廣東FabRICATORIdeS蛋白酶

IgA 消化酶的 IgASAP 家族特異性消化血清和分泌型人 IgA 以生成 Fab 和 Fc 片段。IgASAP Sub1 特異性消化人 IgA1，而 IgASAP Sub1+2 同時(shí)消化人 IgA1 和 IgA2m1。 Sub1+2 特異性消化鉸鏈上方的 IgA1 和 IgA2m1。兩種酶都產(chǎn)生完整且均質(zhì)的 Fab 和 Fc 片段。為了獲得純和完整的Fab片段，使用Genovis的GingisKHAN Fab Kit進(jìn)行人IgG1的消化和抗體片段的后續(xù)純化。通過(guò)與 GingisKHAN 孵育，然后在 CaptureSelect? 人 CH1 離心柱上親和純化，在曲妥珠單抗上證明了完整的片段生成。樣品的酶和Fc部分存在于色譜柱的流通中，F(xiàn)ab很容易通過(guò)降低pH洗脫。使用該試劑盒，可以制備 0.5 mg 至 2 mg 人 IgG1 的 Fab 片段。Genovis同時(shí)提供IdeS酶的純化試劑盒。FabRICATOR（IdeS）固定在磁珠上，可同時(shí)快速自動(dòng)消化多種抗體，促進(jìn)中級(jí)表征工作流程。廣東FabRICATORIdeS蛋白酶

與IdeS不同，Genovis的GingisREX（RgpB）是一種精氨酸特異性蛋白酶，可消化精氨酸殘基的C末端蛋白質(zhì)，包括難以與其他酶消化的Arg-Pro鍵。該酶可用于肽圖分析、從頭肽測(cè)序和翻譯后修飾分析。精氨酸殘基的特異性C-末端消化；在其他困難的精氨酸-脯氨酸序列中可靠消化；產(chǎn)生更長(zhǎng)的肽-提高序列覆蓋率。GingisREX是一種半胱氨酸蛋白酶，可特異性地消化肽鍵C末端到精氨酸殘基，包括與脯氨酸相連的精氨酸。半胱氨酸是酶活性所必需的。與胰蛋白酶消化相比，可生成更長(zhǎng)的肽，胰蛋白酶消化可以通過(guò)高分辨率質(zhì)譜進(jìn)行分離和鑒定。這為自下而上方法的樣品制備提供了更多選擇，以實(shí)現(xiàn)替代的酶解曲線和更高的序列覆蓋率。GingisREX在賴氨酸上沒(méi)有活性，通常使用Arg-C觀察到。該酶在5.0-9.0的寬pH值范圍內(nèi)具有活性，它需要半胱氨酸并被鹽酸胍抑制。該酶是從牙齦卟啉單胞菌中純化的。黑龍江IdeS蛋白酶抗體酶切并通過(guò)反相LC-MS進(jìn)行分析，消化產(chǎn)生均勻的Fab和Fc片段。

一些應(yīng)用（如結(jié)合研究）具有高度靈敏度，因此在制備中需要不含殘留酶的純抗體片段。因此，Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供，可快速輕松地生成均質(zhì) F（ab'）2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR （IdeS），用于制備來(lái)自多種 IgG 的 F（ab'）2 和 Fc 片段（對(duì)于兔 IgG，請(qǐng)咨詢），而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 試劑盒進(jìn)行處理 。 為了生成和純化完整的 F（ab'）2 和 Fc/2 片段，使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒處理曲妥珠單抗，并通過(guò) SDS-page 進(jìn)行分析。首先，在室溫下在FabRICATOR固定化離心柱上消化抗體15分鐘，然后進(jìn)行短離心步驟。在 CaptureSelect ? 離心柱上純化 F（ab'）2 片段，并通過(guò)降低 pH 值，然后立即調(diào)整回中性 pH 值，一步洗脫結(jié)合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒從酶切到收集片段的過(guò)程大約需要 1 小時(shí)

Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶 可用于 IgG 的所有人類亞類以及人源化和嵌合 IgG。該酶對(duì)其他物種的 IgG 也有活性，包括來(lái)自大鼠、猴子、兔子和綿羊的某些類別的 IgG。因此，F(xiàn)abRICATOR的高特異性在某些情況下會(huì)使其對(duì)鉸鏈區(qū)域的突變敏感，并損害酶活性。來(lái)自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成，與 FabRICATOR 相比，F(xiàn)abRICATOR Z 在消化這些 IgG 方面具有更高的效率。然而，小鼠 IgG1 在鉸鏈下方具有不同的序列，并且不被 FabRICATOR Z 消化。對(duì)于這種抗體種類，F(xiàn)abULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段。鉸鏈上方的單個(gè)暴露賴氨酸殘基,生成的片段可用于結(jié)晶和高階（HOS）NMR研究、結(jié)合研究等。

Genovis提供具有低水平內(nèi)Du素的FabRICATOR（IdeS）凍干酶，用于IgG的鉸鏈以下消化。FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATORLowEndotoxin以凍干粉的形式提供兩種不同規(guī)格：2000和5000單位，分別用于消化2mg或5mgIgG。該產(chǎn)品配方每瓶的內(nèi)Du素含量較低，2000單位小瓶的內(nèi)Du素含量為<0.04EU/瓶，5000單位小瓶的內(nèi)Du素含量為<0.10EU/瓶。有效消化，內(nèi)DU素水平低；適用于靈敏的體內(nèi)或基于細(xì)胞的檢測(cè)。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復(fù)雜性并明顯簡(jiǎn)化IgA分析表征的寶貴工具。湖南GlySERIASIdeS蛋白酶

IgASAP Sub1+2 特異性消化鉸鏈上方的 IgA1 和 IgA2m1，產(chǎn)生完整且均質(zhì)的 Fab 和 Fc 片段。廣東FabRICATORIdeS蛋白酶

Genovis除了提供IdeS酶以外，還提供很多種特異性蛋白酶，如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE）。IgdE 在鉸鏈正上方的一個(gè)特定位點(diǎn)消化人 IgG1，產(chǎn)生完整的 Fab 和 Fc 片段的均質(zhì)池。它在pH值和鹽濃度范圍內(nèi)具有活性，不需要任何還原劑或輔助因子。因此，與許多其他常用的蛋白酶相比，F(xiàn)abALACTICA不需要任何優(yōu)化來(lái)避免過(guò)度消化。這使得FabALACTICA成為一種有吸引力的酶，例如在還原和非還原條件下的LC-MS分析、抗體高階結(jié)構(gòu)（HOS）的結(jié)晶和NMR研究、雙特異性或多特異性抗體的表征、單價(jià)結(jié)合研究和完整的Fc聚糖分析。廣東FabRICATORIdeS蛋白酶