安徽高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

Genovis 是一家瑞典生物技術(shù)公司，自2010年起，為生物制藥公司提供SmartEnzymes?工具酶。Genovis提供一系列獨(dú)特、快速且易于使用的酶學(xué)工具，主要用于生物制藥行業(yè)和學(xué)術(shù)界。 我們?cè)谌蚍秶鷥?nèi)提供創(chuàng)新的智能酶SmartEnzymes?，用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。您可以在我們的網(wǎng)站上“Application頁面”獲得更多應(yīng)用信息，如果您有興趣，可以和我們一起做一個(gè)“SmartStories”，也可以聯(lián)系我們。?GalNAcEXO 用于有效水解與糖蛋白（Tn 抗原）中的絲氨酸或蘇氨酸殘基相連的 α-N-乙酰半乳糖胺 （GalNAc）。安徽高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

與PNGase F類似，Genvois的OmniGLYZOR 水解 N-和粘蛋白型 O-聚糖：糖基化往往是異質(zhì)的，這使得對(duì)高度糖基化的生物zhiliao藥物的分析具有挑戰(zhàn)性。完整質(zhì)量數(shù)的確認(rèn)以及其他產(chǎn)品質(zhì)量屬性的表征受到不同糖型復(fù)雜性的阻礙，這就是為什么有效的聚糖去除工具簡化了此類分析的原因。 雖然 N-聚糖包含一個(gè)共同的結(jié)構(gòu)，并且可以通過 PNGase F 整體去除，但粘蛋白型 O-聚糖在結(jié)構(gòu)上更加多樣化，具有多個(gè)不同的he心。OmniGLYZOR含有固定化酶的混合物，能夠依次分解O-聚糖，以完全去除最常見的O-聚糖結(jié)構(gòu)（二唾液酸和單唾液酸基he心1和Tn抗原）。山東PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis曲妥珠單抗Fc N-糖可以表征游離N-糖以及去糖基化抗體的功能和結(jié)構(gòu)。

Genovis的ImpaRATOR? 和 OpeRATOR? - 兩種協(xié)同的作用：O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化區(qū)域O-聚糖位點(diǎn)的覆蓋率（圖3）。使用OpeRATOR鑒定對(duì)應(yīng)于所有13個(gè)O-聚糖位點(diǎn)的肽，而使用ImpaRATOR只能明確鑒定10個(gè)位點(diǎn)。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR （1） 具有更具選擇性的氨基酸序列偏好，此處由 S186 和 T245 位點(diǎn)缺乏消化來表明。此外，ImpaRATOR 在兩個(gè)相鄰的 O-糖基化氨基酸之間顯示出有限的裂解，如 S213 位點(diǎn)酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位點(diǎn)酶解肽的低強(qiáng)度所證明的那樣。在OpeRATOR酶解樣品（T184-S199和T200-H204;圖2b和d），而在ImpaRATOR消化的樣品中，具有漏裂的相應(yīng)肽（S184-H204）的強(qiáng)度更高。 雖然OpeRATOR顯示出更高的O-聚糖位點(diǎn)覆蓋率，但使用ImpaRATOR進(jìn)行消化可以表征O-聚糖結(jié)構(gòu)，包括唾液酸化物種。例如，條形圖插入顯示了兩種糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖種類。這應(yīng)該與使用OpeRATOR的消化進(jìn)行比較，在OpeRATOR中，必須去除唾液酸才能產(chǎn)生酶活性，這意味著有關(guān)唾液酸化的信息丟失?？偠灾?，ImpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有關(guān)聚糖組成和 O-聚糖位點(diǎn)的完整信息。

G0F 抗體在 30 分鐘內(nèi)：半乳糖的存在會(huì)影響zhiliao性抗體引發(fā)的效應(yīng)功能，為了研究抗體的作用方式，可能需要徹底去除半乳糖殘留物。Genovis的GalactEXO Immobilized 的 β1-4 半乳糖苷酶活性在曲妥珠單抗上使用 30 分鐘孵育證明。genovis的GalactEXO Immobilized 由強(qiáng)大的 GalactEXO 酶組成，該酶固定在瓊脂糖珠上，并以易于使用的微離心柱形式格式化。GalactEXO是β-半乳糖苷酶的混合物，可有效去除N-和O-糖基化蛋白上的半乳糖殘基。使用FabRICATOR?將抗體消化成亞基，并使用LC-MS進(jìn)行分析。使用 GalactEXO 凍干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的轉(zhuǎn)變，但后者在z終制劑中沒有留下酶。沒有任何半乳糖基化結(jié)構(gòu)表明半乳糖殘基完全水解，因此LC-MS數(shù)據(jù)中任何剩余的次要峰都可以注釋為亞基的糖化。沒有任何半乳糖基化結(jié)構(gòu)表明半乳糖殘基完全水解，因此LC-MS數(shù)據(jù)中任何剩余的次要峰都可以注釋為亞基的糖化。將依那西普與GalactEXO固定化孵育60分鐘。

C1抑制劑的去糖基化：在O-糖基化生物制藥的生產(chǎn)過程中，由于he心GalNAc殘基的加工不完全，可能會(huì)出現(xiàn)Tn抗原。這表現(xiàn)為具有 203 Da HexNAc 單位差異的重復(fù)質(zhì)量位移。為了確認(rèn) Tn 抗原的存在，可以應(yīng)用以下工作流程，此處在重度（26 個(gè)位點(diǎn)）O-糖基化 C1 抑制劑上演示。首先，使用PNGaseF修剪糖蛋白的N-糖，使用Genovis的OglyZOR和SialEXO修剪he心1 O-糖。依那西普的磷性能測(cè)試?：依那西普是另一種具有挑戰(zhàn)性的生物制藥模型分子，攜帶 13 個(gè) O-聚糖位點(diǎn)，其中平均 9 至 10 個(gè)位點(diǎn)被占用。PNGase F是一種非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑戰(zhàn)性，現(xiàn)有的O-糖釋放化學(xué)方法不太適合下游分析。上海瑞典GenovisPNGaseF去糖基化酶疾病機(jī)理研究

用于糖蛋白去唾液酸化的凍干酶混合物SialEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 個(gè)單位的小瓶中。安徽高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

GalNAcEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的GalNAcEXO酶，用于水解糖蛋白上的GalNAc殘基，而不會(huì)用酶污染制劑。Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3. 終樣品中不含酶。用于水解離心柱中糖蛋白上的Genovis的GalNAc殘基的固定化酶。GalNAcEXO 酶是一種n 外α-N-乙酰半乳糖氨酸酶，可快速有效地水解來自天然 O-糖蛋白的 z es GalNAc 殘基。 該酶來源于Akkermansia muciniphila，在大腸桿菌中表達(dá)，帶有His標(biāo)簽，分子量為52 kDa。 該酶在 Tn 抗原和 α1-3 連接末端 GalNAcs 上均顯示活性。在這里，我們展示了如何使用GalNAcEXO來表征復(fù)雜的生物制藥。安徽高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究