北京IdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

Genovis的FabDELLO在鉸鏈上方的單個(gè)位點(diǎn)消化人IgG1，并在兩小時(shí)內(nèi)生成均質(zhì)的Fab和Fc片段（Genovis的IdeS在鉸鏈區(qū)下方的單個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行消化）。生成的片段可用于結(jié)晶和高階結(jié)構(gòu)（HOS）的NMR研究、結(jié)合研究等。突變的鉸鏈區(qū)域是zhiliao性候選抗體的常見(jiàn)修飾，以降低效應(yīng)器功能。這些突變可能會(huì)影響具有高底物特異性的酶的抗體消化效率。例如，高度特異性的FabRICATOR（IdeS）消化效率對(duì)含有常見(jiàn)LALA突變的抗體產(chǎn)生負(fù)面影響。FabDELLO作用于人IgG1鉸鏈上方的單個(gè)暴露賴氨酸殘基，能夠?qū)哂型蛔冦q鏈區(qū)域的抗體進(jìn)行流行的中級(jí)LC-MS分析。例如，用FabDELLO消化市售的IgG1risankizumab，在下鉸鏈區(qū)域具有LALA突變，并通過(guò)反相LC-MS進(jìn)行分析。消化產(chǎn)生均勻的Fab和Fc片段。用20mMDTT還原片段，用于中級(jí)LC-MS分析，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生了均相的Fc/2、輕鏈（LC）和Fd片段。用FabDELLO消化后觀察到的定義峰顯示出均勻的片段生成和酶的穩(wěn)健性能?？上q鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的 F（ab'）2 和 Fc 片段。北京IdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

當(dāng)你應(yīng)用像肽圖這樣的方法時(shí)，你可以從Genovis中級(jí)方法中獲得的信息量就沒(méi)有那么多了。一個(gè)主要的區(qū)別是你不能像在肽水平上那樣將修改定位到單個(gè)氨基酸。然而，中級(jí)分析比肽圖譜具有快速和簡(jiǎn)單的巨大優(yōu)勢(shì)，因?yàn)樾枰治龅纳V峰要少得多，數(shù)據(jù)處理任務(wù)要簡(jiǎn)單得多。此外，在中級(jí)實(shí)驗(yàn)中，手工實(shí)驗(yàn)步驟要少得多，F(xiàn)abALACTICA（IdeS）酶切消化方法不需要針對(duì)不同的人體IgG1進(jìn)行優(yōu)化。一旦在氨基酸水平上進(jìn)行了PTM表征，我們非常認(rèn)為中級(jí)表征肽圖的一種補(bǔ)充方法，可以在更常規(guī)的基礎(chǔ)上應(yīng)用。中級(jí)分析更適用于高通量或監(jiān)測(cè)類型的方法，并可用于支持肽圖分析。江西GlycINATORIdeS蛋白酶抗體酶切含有富含甘氨酸的連接子的各種mAb片段進(jìn)行詳細(xì)表征的中級(jí)方法。

Genovis的FabRICATOR Fab2 （IdeS）試劑盒可消化兔 IgG，但要在親和步驟中捕獲 Fc 片段，您需要另一種填料，而不是試劑盒中通常包含的 CaptureSelect? Fc。如果您對(duì)處理兔IgG感興趣，請(qǐng)聯(lián)系Genovis團(tuán)隊(duì)，我們將在FabRICATOR Fab2試劑盒中提供與兔Fc相容的樹脂色譜柱。使用FabRICATOR的抗體消化的簡(jiǎn)單性、速度和可重復(fù)性也意味著這種酶可以被用于質(zhì)量控制應(yīng)用。 QC方法需要執(zhí)行簡(jiǎn)單，易于訓(xùn)練，高度可重復(fù)，數(shù)據(jù)易于分析，這正是您使用FabRICATOR所得到的。 因?yàn)樗m用于一系列不同的IgG，這也意味著使用FabRICATOR進(jìn)行QC工作的客戶將能夠在未來(lái)的產(chǎn)品中使用它。 這顯示了這種酶在抗體消化中是多么的有效。

與IdeS不同，為了獲得更均勻的度拉糖肽融合蛋白的消化產(chǎn)物，用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白質(zhì)消化該蛋白質(zhì)，該蛋白由與瓊脂糖珠共價(jià)偶聯(lián)的GlySERIAS酶組成。通過(guò)將酶偶聯(lián)到樹脂上，可以增加酶與蛋白質(zhì)的比率，從而可以進(jìn)一步加速反應(yīng)，以獲得更完整的連接子消化。此外，該酶不會(huì)存在于樣品制備中，可能會(huì)干擾樣品分析。為了進(jìn)行比較，度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化過(guò)夜，或用GlySERIAS凍干1小時(shí)并在37°C下過(guò)夜消化。 為了降低樣品復(fù)雜性，使用內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR凍干去除Fc聚糖，并減少鏈間二硫鍵。通過(guò)反相LC-MS對(duì)樣品的分析表明，GlySERIAS Immobilized幾乎完全消化了Fc結(jié)構(gòu)域中的連接子，留下了接近均質(zhì)的Fc/2產(chǎn)物，其中含有來(lái)自連接子的一個(gè)絲氨酸殘基。用 GlySERIAS 凍干 1 小時(shí)或過(guò)夜消化，兩者都會(huì)產(chǎn)生幾種 Fc 產(chǎn)物，并附著不同數(shù)量的絲氨酸和甘氨酸殘基。GLP-1肽在所有三個(gè)樣品中以兩種變體存在。使用GlySERIAS固定化消化的均質(zhì)Fc/2能夠詳細(xì)研究特定于Fc區(qū)域的質(zhì)量屬性。此外，在樣品中未觀察到干擾分析的酶峰。作為補(bǔ)充，F(xiàn)c/2 產(chǎn)物在用 GlySERIAS 凍干消化后殘留部分連接子，有助于研究位于 GS 連接子的修飾。度拉糖肽的連接子中的大量甘氨酸殘基為GlySERIAS提供了許多不同的潛在消化位點(diǎn)。

與IdeS不同，Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶，可在鉸鏈上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人IgA1，而IgASAPSub1+2特異性消化鉸鏈上方的IgA1和IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的Fab和Fc片段。IgASAP酶能夠生成完整的單價(jià)Fab片段以及IgA的中級(jí)分析，從而促進(jìn)IgA的表征，例如，在疫苗、zhiliao和診斷的開發(fā)過(guò)程中。獨(dú)特的酶促工具，可實(shí)現(xiàn)IgA的中級(jí)表征和質(zhì)量控制；生成均相的Fab和Fc片段，并保留免疫反應(yīng)性；高度特異性–人IgA鉸鏈上方的一個(gè)消化位點(diǎn)。Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供。云南GingisKHANIdeS蛋白酶抗體酶切

融合蛋白的中級(jí)分析既可以降低整體樣品的復(fù)雜性，又可以對(duì)翻譯后修飾進(jìn)行結(jié)構(gòu)域特異性鑒定和監(jiān)測(cè)。北京IdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

與IdeS不同，Romiplostim 由四個(gè)相同的血小板生成素 （TPO） 受體結(jié)合肽和一個(gè) Fc 片段組成，通過(guò)柔性聚甘氨酸序列連接在一起。與度拉糖肽類似，用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下過(guò)夜，或用 GlySERIAS 凍干 1 小時(shí)并在 37°C 下過(guò)夜消化該蛋白質(zhì)。 鏈間二硫鍵被還原，以便于通過(guò)反相LC-MS進(jìn)行以下分析。與度拉糖肽的觀察結(jié)果類似，用固定化酶消化產(chǎn)生均質(zhì)的 Fc/2，剩下一個(gè)連接子殘基，此處為甘氨酸殘基。這有助于識(shí)別專門位于Fc區(qū)域的修改。用凍干酶消化 1 小時(shí)得到 Fc/2，剩余 4 個(gè)甘氨酸殘基和少量的 Fc/2 仍與一個(gè) TPO 肽連接。另一方面，這使得研究 Fc/2 和第yi個(gè)肽之間的連接區(qū)域成為可能，而不會(huì)受到第二個(gè)肽的干擾。用 GlySERIAS 凍干液過(guò)夜消化產(chǎn)生 2 個(gè) Fc/2 變體，分別剩下 4 個(gè)和 1 個(gè)甘氨酸殘基。根據(jù)消化時(shí)間的不同，使用凍干產(chǎn)物釋放的肽以五或七種變體存在，接頭中殘留的甘氨酸殘基數(shù)量不同，而使用固定化產(chǎn)物釋放的肽以四種變體存在。北京IdeS蛋白酶蛋白組學(xué)