吉林生理鹽條件中鹽核酸酶70950-160

Medium-Salt Active Nuclease High Quality (M-SAN HQ，中鹽核酸酶)，是用Pichia pastoris表達(dá)的重組非特異內(nèi)切核酸酶，廣泛應(yīng)用于生產(chǎn)工藝流程中，在生理鹽條件下去除雙鏈及單鏈的DNA及RNA。這款核酸酶的適宜pH范圍很廣（pH 7.2-8.7），且在125-250 mM鹽濃度內(nèi)具有適宜活性。在細(xì)胞培養(yǎng)液或收獲的培養(yǎng)上清中，不需調(diào)整任何組分，直接加入M-SAN HQ即可表現(xiàn)高核酸酶活性。相比傳統(tǒng)的全能核酸酶，M-SAN HQ中鹽核酸酶在生理鹽條件下，對HCD的去除更高效、更徹底。因此，M-SAN HQ中鹽核酸酶非常適合部分病毒載體（如慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒及溶瘤病毒等）的生產(chǎn)。在biopharma生產(chǎn)，如細(xì)胞基因medicine及vaccine生產(chǎn)中，宿主細(xì)胞DNA殘留是關(guān)鍵質(zhì)量參數(shù)之一。吉林生理鹽條件中鹽核酸酶70950-160

市售的M-SAN HQ中鹽核酸酶有三個規(guī)格，分別是25kU、500kU及5MU，分別滿足研發(fā)初期及大規(guī)模生產(chǎn)各階段的要求。通過SDS-PAGE檢測蛋白純度在99%以上?；贏rcticZymes Technologies的30年的酶學(xué)開發(fā)及大規(guī)模生產(chǎn)經(jīng)驗，M-SAN HQ的生產(chǎn)體系穩(wěn)定，產(chǎn)品純度高，批次一致性好，無蛋白酶活性。廠家開發(fā)出特異的緩沖液體系，使M-SAN HQ保存起來更加穩(wěn)定，-15℃ - -30℃條件下保存4年沒有活性下降。研究數(shù)據(jù)表明，經(jīng)過5-6次的反復(fù)凍融，M-SAN HQ中鹽核酸酶活性沒有明顯變化。陜西中鹽核酸酶70950-150鑒于biologics制品更嚴(yán)格的質(zhì)量要求，廠家對M-SAN HQ中鹽核酸酶的生產(chǎn)及質(zhì)控符合更高標(biāo)準(zhǔn)。

大多數(shù)研究級別的慢病毒是通過批次濃縮而不是粗制劑之后應(yīng)用的，濃縮基本上是通過兩步離心法產(chǎn)生的。在70000g通過超速離心濃縮后的慢病毒再通過蔗糖緩沖(50000g)純化，然后溶解在配方緩沖液中。一種改進(jìn)，特別是純度方面的改進(jìn)，基于離心/色譜聯(lián)用的純化方法。例如，Kutner等評估了組合純化/濃縮方法。蔗糖緩沖的超速離心結(jié)合陰離子交換層析獲得了88.2%的收率，而相反的組合則獲得了77.6%的收率。在兩種方法中，濃縮都超過了100倍，病毒滴度都超過了1010TU/ml(VSV-g包被的慢病毒)。

ArcticZymes Technologies于2019年推出了M-SAN HQ中鹽核酸酶，2021年推出對應(yīng)的M-SAN HQ ELISA kit。該試劑盒原理是采用雙抗夾心法定量檢測各種生物制品的中間品、半成品和成品中M-SAN HQ中鹽核酸酶的殘留含量，特異性的anti-M-SAN作為捕獲抗體偶聯(lián)在孔板上，辣根過氧化酶HRP標(biāo)記anti-M-SAN作為檢測抗體，TMB是檢測反應(yīng)底物。該試劑盒特異識別M-SAN HQ中鹽核酸酶，對其它核酸酶沒有特異性結(jié)合。它的定量范圍是0.12-7.5ng/ml；12*8strips的設(shè)計規(guī)格，使用靈活，更能降低使用成本。M-SAN HQ中鹽核酸酶不需調(diào)整培養(yǎng)基任何組分，使用簡單方便；

倫敦大學(xué)學(xué)院（UCL）的工藝開發(fā)團(tuán)隊，在細(xì)胞藥物Car-T涉及的慢病毒（Lentivirus，LV）生產(chǎn)過程中，比較了Benzonase和M-SAN HQ中鹽核酸酶在酶活、酶切時間、各階段LV的穩(wěn)定性等方面的表現(xiàn)，發(fā)現(xiàn)在生理鹽條件下M-SAN HQ中鹽核酸酶酶活更高、酶切時間更短，同時用納米顆粒分析（NTA）技術(shù)確認(rèn)M-SAN HQ組得到的LV病毒顆粒聚集更少、穩(wěn)定性更高。他們會繼續(xù)探究HCD是否影響LV的穩(wěn)定性，及對LV侵染效率和生命周期是否有影響。通過更多研究，我們探究M-SAN HQ中鹽核酸酶助力LV生產(chǎn)的關(guān)鍵機制。宿主細(xì)胞DNA主要以染色質(zhì)形態(tài)存在，其中組蛋白通過離子作用及疏水作用與DNA緊密結(jié)合；陜西ArcticZymes中鹽核酸酶70950-160

ArcticZymes廠家管控整個供應(yīng)鏈及生產(chǎn)流程，協(xié)助客戶進(jìn)行文件審計及現(xiàn)場審計。吉林生理鹽條件中鹽核酸酶70950-160

一般來說，生物生產(chǎn)工藝用的核酸酶以BenzonaseTM（BenzonaseTM是Merck的注冊商標(biāo)）為主，能高效降解任何形式（雙鏈、單鏈、線狀、環(huán)狀）的DNA和RNA。該酶來自于大自然界普遍存在的S.Marcescen，通過E.coli發(fā)酵生產(chǎn)得到。該酶的適宜反應(yīng)條件是低鹽濃度范圍（<100mM鹽濃度），且酶活隨著鹽濃度上升而下降，在300mM鹽濃度時酶活幾乎喪失。對于細(xì)胞基因藥物常用的兩種病毒載體LV和AAV，LV由于含有脂包膜結(jié)構(gòu)一般都在生理鹽條件下存在，而AAV在高鹽條件下不易團(tuán)聚、更穩(wěn)定。而在生理鹽濃度及更高濃度條件下，Benzonase活性受到抑制。吉林生理鹽條件中鹽核酸酶70950-160