黃山神經(jīng)生物學電生理膜片鉗方案

膜片鉗技術(shù)在通道研究中的重要作用：1.與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道：心肌細胞通過各種離子通道對膜電位和動作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能。近年來，國外學者在人類心肌細胞離子通道特性的研究中取得了許多進展，使得心肌藥理學實驗由動物細胞模型向人心肌細胞成為可能。2.對離子通道生理與病理情況下作用機制的研究：通過對各種生理或病理情況下細胞膜某種離子通道特性的研究，了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機制。膜片鉗實驗難度大、技術(shù)要求高，要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事。黃山神經(jīng)生物學電生理膜片鉗方案

膜片鉗技術(shù)及其應用：它是作者在\"膜片鉗技術(shù)及其應用\"領(lǐng)域所進行的研究工作的總結(jié)，同時也吸取了國際上的先進技術(shù)和新近的研究成果。內(nèi)容包括:細胞電生理與膜片鉗技術(shù)，膜片鉗系統(tǒng)的組建及實驗技術(shù)概要，膜片鉗放大器原理與低噪聲設(shè)計，單通道和全細胞電流記錄技術(shù)，數(shù)據(jù)采集和分析，細胞分泌活動的膜電容監(jiān)測技術(shù)和安培測量技術(shù)，細胞內(nèi)鈣離子濃度的測量及鈣庫特性，腦切片膜片鉗技術(shù)，心肌細胞的藥理特性和植物細胞的離子通道特性。黃山神經(jīng)生物學電生理膜片鉗方案內(nèi)面向外式膜片細胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控。

膜片鉗使用的注意事項：1.為了防止塵埃、靜電傷害機器，每天做實驗前請用清水拖地。2.拉制儀使用前需預熱15-30min。3.銀絲電極及地線發(fā)白時，請先用砂紙輕微打磨，再浸入新鮮的次氯酸鈉溶液鍍氯化銀，如果銀絲電極30min未變黑，則考慮更換次氯酸鈉。4.先開放大器，后開軟件；先關(guān)軟件，后關(guān)放大器。5.非必須用到汞燈時請不要打開汞燈電源，打開后至少需1個小時才可關(guān)閉。6.在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導電的物品接觸電極絲（包括地線），在取放細胞片時請關(guān)閉放大器。

膜片鉗記錄的幾種形式：細胞吸附膜片(cell-attached patch)　將兩次拉制后經(jīng)加熱拋光的微管電極置于清潔的細胞膜表面上，形成高阻封接，在細胞膜表面隔離出一小片膜，既而通過微管電極對膜片進行電壓鉗制，高分辨測量膜電流，稱為細胞貼附膜片。由于不破壞細胞的完整性，這種方式又稱為細胞膜上的膜片記錄。此時跨膜電位由玻管固定電位和細胞電位決定。因此，為測定膜片兩側(cè)的電位，需測定細胞膜電位并從該電位減去玻管電位。從膜片的通道活動看，這種形式的膜片是極穩(wěn)定的，因細胞骨架及有關(guān)代謝過程是完整的，所受的干擾小。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細胞跨膜電位不變，并迅速控制其數(shù)值。

膜片鉗技術(shù)——打開細胞電生理之門：定義：膜片鉗技術(shù)被稱為研究離子通道的“金標準”，是一種基于電工學和電化學原理的分析手段，可以通過檢測細胞的電信號(電生理性質(zhì))來研究化學物質(zhì)、電、機械力等刺激因素對細胞功能的影響，從而幫助揭示細胞在生命活動中的化學和生物學機制。原理：膜片鉗技術(shù)是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來，由于電極與細胞膜的高阻封接，在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離，因此，此片膜內(nèi)開放所產(chǎn)生的電流流進玻璃吸管，用一個極為敏感的電流監(jiān)視器（膜片鉗放大器）測量此電流強度，就替代單一離子通道電流。膜片鉗使用操作流程及注意事項：檢查實驗室門窗。黃山神經(jīng)生物學電生理膜片鉗方案

膜片鉗技術(shù)是電生理記錄的常用手段，目前在科學研究中使用越來越普遍。黃山神經(jīng)生物學電生理膜片鉗方案

膜片鉗技術(shù)是通過微玻管電極（膜片電極或膜片吸管）接觸細胞膜，用千兆歐姆以上的阻抗使之封接，在電學上分隔和電極尖開口處相接的細胞膜的小區(qū)域（膜片）以及其周圍，在此基礎(chǔ)上固定點位，對這膜片上的離子通道的離子電流（pA級）進行監(jiān)測記錄的方法。測量回路的中心部分是使用場效應管運算放大器構(gòu)成的I-V轉(zhuǎn)換器。當場效應管運算放大器的正負輸入端子是等電位，向正輸入端子施加指令電位時，因為短路負端子以及膜片都可等電位地達到鉗制的作用，字膜片微電極與默片之間形成10GΩ以上封接時，其間達到Z小的分流電流。黃山神經(jīng)生物學電生理膜片鉗方案