蘇州藥理學(xué)腦片膜片鉗原理及步驟

膜片鉗只適用于藥物的初篩和二次篩選，且對樣本有很高的選擇性，而傳統(tǒng)的膜片鉗技術(shù)可適用于各種樣本，應(yīng)用范圍廣，能夠分析檢測所有的離子通道類型，同時能夠分析離子通道的動力學(xué)特征。因此目前，傳統(tǒng)膜片鉗技術(shù)仍然是不可替代的。在進行膜片鉗實驗時，玻璃電極給負壓并吸住細胞，形成高阻封接，破膜，給藥，記錄數(shù)據(jù)的過程，都需要細胞保持比較好的活性狀態(tài)，才能更加高效的獲得有效數(shù)據(jù)。因此細胞的穩(wěn)定性就成了評估樣品好壞的關(guān)鍵。膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：細胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。蘇州藥理學(xué)腦片膜片鉗原理及步驟

一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法：為了測量在不同藥物對細胞中的離子通道的影響，通常需要在膜片鉗實驗中實施灌流。例如，需要檢驗?zāi)撤N是否對某種離子通道的影響，則需要在細胞封接后記錄電流數(shù)據(jù)，然后通過在細胞周圍快速給藥再次記錄電流數(shù)據(jù)即可對比數(shù)據(jù)判斷該對離子通道的影響。以往多采用橡皮泥等簡單設(shè)備固定灌流管進行實驗，經(jīng)常出現(xiàn)灌流管固定不良影響實驗的情況，也有精密的灌流裝置，但是結(jié)構(gòu)復(fù)雜，且成本非常高。膜片鉗技術(shù)是在電壓鉗技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的。合肥藥理學(xué)膜片鉗全細胞記錄研究方案膜片鉗實驗難度大、技術(shù)要求高，要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事。

膜片鉗技術(shù)是用于紀錄全細胞或個別細胞膜上離子信道電生理特性的研究方法，目的在于提供基礎(chǔ)研究知識與新藥開發(fā)時研究細胞電特性或小分子藥物對細胞膜上離子信道特性的影響，替開發(fā)標靶藥物提供一個測試平臺。傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)膜片鉗系統(tǒng)由人工操作，實驗人員在取得元代細胞(例如心肌細胞與神經(jīng)元)后，將研究對象細胞養(yǎng)在玻片上，以手動方式將紀錄電極移動放置在胞體上方并壓到細胞膜上，此時紀錄電極在膜外溶液里的電阻大約為3-9 ΜΩ。

膜片鉗技術(shù)在通道研究中的重要作用：1.與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道：心肌細胞通過各種離子通道對膜電位和動作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能。近年來，國外學(xué)者在人類心肌細胞離子通道特性的研究中取得了許多進展，使得心肌藥理學(xué)實驗由動物細胞模型向人心肌細胞成為可能。2.對離子通道生理與病理情況下作用機制的研究：通過對各種生理或病理情況下細胞膜某種離子通道特性的研究，了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機制。用膜片鉗技術(shù)可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程。

膜片鉗使用的基本方法是，把經(jīng)過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下，與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接，導(dǎo)致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學(xué)上和化學(xué)上隔離起來，由于電性能隔離與微電極的相對低電阻（1～5MΩ），只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制，從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉(zhuǎn)換放大器輸送至電子計算機進行分析處理。膜片鉗技術(shù)實現(xiàn)的關(guān)鍵是建立高阻抗封接，并能通過特定的記錄儀器反映這些變化，因而，膜片鉗實驗室除了一般電生理實驗所需的儀器外，還特需防震工作臺、屏蔽罩、膜片鉗放大器、三維液壓操縱器、倒置顯微鏡、數(shù)據(jù)采集卡、數(shù)據(jù)記錄和分析系統(tǒng)等。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細胞跨膜電位不變，并迅速控制其數(shù)值。蘇州藥理學(xué)腦片膜片鉗原理及步驟

膜片鉗使用的注意事項：在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導(dǎo)電的物品接觸電極絲。蘇州藥理學(xué)腦片膜片鉗原理及步驟

膜片鉗電生理技術(shù)：神經(jīng)元細胞膜上有離子通道，它們控制電荷流入和流出細胞，從而調(diào)節(jié)神經(jīng)元激發(fā)。一種用于研究這些通道的生物物理學(xué)特性的極為有用的技術(shù)被稱為膜片鉗記錄。在這種方法中，神經(jīng)科學(xué)家把拋光的玻璃微吸管置于細胞上通過吸力形成高電阻封接。這個過程分隔了一小"片"包含一種或多種離子通道的膜。通過微吸管中的電極，研究人員可以"鉗制"或控制膜的電屬性，這對分析通道活動很重要。該電極還能記錄跨膜電壓的變化，或離子通過膜的流動。蘇州藥理學(xué)腦片膜片鉗原理及步驟