PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

Genovis的PNGase F Automation 含有以自動化友好的 96 孔板形式凍干的 PNGase F 酶。它能夠?qū)崿F(xiàn)高通量 N-糖去除，從而簡化一系列糖蛋白底物的下游分析。根據(jù)您的工作流程要求和樣品可用性。PNGase F Automation 可在 96 孔板中凍干，用于 96 x 5 μg 或 96 x 50 μg 糖蛋白上的 N-糖自動水解。1. 實現(xiàn)自動化高通量樣品處理；2. 可同時消解多達 96 個樣品；3. 兩種選擇可用于不同樣品量的消解;4. 即用型 - 只需添加您的樣品即可。用于消化粘蛋白型O-糖蛋白和肽（包括唾液酸化O-聚糖）的凍干酶。Genovis的ImpaRATOR 凍干劑以凍干粉末的形式提供，裝在 2000 單位小瓶中，用于消化 2 mg O-糖基化蛋白。1. 用于方法開發(fā)的靈活產(chǎn)品形式；2.以結(jié)合酶以提高效率；3. 適用于自動化工作流程；4. 即用型 - 只需加水即可！為了測試選擇性，將一系列 O-糖基化、N-糖基化和非糖基化蛋白與 GlycOCATCH 一起孵育：洗脫O-糖基化蛋白。PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

該酶適用于在釋放的聚糖結(jié)構(gòu)上修剪半乳糖，用于外切糖苷酶陣列，或用于生成具有均相 G0/G0F 聚糖譜的抗體。1. 高效β-半乳糖苷酶混合物 – 快速去除末端 β1-3 和 β1-4-連接的半乳糖；2. 有助于在亞基水平上識別糖基化修飾；3. 可固定在即用型離心柱中。Genovis的GalactEXO是一種外切糖苷酶，含有β-半乳糖苷酶的混合物，可有效去除N-和O-糖基化蛋白或寡糖上的半乳糖殘基。該混合物由兩種半乳糖苷酶組成，可高效水解 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖酶。GalactEXO在天然條件下水解糖蛋白，并在5.5至7.5的寬pH值范圍內(nèi)顯示活性。PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究GalactEXO在天然條件下水解糖蛋白，并在5.5至7.5的寬pH值范圍內(nèi)顯示活性。

Genovis的ImpaRATOR? 和 OpeRATOR? - 兩種協(xié)同的作用：O-糖蛋白酶。使用ImpaRATOR或OpeRATOR消化后分析依那西普重糖基化區(qū)域O-聚糖位點的覆蓋率（圖3）。使用OpeRATOR鑒定對應(yīng)于所有13個O-聚糖位點的肽，而使用ImpaRATOR只能明確鑒定10個位點。ImpaRATOR 可能比 OpeRATOR （1） 具有更具選擇性的氨基酸序列偏好，此處由 S186 和 T245 位點缺乏消化來表明。此外，ImpaRATOR 在兩個相鄰的 O-糖基化氨基酸之間顯示出有限的裂解，如 S213 位點酶解肽的缺乏以及 T200 和 T217 位點酶解肽的低強度所證明的那樣。在OpeRATOR酶解樣品（T184-S199和T200-H204;圖2b和d），而在ImpaRATOR消化的樣品中，具有漏裂的相應(yīng)肽（S184-H204）的強度更高。 雖然OpeRATOR顯示出更高的O-聚糖位點覆蓋率，但使用ImpaRATOR進行消化可以表征O-聚糖結(jié)構(gòu)，包括唾液酸化物種。例如，條形圖插入顯示了兩種糖肽 T184-V198 和 T205-P207 的 O-聚糖種類。這應(yīng)該與使用OpeRATOR的消化進行比較，在OpeRATOR中，必須去除唾液酸才能產(chǎn)生酶活性，這意味著有關(guān)唾液酸化的信息丟失?？偠灾?，ImpaRATOR 和 OpeRATOR 酶共同提供了有關(guān)聚糖組成和 O-聚糖位點的完整信息。

蛋白質(zhì)的N-糖基化特征是一個關(guān)鍵的質(zhì)量屬性。它會影響生物制藥的安全性和有效性，因此需要在開發(fā)和生產(chǎn)過程中進行表征和監(jiān)測。常見的聚糖分析工作流程是用PNGase F釋放N-聚糖，然后用熒光標記物（如2-AB、2-AA、普魯卡因胺或RapiFluor-MS?（沃特世公司））標記生成的聚糖。然后使用HILIC-HPLC或毛細管電泳分離標記的聚糖，以表征和定量不同的聚糖結(jié)構(gòu)。 在這里，使用游離聚糖方法分析zhiliao性抗體曲妥珠單抗、Fc-融合蛋白依那西普和糖蛋白RNase B的N-聚糖。曲妥珠單抗和依那西普在天然條件下在37°C下用Genvois的PNGase F去糖基化1小時，而RNase B需要變性和還原才能完全去糖基化。因此，在50°C下用PNGase F去糖基化10分鐘之前，用RapiGest? SF表面活性劑（沃特世公司）和TCEP處理RNase B。 用RapiFluor-MS標記所得游離的聚糖，并通過HILIC UPLC-FLD-MS進行分析。O-糖基化生物制藥（如依那西普）表征：PNGase F、OglyZOR。

用于水解β1-3,4-連接半乳糖的固定化酶在離心柱中的糖蛋白上。Genovis的GalactEXO固定化離心柱含有與瓊脂糖珠共價偶聯(lián)的GalactEXO酶，用于糖蛋白上β1-3,4-連接半乳糖的水解，而不會用酶污染z終制劑。Microspin 色譜柱可用于水解 5 或 10 x 0.5 mg 糖蛋白。1. 易于使用的離心柱；2. 提高酶與底物的比例，提高消化效率；3. z終樣品中不含酶。GalactEXO 酶來源于 Akkermansia muciniphila 并重組表達，可有效水解 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖。GalactEXO微離心柱經(jīng)過格式化，可在30-60分鐘內(nèi)水解0.5mg糖蛋白中的半乳糖。GlycOCATCH的應(yīng)用包括O糖蛋白和肽的特異性富集或去除、糖組學、復(fù)雜樣品的研究和生物制藥的表征。重慶N-聚糖水解酶PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖。PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究

genovis分析依那西普和曲妥珠單抗游離聚糖：為了確認依那西普和曲妥珠單抗中半乳糖損失的LC-MS數(shù)據(jù)，進行了釋放的N-聚糖分析。標記的N-聚糖的分離清楚地表明了依那西普和曲妥珠單抗上半乳糖的丟失，如半乳糖基化聚糖物種的信號丟失所示。該酶是一種有價值的工具，可降低樣品異質(zhì)性，用于分析攜帶α連接的 GalNAc 殘基作為未成熟截短he心 1 的復(fù)雜 O-糖蛋白。1. 高效 α-N-乙酰半乳糖胺酶 – 快速、完全去除 Tn-抗原和 α1-3-連接的 GalNAc；2. 實現(xiàn)完全糖基去除，以改善蛋白質(zhì)表征；3. 可固定在即用型離心柱中。PNGaseF去糖基化酶疾病機理研究