甘肅IdeS蛋白酶蛋白組學

上海倍篤生物科技有限公司（簡稱“倍篤生物”），由中國科學院及生物醫(yī)藥產業(yè)界人士，于2018年1月共同創(chuàng)立。公司代理多個品牌的儀器、試劑及耗材（如Genovis的IdeS酶），遵守相關法規(guī)要求，如cGMP規(guī)范、ISO13485質量管理體系認證等，致力于為診斷領域如分子診斷及病原微生物檢測研發(fā)等，藥物研發(fā)領域如細胞基因藥物、核酸藥物、抗體藥物、干細胞及外泌體研究等客戶提供合規(guī)、高質量物料及專業(yè)服務，以期與客戶共同協作，加快研發(fā)及生產進度，為客戶提供更多價值。GingisKHAN用于LC-MS表征基于抗體的生物藥研究。甘肅IdeS蛋白酶蛋白組學

與IdeS不同，度拉糖肽由兩個胰高xue糖素樣肽-1 （GLP-1） 分子組成，它們通過柔性 GS 接頭連接到人 IgG4 的 Fc 區(qū)域。為了分別研究肽和 Fc 區(qū)域，從而鑒定結構域特異性 PTM，用 Genovis的GlySERIAS 在 37°C 下凍干消化度拉糖肽 1 小時。為了降低樣品復雜性，使用內切糖苷酶GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖，并用DTT還原鏈間二硫鍵。反相LC-MS對樣品的分析表明，使用GlySERIAS進行連接子消化后，肽從Fc區(qū)域完全去除。連接子中的大量甘氨酸殘基為GlySERIAS提供了許多不同的潛在消化位點，這就是為什么Fc/2和GLP-1肽都被檢測為幾種變體，其中不同數量的甘氨酸和絲氨酸殘基仍然連接。此外，還鑒定了GLP-1肽的氧化。盡管GlySERIAS同時在多個位點進行消化，但一式三份的酶解在獲得的不同Fc/2變體的相對量中顯示出可重復的結果。重慶FabALACTICAIdeS蛋白酶工藝開發(fā)和潛在生物制藥穩(wěn)定性研究相關的大量樣品。

Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶 可用于 IgG 的所有人類亞類以及人源化和嵌合 IgG。該酶對其他物種的 IgG 也有活性，包括來自大鼠、猴子、兔子和綿羊的某些類別的 IgG。因此，FabRICATOR的高特異性在某些情況下會使其對鉸鏈區(qū)域的突變敏感，并損害酶活性。來自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成，與 FabRICATOR 相比，FabRICATOR Z 在消化這些 IgG 方面具有更高的效率。然而，小鼠 IgG1 在鉸鏈下方具有不同的序列，并且不被 FabRICATOR Z 消化。對于這種抗體種類，FabULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段。

對于涉及完整Fab或Fc抗體片段的應用，需要在抗體鉸鏈處進行消化。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等傳統酶可用于生成 Fab 片段，但非特異性酶活性需要仔細優(yōu)化，以極大限度地降低多個消化位點的風險。Genovis的SmartEnzymes IgG 蛋白酶 GingisKHAN 和 FabALACTICA 具有一個消化位點，可從人 IgG1 生成均質的 Fab 和 Fc 抗體片段。生成的片段可用于結晶和高階結構 （HOS） 的 NMR 研究、結合研究等。在這里，我們提出了獲得完整Fab和Fc抗體片段的不同策略。所得片段顯示 GingisKHAN 的有效消化，用于生成完整的 Fab 片段或從依那西普上的融合 TNFR 結構域中分離 Fc。由于 GingisKHAN 的特異性消化依賴于 IgG 的天然折疊，因此在變性條件下特異性受到負面影響。為了使用SDS-PAGE分析消解效率，在加入SDS上樣緩沖液之前，停止在分析樣品中加入碘乙酰胺的反應。Genovis同時提供IdeS酶的純化試劑盒。FabRICATOR （IdeS） 是一種 IgG 特異性半胱氨酸蛋白酶。

大多數zhiliao性抗體都攜帶人IgG1骨架，雙特異性和多特異性形式的開發(fā)正在迅速增加。此類抗體的分析需要特異性酶來表征特性，例如單價結合、二硫鍵擾亂和配對Fc糖基化。傳統方案包括使用木瓜蛋白酶和Lys-C的酶消化，這需要優(yōu)化以極大限度地減少過度消化并獲得足夠的產量。Genovis的FabDELLO與IdeS酶具有不同的特異性，它在鉸鏈上方的單個位點消化人IgG1，并產生完整的Fab和Fc片段。為了證明FabDELLO的特異性活性，通過非還原SDS-PAGE消化和分析了IgG1和Fc融合蛋白的選擇。所有底物均實現了完全消化，包括具有其他困難的LALA和LFLE突變的IgG1。FabDELLO酶在底物上的精確和有效性能驗證了其在生物制藥開發(fā)中的用途?？稍阢q鏈上方的一個特定位點消化人 IgA1，產生完整且均質的 Fab 和 Fc 片段。河北IgGZEROIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

GingisKHAN Fab Kit進行人IgG1（如曲妥珠單抗）的消化和抗體片段的后續(xù)純化。甘肅IdeS蛋白酶蛋白組學

與IdeS不同，在蛋白質zhiliao藥物的質量控制過程中，詳細分析和識別質量屬性非常重要。對于具有柔性連接子的融合蛋白療法，這包括確認連接蛋白的質量以及蛋白質接頭的質量。使用 Genovis的GlySERIAS 的連接子酶切可以通過分離連接的蛋白質結構域來幫助這種質量控制。然而，連接子中的大量甘氨酸殘基提供了酶的許多潛在消化位點，導致連接子內多個位點同時水解。消化的產物通常由連接蛋白的幾種變體組成，并保留不同程度的連接子。雖然觀察到的異質性通常不會對蛋白質亞基的詳細表征產生負面影響，但有助于直接表征連接子，但有時需要更均勻的消化產物來詳細分析單個蛋白質結構域。甘肅IdeS蛋白酶蛋白組學