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膜片鉗使用的注意事項(xiàng)：工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對(duì)相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。它的基本原理是以一個(gè)光潔，直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細(xì)胞的膜接觸，之后對(duì)微電極另一端開口處施加適當(dāng)?shù)呢?fù)壓用電極的纖細(xì)開口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入，如此在微電極開口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會(huì)形成緊密的封接，它的電阻能夠達(dá)到數(shù)個(gè)或數(shù)十個(gè)千兆歐，這世界上就是在化學(xué)上完全隔離了吸附在微電極開口處的那一片膜同膜的其余部分，通過微電極記錄到的電流變化光光和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關(guān)聯(lián)。內(nèi)面向外式膜片細(xì)胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：擴(kuò)展功能多。配套擴(kuò)展設(shè)備豐富，如內(nèi)灌流系統(tǒng)、脂質(zhì)體制備器等。金華醫(yī)學(xué)電生理膜片鉗網(wǎng)站

全自動(dòng)膜片鉗的優(yōu)勢(shì)：自動(dòng)化：抓取細(xì)胞、形成封接、破膜等整個(gè)實(shí)驗(yàn)操作全部自動(dòng)化，極大的節(jié)約實(shí)驗(yàn)人員的時(shí)間精力。簡(jiǎn)約化：傳統(tǒng)膜片鉗所需要的顯微鏡、顯微操作系統(tǒng)、微電極拉制儀，防震臺(tái)、屏蔽網(wǎng)等全都不需要。效率高：是傳統(tǒng)膜片鉗實(shí)驗(yàn)效率的5-10倍?？煽啃裕簩?shí)驗(yàn)結(jié)果輕松復(fù)制。經(jīng)濟(jì)實(shí)惠：藥物消耗低，每次實(shí)驗(yàn)記錄較低只需5μl內(nèi)外液體。零技術(shù)門檻：無需膜片鉗操作經(jīng)驗(yàn)，輕松上手。高芯片封接：封接電阻可達(dá)1GΩ。確保實(shí)驗(yàn)可靠性。兼容性強(qiáng)：可與市場(chǎng)上大多數(shù)放大器兼容。應(yīng)用范圍廣：除擁有傳統(tǒng)膜片鉗功能外，還可以對(duì)手動(dòng)膜片鉗無法涉及的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行記錄。擴(kuò)展功能多：配套擴(kuò)展設(shè)備豐富，如內(nèi)灌流系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、脂質(zhì)體制備器等。神經(jīng)生物學(xué)膜片鉗技術(shù)服務(wù)膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍：膜片鉗技術(shù)在通道中的研究。

膜片鉗操作實(shí)驗(yàn)：膜片鉗放大器是整個(gè)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)中的中心，它可用來作單通道或全細(xì)胞記錄，其工作模式可以是電壓鉗，也可以是電流鉗。從原理來說，膜片鉗放大器的探頭電路即I-V變換器有兩種基本結(jié)構(gòu)形式，即電阻反饋式和電容反饋式，前者是一種典型的結(jié)構(gòu)，后者因用反饋電容取代了反饋電阻，降低了噪聲，所以特別適合很低噪聲的單通道記錄。由于供膜片鉗實(shí)驗(yàn)的專門計(jì)算機(jī)硬件及相應(yīng)的軟件程序的相繼出現(xiàn)，使得膜片鉗實(shí)驗(yàn)操作簡(jiǎn)便、效率提高。如與EPC-9型膜片鉗放大器（內(nèi)含ITC-16數(shù)據(jù)采集/接口卡）配套使用的軟件PULSE/PULSEFIT，它既可產(chǎn)生刺激波形，控制數(shù)據(jù)采集，又可分析數(shù)據(jù)，同時(shí)具有用于膜電容監(jiān)測(cè)的鎖相放大器，多種軟件功能集成于一體。

膜片鉗技術(shù)基本原理與特點(diǎn)：又由于玻璃微電極管徑很小，其下膜面積光約1μm2，在這么小的面積上離子通道數(shù)量很少，一般只有一個(gè)或幾個(gè)通道，經(jīng)這一個(gè)或幾個(gè)通道流出的離子數(shù)量相對(duì)于整個(gè)細(xì)胞來講很少，可以忽略，也就是說電極下的離子電流對(duì)整個(gè)細(xì)胞的靜息電位的影響可以忽略，那么，只要保持電極內(nèi)電位不變，則電極下的一小片細(xì)胞膜兩側(cè)的電位差就不變，從而實(shí)現(xiàn)電位固定另外，高阻封接技術(shù)還很大降低了電流記錄的背景噪聲，從而戲劇性地提高了時(shí)間、空間及電流分辨率，如時(shí)間分辨率可達(dá)10μs、空間分辨率可達(dá)1平方微米及電流分辨率可達(dá)10-12A。記錄單細(xì)胞電流和全細(xì)胞電流的基礎(chǔ)上進(jìn)一步計(jì)算出細(xì)胞膜上的通道數(shù)和開放概率。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：藥液交換非常迅速，作用時(shí)間快。

膜片鉗技術(shù)的工作原理：膜片鉗技術(shù)是用于了解離了通道行為的通用型電生理工具，首先用微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細(xì)胞膜，然后以千兆歐姆以上的阻抗使電極尖銳端與細(xì)胞膜封接，通過吸破或者電破的方式使與電極尖開口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域與其周圍區(qū)域在電學(xué)上分隔，然后細(xì)胞膜破裂，進(jìn)而對(duì)此區(qū)域上的離子通道的離子電流進(jìn)行監(jiān)測(cè)記錄的方法。該方法普遍應(yīng)用于神經(jīng)細(xì)胞，肌纖維細(xì)胞，心肌細(xì)胞及高表達(dá)單一通道的卵母細(xì)胞。主要用于監(jiān)測(cè)離子通道在正?；蛘呒膊顟B(tài)下如何表現(xiàn)，以及不同藥物、離子或其他分析物如何改變這些狀態(tài)。膜片鉗技術(shù)的建立，對(duì)生物科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一項(xiàng)具有重大意義的變革。這是一種通過離子通道記錄的離子電流來反映細(xì)胞膜單一的(或多個(gè))的離子通道活動(dòng)的技術(shù)。該技術(shù)的出現(xiàn)將生理學(xué)的細(xì)胞水平和分子水平聯(lián)系在一起，又將神經(jīng)科學(xué)的不同亞科融匯在一起，促進(jìn)了各個(gè)學(xué)科之間的聯(lián)系，加速了我們神經(jīng)科學(xué)的研究進(jìn)展，深入探討神經(jīng)活動(dòng)的機(jī)制研究。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo)：操作簡(jiǎn)單，全過程可自動(dòng)化。東莞神經(jīng)生物學(xué)膜片鉗實(shí)驗(yàn)?zāi)募液?/p>

膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍：創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選的研究。金華醫(yī)學(xué)電生理膜片鉗網(wǎng)站

膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞記錄的實(shí)驗(yàn)流程：（1）破膜：加大微電極內(nèi)的負(fù)壓將細(xì)胞膜吸破，此時(shí)可見時(shí)間常數(shù)較大的全細(xì)胞膜電容電流的出現(xiàn)，以及方波電流的輕微加大。①可用嘴吸；②也可用注射器施加負(fù)壓；③還可以在施加負(fù)壓的基礎(chǔ)上進(jìn)行電擊穿來破膜。若只用電擊穿破膜，形成的入口電阻Ra較大。（2）細(xì)胞破膜后，若所用浴液的滲透壓比電極內(nèi)液的滲透壓略高，則應(yīng)該將所施加的負(fù)壓力在幾秒內(nèi)或幾十秒內(nèi)去掉；反之，適當(dāng)保留一點(diǎn)負(fù)壓對(duì)破膜狀態(tài)及細(xì)胞的穩(wěn)定更有利。（3）全細(xì)胞膜電容補(bǔ)償：調(diào)節(jié)全細(xì)胞膜電容補(bǔ)償板塊中的Cm和Rs進(jìn)行膜電容電流補(bǔ)償，使輸出電流信號(hào)中細(xì)胞膜電容電流成分消失或變至較小。（4）串聯(lián)電阻補(bǔ)償：打開串聯(lián)電阻補(bǔ)償鍵，調(diào)節(jié)串聯(lián)電阻補(bǔ)償至不產(chǎn)生震蕩為度。（5）漏減調(diào)節(jié)。（6）正式進(jìn)入標(biāo)本細(xì)胞的檢測(cè)。金華醫(yī)學(xué)電生理膜片鉗網(wǎng)站

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