廣東PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究

對Genovis的ImpaRATOR處理的樣品的分析表明，ImpaRATOR很好地消化了所有三種底物并產(chǎn)生了相似的糖肽，但預(yù)期的聚糖種類不同。用ImpaRATOR處理的樣品比其他樣品含有更多的變異，因?yàn)槊糠N肽都檢測到多種聚糖結(jié)構(gòu)。觀察到的聚糖種類主要是單唾液酸化和二唾液酸化he心1結(jié)構(gòu)，這與依那西普的預(yù)期一致。用ImpaRATOR或OpeRATOR消化的SialEXO預(yù)處理樣品均產(chǎn)生具有裸核1結(jié)構(gòu)的肽，但攜帶在ImpaRATOR消化樣品中觀察到的Tn抗原的肽T205-P207除外。依那西普用 SialEXO 和 GalactEXO 預(yù)處理，然后用 ImpaRATOR 消化，得到含有 Tn 抗原的肽。總之，這些數(shù)據(jù)證明了ImpaRATOR的高聚糖底物接受度。ImpaRATOR處理的依那西普顯示出與相應(yīng)的去唾液酸化OpeRATOR處理樣品略有不同的消化模式。例如，OpeRATOR在兩個O-糖基化氨基酸之間消化的效率比ImpaRATOR更有效。具有完整唾液酸或Tn抗原的依那西普被OpeRATOR消化得非常弱（數(shù)據(jù)未顯示）。ImpaRATOR酶產(chǎn)生攜帶 O-糖的糖肽。廣東PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究

由于蛋白質(zhì)的O-糖模式的異質(zhì)性和O-糖結(jié)構(gòu)的OpeRATOR特異性，形成了重疊的肽，從而可以獲得O-糖位點(diǎn)的完整圖譜為了進(jìn)行比較，相同材料的標(biāo)準(zhǔn)胰蛋白酶消化物， 顯示難以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR進(jìn)行O-糖位點(diǎn)定位：OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶，可消化絲氨酸和蘇氨酸糖基化位點(diǎn)的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。這會產(chǎn)生攜帶O-糖的糖肽，并能夠使用質(zhì)譜法進(jìn)行O-糖分析、O-糖肽圖譜以及中級分析。下面是OpeRATOR消解位點(diǎn)的示意圖。天津N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究GalNAcEXO 在 pH 值 6.0 至 7.6 范圍內(nèi)具有高度活性，來源于Akkermansia muciniphila。

為了證明Genovis的PNGase F凍干和PNGase F固定在各種底物上的去糖基化能力，用PNGase F凍干或PNGase F固定化處理了一系列糖蛋白。使用天然反應(yīng)條件在一小時內(nèi)有效去除曲妥珠單抗和依那西普上的所有N-糖，以及西妥昔單抗上的Fc-糖。當(dāng)加入RapiGest?并在變性條件下進(jìn)行反應(yīng)時，西妥昔單抗的所有N-聚糖（包括Fab-聚糖）在PNGase F固定化10分鐘內(nèi)完全去除，PNGase F固定化15分鐘內(nèi)完全去除。在變性反應(yīng)條件下，PNGase F 在 30 分鐘內(nèi)成功將更復(fù)雜的 F 融合蛋白阿巴西普和阿柏西普去糖基化。使用變性和還原反應(yīng)條件，將常用的糖蛋白標(biāo)準(zhǔn)品RNase B在10或15分鐘內(nèi)完全去糖基化，分別使用PNGase F凍干或PNGase F固定化。在天然和變性條件下生成的去糖基化樣品與LC-MS分析兼容。

用于糖蛋白去唾液酸化的凍干酶混合物。Genovis的SialEXO 凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在 2000 個單位的小瓶中，用于 2 mg 糖蛋白的去唾液酸化。1. 用于方法開發(fā)的靈活格式；2. 可以結(jié)合酶以提高效率；3. 適用于自動化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可。用于水解ɑ2-3-連接唾液酸的凍干酶。 Genovis的SialEXO 2-3凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在500個單位的小瓶中，用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。 與唾液酸酶混合物 SialEXO 相比，SialEXO 2-3 是一種 α2-3 特異性唾液酸酶，允許對 α2-3 連接的唾液酸進(jìn)行靶向分析。O-和N-糖基化蛋白的高效α2-3去唾液酸化可以在1小時內(nèi)實(shí)現(xiàn)。在天然條件下使用OmniGLYZOR Microspin色譜柱，可在3小時內(nèi)有效去除C1 抑制劑O-聚糖。

Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物，用于有效水解天然 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接巖藻糖殘基。它是 N-和 O-糖蛋白的聚糖結(jié)構(gòu)分析以及寡糖的外切糖苷酶陣列的寶貴工具。1. 高效α-巖藻糖苷酶混合物 – 快速去除 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接的巖藻糖；2. 可靠的酶解增加了對外切糖苷酶陣列的信心；3. 可固定在即用型離心柱中。用于糖蛋白去氟糖基化的凍干酶。Genovis的FucosEXO凍干劑以凍干粉的形式提供，裝在2000單位的小瓶中，用于2mg糖蛋白的去碳基化。使用 GalactEXO 凍干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的轉(zhuǎn)變。湖北高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發(fā)

親和純化微離心柱，SialEXO 凍干 200 單位，OpeRATOR 凍干 200 單位。廣東PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究

genovis分析依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖：為了確認(rèn)依那西普和曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數(shù)據(jù)，進(jìn)行了釋放的N-聚糖分析。標(biāo)記的N-聚糖的分離清楚地表明了依那西普和曲妥珠單抗上半乳糖的丟失，如半乳糖基化聚糖物種的信號丟失所示。該酶是一種有價值的工具，可降低樣品異質(zhì)性，用于分析攜帶α連接的 GalNAc 殘基作為未成熟截短he心 1 的復(fù)雜 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-連接的 GalNAc；2. 實(shí)現(xiàn)完全糖基去除，以改善蛋白質(zhì)表征；3. 可固定在即用型離心柱中。廣東PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究