浙江高鹽核酸酶70921

Mayer等（2023）以measles virus(麻疹病毒，MV)為例，評(píng)估了四種不同核酸酶（BenzonaseTM、DeneraseTM、M-SAN HQ中鹽核酸酶及SAN HQ高鹽核酸酶）對(duì)于染色質(zhì)DNA去除的效果。Vero細(xì)胞通過微載體貼壁培養(yǎng)來生產(chǎn)麻疹病毒MV，72hr后收獲上清液，使用3μm cellulose filter(Sartorius)過濾后分裝多份，置于-80℃保存便于后續(xù)使用。在解凍后的上清中調(diào)節(jié)對(duì)應(yīng)鹽濃度，并加入50 U/ml核酸酶，37℃孵育2hr進(jìn)行消化，消化后留樣；將消化后上清液過Capto Core 700 (Cytiva)柱子，收集流穿液，之后洗雜、洗脫，并分別留樣。通過SDS-PAGE分析發(fā)現(xiàn)，相比Benzonase等傳統(tǒng)核酸酶，在生理鹽條件下M-SAN HQ中鹽核酸酶更高效將染色質(zhì)DNA剪切成更小片段，甚至將核小體DNA剪切更徹底。高鹽濃度下，宿主DNA與蛋白質(zhì)能夠更高效解離，從而更容易被降解。浙江高鹽核酸酶70921

監(jiān)管部門對(duì)HCD的殘留量有明確的規(guī)定。美國(guó)FDA發(fā)布的指導(dǎo)原則中指出生物制品HCD殘余限度為 100pg/劑，對(duì)于大劑量生物制品如單克隆抗體，根據(jù)其殘留DNA來源及給藥途徑，殘留量可放寬至 10ng/劑。細(xì)胞基因藥物終產(chǎn)品的DNA殘留有兩種來源，分別是宿主細(xì)胞DNA（HCD）和轉(zhuǎn)染用的質(zhì)粒。質(zhì)粒和HCD的存在形式不同，去除效率也差別很大。其中，質(zhì)粒是裸露的DNA雙鏈，帶強(qiáng)負(fù)電荷，通過色譜純化主要是離子交換能夠很高效去除；HCD則是以核小體緊密折疊形成的染色質(zhì)形式存在，幾乎不以裸DNA形式存在，所以很難去除。湖南ArcticZymes高鹽核酸酶70921-202無需為了保持高酶活而進(jìn)行脫鹽操作，簡(jiǎn)化工藝、節(jié)省時(shí)間；

ArcticZymes Technologies于2017年推出了SAN HQ高鹽核酸酶及其對(duì)應(yīng)的SAN HQ ELISA kit。該試劑盒原理是采用雙抗夾心法定量檢測(cè)各種生物制品的中間品、半成品和成品中SAN HQ高鹽核酸酶的殘留含量，特異性的anti-SAN作為捕獲抗體偶聯(lián)在96-well plate，生物素Biotin標(biāo)記anti-SAN作為檢測(cè)抗體，鏈霉親和素-HRP偶聯(lián)物起到信號(hào)放大作用，TMB是終反應(yīng)底物。該試劑盒特異識(shí)別SAN HQ高鹽核酸酶，對(duì)其它核酸酶沒有特異性結(jié)合。它的定量范圍是0.4-25.6ng/ml，檢測(cè)精確度高RSD<=15%，2-8℃條件下保存12個(gè)月。

ArcticZymes Technologies提供獨(dú)特特性的鹽活性核酸酶（Salt Active Nucleases，SANs）系列產(chǎn)品，主要包含SAN HQ高鹽核酸酶和M-SAN HQ中鹽核酸酶。這兩款酶都是非特異核酸內(nèi)切酶，跟Benzonase一樣能高效降解任何形式（雙鏈、單鏈、線狀、環(huán)狀）的DNA和RNA；都來自于深海microbes，通過Pichia pastoris發(fā)酵生產(chǎn)得到。這兩款酶的區(qū)別在于發(fā)揮酶活的適宜鹽濃度不同，——M-SAN HQ中鹽核酸酶的適宜鹽濃度在175mM-250mM，而SAN HQ高鹽核酸酶的適宜鹽濃度在400mM-600mM。SAN HQ應(yīng)用于生產(chǎn)工藝流程中，有效去除核酸污染；截止目前，已用于全球20+臨床項(xiàng)目中。

綜合腺相關(guān)病毒AAV制備的三個(gè)工藝階段介紹，可以看出下游處理可以占病毒生產(chǎn)總成本的很大一部分，而且難度也是非常大，尤其是純化過程。原因之一是由于有超過100種不同血清型的變體AAV衣殼，不同血清型的AAV蛋白存在差異。因此，各種血清型的表面特性增加AAV純化難度。原因之二是：針對(duì)工藝和產(chǎn)品相關(guān)的雜質(zhì)（包括宿主細(xì)胞物質(zhì)，DNA和空衣殼），缺乏一個(gè)有效和可重復(fù)的平臺(tái)方法，尤其是來從空衣殼中分離出完整的衣殼。為了解決以上問題，國(guó)內(nèi)外大的藥企公司都致力于純化新產(chǎn)品的開發(fā)，以期達(dá)到：（1）實(shí)現(xiàn)病毒顆粒的分離（2）減少產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)（3）保持效力和產(chǎn)量的目標(biāo)。US FDA指南要求：重組生物制品終產(chǎn)品中，核酸雜質(zhì)含量低于10ng/dose。黑龍江ArcticZymes高鹽核酸酶

ArcticZymes Technologies的研發(fā)基于北極海洋區(qū)的自然資源。浙江高鹽核酸酶70921

殘留的宿主DNA是生產(chǎn)中產(chǎn)生的雜質(zhì)，其存在潛在的致瘤性、傳染性和免疫原性等風(fēng)險(xiǎn)。相關(guān)研究表明，基因的大小普遍在200bp以上，因此大于200bp有可能會(huì)有一定的致病性，而且殘留DNA片段越大，生物制品的風(fēng)險(xiǎn)等級(jí)越高。因此，各國(guó)監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)其提出了嚴(yán)格要求。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（FDA）在《關(guān)于人類基因zhiliao新產(chǎn)品生產(chǎn)指導(dǎo)文件》中明確指出HCD的片段要小于200bp。2022年5月，國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品評(píng)審中心（CDE）發(fā)布的《體內(nèi)基因藥物產(chǎn)品藥學(xué)研究與評(píng)價(jià)技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）》中也明確指出需對(duì)DNA殘留量和殘留片段大小進(jìn)行控制，建議盡量將DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。浙江高鹽核酸酶70921

上海倍篤生物科技有限公司在同行業(yè)領(lǐng)域中，一直處在一個(gè)不斷銳意進(jìn)取，不斷制造創(chuàng)新的市場(chǎng)高度，多年以來致力于發(fā)展富有創(chuàng)新價(jià)值理念的產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)，在上海市等地區(qū)的醫(yī)藥健康中始終保持良好的商業(yè)口碑，成績(jī)讓我們喜悅，但不會(huì)讓我們止步，殘酷的市場(chǎng)磨煉了我們堅(jiān)強(qiáng)不屈的意志，和諧溫馨的工作環(huán)境，富有營(yíng)養(yǎng)的公司土壤滋養(yǎng)著我們不斷開拓創(chuàng)新，勇于進(jìn)取的無限潛力，上海倍篤生物科技供應(yīng)攜手大家一起走向共同輝煌的未來，回首過去，我們不會(huì)因?yàn)槿〉昧艘稽c(diǎn)點(diǎn)成績(jī)而沾沾自喜，相反的是面對(duì)競(jìng)爭(zhēng)越來越激烈的市場(chǎng)氛圍，我們更要明確自己的不足，做好迎接新挑戰(zhàn)的準(zhǔn)備，要不畏困難，激流勇進(jìn)，以一個(gè)更嶄新的精神面貌迎接大家，共同走向輝煌回來！