溫州全自動腦定位膜片鉗方案

膜片鉗使用操作流程及注意事項：1.實驗結(jié)束后必須關(guān)閉實驗室的水電，檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學(xué)必須履行實驗室相關(guān)要求，完成值日等相關(guān)工作（值日生按照實驗室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職）。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉制儀提前預(yù)熱（至少30min）。且用完及時關(guān)閉。電熱加熱線溫度很高，在使用時注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改，不得在本機電腦下載別的軟件，拷數(shù)據(jù)時需用實驗室配置的U盤。5.禁止私拉電線，如有實驗要求可與老師及時溝通。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級，因此封接范圍內(nèi)細胞膜光有少數(shù)離子通道。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標：實驗迅速，通量高。一般每天可達到50個實驗數(shù)據(jù)左右。溫州全自動腦定位膜片鉗方案

膜片鉗電生理紀錄系統(tǒng)及記錄方法：細胞膜由雙層脂膜組成，具有密封絕緣的特性，因此當(dāng)紀錄 電極接觸到細胞膜時電阻會開始上升，然后以人工方式對紀錄電極內(nèi)施加一個負壓，可以讓電極與胞膜之間吸附得更為緊密而電阻也會加速上升，當(dāng)紀錄電極的電阻達到千兆歐姆(Giga Ω)時，意味著細胞膜與電極之間幾乎沒有電流漏出，之后對電極內(nèi)壓力施以一個快速的負壓將細胞膜吸破，這樣紀錄電極與細胞胞體之間會形成一個封閉的電容，此時就可以開始對細胞進行實驗。溫州全自動腦定位膜片鉗方案膜片鉗的應(yīng)用：心肌細胞通過各種離子通道對膜電位和動作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能。

腦片膜片鉗實驗全細胞記錄：用可視化膜片鉗尋找清楚、且表面光滑、折光性較好的突觸后神經(jīng)元。在加了正壓后，將記錄電極移入腦片視野中，并接近事先選好的神經(jīng)元，然后，調(diào)整電極與神經(jīng)元的相對位置，利用負壓形成穩(wěn)定的高阻封接。用短簇的脈沖負壓使細胞破膜，穩(wěn)定2~3分鐘，觀察封接測試波形起始段與基線間的差值是否在100pA以內(nèi)，封接電阻是否大于200M，如果是，且較穩(wěn)定，再迅速補償串聯(lián)電阻和慢電容，舍棄串聯(lián)電阻大于30M的細胞，且在記錄過程中監(jiān)測串聯(lián)電阻的變化，當(dāng)變化大于20%時，中止記錄。如果細胞狀態(tài)不好，就馬上重新制備腦片，以提高實驗效率。

膜片鉗使用的注意事項：工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實驗技術(shù)。它的基本原理是以一個光潔，直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細胞的膜接觸，之后對微電極另一端開口處施加適當(dāng)?shù)呢搲河秒姌O的纖細開口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入，如此在微電極開口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會形成緊密的封接，它的電阻能夠達到數(shù)個或數(shù)十個千兆歐，這世界上就是在化學(xué)上完全隔離了吸附在微電極開口處的那一片膜同膜的其余部分，通過微電極記錄到的電流變化光光和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關(guān)聯(lián)。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標：藥液交換迅速。細胞內(nèi)、外液的交換是在平面芯片上進行。

膜片鉗使用的注意事項：1.向玻璃微電極灌注內(nèi)液時切勿灌太多（1cm左右為適），以防液體進入銀絲底部增加噪聲。2.安裝玻璃微電極時，電極應(yīng)與銀絲平行，防止刮蹭銀絲電極。3.玻璃微電極需先用甲醇浸泡，再用酒精燈微燒兩端，使其平滑。4.換液時應(yīng)時刻觀察浴槽，防止液面過低或液體溢出污染鏡頭，很適液面為微高于出液口。5.浴槽及灌流系統(tǒng)用畢請及時清洗，防止長菌影響實驗。6.打雷天氣必須禁止膜片鉗實驗。7.干燥季節(jié)請先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。8.每位實驗者請在E盤建立自己的文件夾儲存數(shù)據(jù)。膜片鉗使用的注意事項：換液時應(yīng)時刻觀察浴槽，防止液面過低或液體溢出污染鏡頭。東莞神經(jīng)生物學(xué)離子通道原理及步驟

膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍：在心血管藥理方面的研究。溫州全自動腦定位膜片鉗方案

膜片鉗操作實驗：標本制備根據(jù)研究目的的不同，可采用不同的細胞組織，如心肌細胞、平滑肌細胞、細胞等，現(xiàn)在幾乎可對各種細胞進行膜片鉗的研究。對所采用的細胞，必須滿足實驗要求，一般多采用酶解分離法，也可采用細胞培養(yǎng)法；另外，由于與分子生物學(xué)技術(shù)的結(jié)合，現(xiàn)在也運用分子克隆技術(shù)表達不同的離子通道，如利用非洲爪蟾卵母細胞表達外源性基因等。電極在實驗前要灌注電極液，由于電極較細，因此在充灌前，電極內(nèi)液要用0.2 μm的濾膜進行過濾。一般電極充灌可分灌尖(tipfilling)和后充兩步灌尖時將電極浸入內(nèi)液中5s即可。溫州全自動腦定位膜片鉗方案

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