊的肽，從而可以獲得O-糖位點(diǎn)的完整圖譜為了進(jìn)行比較，相同材料的標(biāo)準(zhǔn)胰蛋白酶消化物， 顯示難以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR進(jìn)行O-糖位點(diǎn)定位：OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶，可消化絲氨酸和蘇氨酸糖基化位點(diǎn)的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。這會產(chǎn)生攜帶O-糖的糖肽，并能夠使用質(zhì)譜法進(jìn)行O-糖分析、O-糖肽圖譜以及中級分析。下面是OpeRATOR消解位點(diǎn)的示意圖。為了測試選擇性，將一系列 O-糖基化、N-糖基化和非糖基化蛋白與 GlycOCATCH 一起孵育：洗脫O-糖基化蛋白。海南高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶

糖蛋白性能測試：O-聚糖的巖藻糖基化參與功能上重要的聚糖表位的合成，例如血型抗原和劉易斯結(jié)構(gòu)。分析用這種復(fù)雜的聚糖結(jié)構(gòu)修飾的糖蛋白可能具有挑戰(zhàn)性，需要高效和特異性的酶工具。我們在許多糖基工程TNFR蛋白上測試了Genovis的FucosEXO，這些蛋白攜帶多達(dá)11個O-聚糖，這些O-聚糖以不同的鍵裝飾。我們將該活性與其他市售巖藻苷酶進(jìn)行了比較。FucosEXO 能夠在 1 小時內(nèi)對所有三種 TNFR 蛋白進(jìn)行去巖藻糖磺酸處理，而用其他巖藻糖酶處理導(dǎo)致部分去除巖藻糖或根本沒有去除。吉林瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)ImpaRATOR 酶不會消化未修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基，也不會在糖蛋白的N-糖基化位點(diǎn)。

Genovis的PNGase F（肽 N-糖苷酶 F）是一種糖酰胺酶，可水解多肽天冬酰胺與所有哺乳動物天冬酰胺連接復(fù)合物、雜交或高甘露糖寡糖的內(nèi)層 GlcNAc 之間的酰胺鍵。該酶用于MS分析前的樣品制備，以降低蛋白質(zhì)異質(zhì)性并實(shí)現(xiàn)游離的聚糖分析，并研究N-聚糖的功能作用。1. 對所有哺乳動物N-聚糖的高效水解；2.對多種糖蛋白具有活性；3.可固定在即用型離心柱產(chǎn)品形式；4. 自動化友好型，96孔板，用于高通量 N-糖去除。Genovis的ImpaRATOR 是一種 O-糖依賴性蛋白酶，可消化攜帶粘蛋白型。O-聚糖的蛋白質(zhì)，包括唾液酸化物質(zhì)、糖基化絲氨酸和 Thr 殘基的 N-末端。該酶產(chǎn)生攜帶 O-糖的糖肽，從而實(shí)現(xiàn) O-糖譜分析、位點(diǎn)占用測定和 O-糖肽圖譜以及使用 LC-MS 分析的中級方法。1. 特異性廣 - 接受多種 O-聚糖變體，包括唾液酸化物種；2. 可靠O-聚糖特異性蛋白酶 – 消化絲氨酸/蘇氨酸糖基化位點(diǎn)的 N 末端；3. 穩(wěn)健的消化，增強(qiáng)復(fù)雜生物制藥的表征。

水解O-聚糖的酶不會從變性中獲益，這就是為什么OmniGLYZOR色譜柱只能在天然條件下使用的原因。 OmniGLYZOR 試劑盒 Microspin 以含有足夠材料的試劑盒形式提供，可使5 × 50-100 μg 或 10 × 50-100 μg 糖蛋白去糖酸化。N-和O-連接聚糖的快速高效；與LC-MS兼容；完全去除聚糖，改進(jìn)基礎(chǔ)蛋白的分析；固定形式可提高酶與底物的比率，從而實(shí)現(xiàn)快速去糖基化。 IgdE酶(FabALACTICA?)和PNGaseF酶分別購自Genovis(馬薩諸塞州，美國)。用于水解糖蛋白上N-聚糖的凍干酶。Genovis的PNGase F 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 1000 或 5 x 1000 單位小瓶中，分別用于消化 1 mg 或 5 x 1 mg 糖蛋白。PNGase F去除N-糖，被用于MS分析的樣品制備，以降低蛋白質(zhì)的異質(zhì)性，分析游離的糖，并研究N-糖的功能作用。

ImpaRATOR 是一種 O-聚糖依賴性蛋白酶，可催化糖蛋白和糖肽中與糖基化絲氨酸或蘇氨酸殘基相鄰的肽鍵的水解。它切割用粘蛋白型O-聚糖修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基的N-末端，包括唾液酸化物種。粘蛋白型O-聚糖是ImpaRAT活性所必需的，該酶不會消化未修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基，也不會在糖蛋白的N-糖基化位點(diǎn)。該酶接受 O-聚糖結(jié)構(gòu)，包括唾液酸化he心 1 和he心 2 結(jié)構(gòu)以及 Tn 抗原。Genovis的ImpaRATOR 來源于銅綠假單胞菌，在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 97 kDa。OglyZOR 是一種內(nèi)切糖苷酶用于確認(rèn)O-糖的存在和降低樣品的異質(zhì)性。海南高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶

上海倍篤生物涵蓋藥物研發(fā)的全流程，抗體結(jié)構(gòu)域分析蛋白酶、蛋白聚糖分析水解酶等。海南高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶

GlycOCATCH用于純化粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。它是基于無活性的Genovis的OpeRATOR?酶，該酶經(jīng)過工程改造，可以高親和力結(jié)合O-糖基化蛋白和肽。GlycOCATCH的應(yīng)用包括O糖蛋白和肽的特異性富集或去除、糖組學(xué)、復(fù)雜樣品的研究和生物制藥的表征。1. 粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽的特異性富集；2. 可靠 - 高親和力結(jié)合;3. 快速且易于使用的工作流程。不需要輔助因子或特殊緩沖液。GalNAcEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila，在大腸桿菌中表達(dá)，帶有His標(biāo)簽，分子量為52 kDa。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式；2. 可以結(jié)合酶以提高效率；3. 適用于自動化工作流程； 4. 即用型 - 只需加水即可！用于水解糖蛋白上GalNAc殘基的凍干酶。Genovis的GalNAcEXO凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在2000單位的小瓶中，用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc殘基。海南高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶