南京支原體去除試劑

來源： 發(fā)布時間：2024-06-13

細胞培養(yǎng)中，支原體檢測的重要性體現(xiàn)在以下幾個方面：
1. 高污染發(fā)生率：支原體對培養(yǎng)細胞的污染發(fā)生率非常高，據(jù)估計平均發(fā)生率在60%左右。
3. 隱匿性強：支原體污染具有很高的隱匿性，早期不容易被發(fā)現(xiàn)，除非使用特異性和靈敏度都非常高的專業(yè)檢測試劑盒。
3. 影響實驗結果：支原體污染會改變細胞的生理性質，影響實驗結果的準確性。細胞培養(yǎng)物一旦被支原體污染，會改變細胞DNA、RNA及蛋白表達，導致實驗數(shù)據(jù)不準確、不穩(wěn)定。
4. 難以通過肉眼或常規(guī)方法發(fā)現(xiàn)：支原體污染無法通過肉眼檢查細胞來發(fā)現(xiàn)，也不能通過向培養(yǎng)基中加入抗*素控制。
5. 對細胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)可靠性的影響：支原體污染會降低細胞系的有效性，使得細胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)失去可靠性，無法為生命科學研究提供有意義的數(shù)據(jù)。
6. 預防和控制污染的必要性：定期進行支原體檢測是細胞培養(yǎng)實驗室進行自我質量監(jiān)控的必要組成部分，有助于及時發(fā)現(xiàn)并控制污染，保證實驗的準確性和重復性。
7. 避免細胞株受損：支原體污染可能導致細胞株受損，影響細胞株的質量和研究價值。及時檢測和清*支原體污染有助于保護珍貴的細胞資源
支原體去除之后對細胞轉染有無影響？南京支原體去除試劑

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支原體污染是細胞培養(yǎng)中普遍的問題之一，細胞庫中或正在使用的細胞中，支原體的污染率約為15%-35%。并對培養(yǎng)細胞的生理和代謝造成諸多影響：
01/ 爭奪營養(yǎng)：支原體的污染會阻礙細胞生長和增殖 
02/ 改變蛋白質、RNA 或 DNA 合成的水平 
03/ 改變基因表達、細胞信號傳導和形態(tài) 
04/ 損害膜和細胞器 
05/ 導致突變和染色體變化 
06/ 時間、金錢和有價值的細胞丟失：支原體的污染會導致嚴重的經濟損失以及研究時間損失
07/ 實驗結果的不可靠性 
08/ 生物安全問題
南京細胞培養(yǎng)支原體檢測方法恒溫擴增對于同一個樣品，為什么PCR結果為陽性，而一步法恒溫檢測試劑盒結果為陰性？

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對于同一個樣品，如果一步法恒溫試劑盒檢測結果為陽性，而PCR檢測為陰性，可能的原因包括：
1. 檢測的支原體種類不同：一步法恒溫試劑盒可能檢測的支原體種類更多，例如可以涵蓋27種支原體，而PCR檢測可能只針對常見的12種支原體進行檢測。因此，如果樣品中污染的支原體種類不在PCR檢測的范圍內，就可能出現(xiàn)一步法檢測為陽性而PCR檢測為陰性的情況。
2. 靈敏度的差異：PCR方法的靈敏度可能高于一步法恒溫檢測法。PCR可以檢測到低至單個拷貝的支原體，而一步法恒溫檢測可能需要更高的支原體拷貝數(shù)，例如10^3^個拷貝。如果樣品中支原體的數(shù)量低于一步法檢測的靈敏度閾值，PCR檢測可能無法檢測到，導致陰性結果。
3. 樣品中可能含有抑制PCR反應的物質：如果樣品中存在PCR反應的抑制物，可能會影響PCR的擴增效率，導致即使存在支原體，PCR檢測也可能呈現(xiàn)陰性結果。
4. 試劑盒的特異性和交叉反應：一步法恒溫試劑盒可能具有更高的特異性，減少了與其他微生物的交叉反應，從而在PCR檢測為陰性時仍能準確檢測到支原體的存在。

細胞被支原體污染后可能會出現(xiàn)以下幾種情況：
1. 生長速度變慢：支原體污染的細胞生長速度可能會減慢，甚至停止生長。
2. 形態(tài)改變：部分細胞可能會變圓，從培養(yǎng)瓶壁脫落。有些細胞在支原體污染后，形態(tài)變化可能不明顯，但有些細胞可能會出現(xiàn)體積增大、細胞碎片增多等現(xiàn)象。
3. 培養(yǎng)液pH變化：支原體污染的細胞可能導致培養(yǎng)液pH值變化明顯，更換培養(yǎng)液后幾小時內變酸（顏色變黃）。
4. 細胞間隙出現(xiàn)膜狀沉積：在某些情況下，細胞與細胞間隙可能出現(xiàn)膜狀沉積，影響細胞的正常生長和傳代。
5. 細胞功能受損：支原體污染可能會影響細胞的代謝和功能，如影響細胞蛋白質、DNA、RNA的合成。
6. 染色體畸變：支原體污染可能會導致細胞染色體斷裂、數(shù)目減少，出現(xiàn)雙著絲點染色體、環(huán)狀染色體等異常。
7. 免疫細胞產量受影響：對于巨噬細胞等免疫細胞的培養(yǎng)，支原體污染可能會抑制干擾素的合成和降低其活性。
8. 細胞培養(yǎng)環(huán)境的污染：污染的細胞可能成為實驗室的污染源，影響工作區(qū)域、培養(yǎng)箱和液氮罐等。
9. 實驗結果的不確定性：使用被支原體污染的細胞進行實驗可能會得到不準確的結果，影響科研的可靠性。
支原體檢測的樣本用什么合適？

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細胞培養(yǎng)中支原體污染會對實驗結果產生多方面的影響，具體包括：
1. 細胞生長受影響：支原體污染可能導致細胞生長速度減慢，甚至停滯。
2. 細胞形態(tài)改變：支原體感*的細胞可能會出現(xiàn)形態(tài)的改變，如細胞體積增大、形態(tài)不規(guī)則等。
3. 細胞功能改變：支原體污染會影響細胞的代謝、增殖、分化等生理功能。
4. 細胞產物改變：支原體感*可能影響細胞產生的蛋白質、細胞因子等生物活性物質的表達和分泌。
5. 實驗結果不準確：支原體污染會干擾實驗結果的準確性，導致實驗數(shù)據(jù)不可靠。
6. 實驗重復性差：支原體污染的細胞培養(yǎng)批次間差異大，影響實驗的重復性。
7. 影響后續(xù)實驗：支原體污染的細胞培養(yǎng)產物用于后續(xù)實驗，如轉染、基因編輯等，可能會影響實驗效果。
8. 影響細胞培養(yǎng)產物的質量：支原體污染會影響細胞培養(yǎng)產物的質量，如疫苗、生物制品等。
9. 增加研究成本：支原體污染需要花費額外的時間和成本進行檢測、處理和重復實驗。
細胞被支原體污染了會有什么影響？北京細胞培養(yǎng)支原體檢測方法恒溫擴增

細胞培養(yǎng)中，支原體檢測的重要性？南京支原體去除試劑

一步法快速支原體檢測的原理主要基于等溫擴增技術，這是一種在恒定溫度下進行的核酸擴增方法。以下是具體的步驟和原理：

1. 等溫擴增技術：一步法快速支原體檢測試劑盒利用LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification，環(huán)介導等溫擴增）技術或類似的等溫擴增技術。這些技術允許在恒定溫度下進行DNA的快速擴增，通常在60-65°C之間。
2. 特異性引物：該方法使用設計好的特異性引物，這些引物靶向支原體DNA的保守區(qū)域。引物的設計確保了擴增過程的特異性，從而減少非目標序列的擴增。
3. 快速擴增：在適宜的條件下，等溫擴增技術可以在15至60分鐘內實現(xiàn)高達10^9至10^10倍的核酸擴增，從而快速檢測出支原體的存在。
4. 顏色變化指示：一步法試劑盒中通常包含有顏色指示劑，當支原體DNA被擴增時，反應液的顏色會發(fā)生變化，從而可以通過肉眼直接觀察到檢測結果。例如，從藍紫色變?yōu)樘焖{色，表示樣本中存在支原體。
5. 操作簡便：一步法支原體檢測不需要復雜的設備，通常只需要水浴鍋或PCR儀即可完成操作，使得檢測過程更加簡便快捷。
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