病毒全序列測(cè)序

病毒基因組測(cè)序是疾病診斷、流行病學(xué)調(diào)查和宿主-病原關(guān)系研究的重要手段。病毒的全基因組測(cè)序以及對(duì)應(yīng)的生物信息學(xué)分析方法是研究病毒進(jìn)化、毒力因子變異、疫病爆發(fā)之間的關(guān)系、疫病傳播途徑、不同遺傳變異的分布模式、疫病發(fā)生地理區(qū)域的基礎(chǔ)。與傳統(tǒng)Sanger測(cè)序相比，NGS技術(shù)的發(fā)展使得一個(gè)小的研究小組可以擁有大量病毒株的全基因組序列，測(cè)序成本也在逐步降低。由于NGS產(chǎn)生的數(shù)據(jù)量非常龐大，其序列拼接難度也隨之增加。而且對(duì)于低濃度高復(fù)雜度的樣本，研究者除了PCR外別無(wú)他法。而PCR方法往往具有偏好性，丟失的片段將為序列組裝帶來(lái)非常高的失敗率。對(duì)于完全未知的樣本，無(wú)法通過(guò)PCR進(jìn)行富集，要鑒定其種類(lèi)需要調(diào)用各種方法，逐個(gè)嘗試，工作量之大，其效率之低，使得一個(gè)新的研究方法的出現(xiàn)及其必要。病毒全基因組測(cè)序要注意什么事項(xiàng)？病毒全序列測(cè)序

病原學(xué)的診斷注意事項(xiàng):病原學(xué)的診斷始終是傳染性疾病診斷的重要一環(huán)，二代測(cè)序作為病原學(xué)診斷的**性技術(shù)，也在臨床上不斷的探索、落地，“中國(guó)宏基因組學(xué)第二代測(cè)序技術(shù)檢測(cè)傳染病原體的臨床應(yīng)用**共識(shí)”是世界開(kāi)始針對(duì)所有傳染性疾病的宏基因組學(xué)第二代測(cè)序技術(shù)臨床應(yīng)用**共識(shí)，是中國(guó)傳染性疾病臨床**對(duì)二代測(cè)序技術(shù)的臨床應(yīng)用的規(guī)范與質(zhì)量控制達(dá)成的共識(shí)。由于二代測(cè)序的成本仍然較高，尚不能作為輕癥傳染性疾病的主要選擇（A，Ⅲ），完成一次二代測(cè)序需要數(shù)千元人民幣，與之相比，完成1次血培養(yǎng)約40元人民幣，完成１次16SPCR檢測(cè)則需約50元人民幣。長(zhǎng)沙病毒測(cè)序進(jìn)化分析技術(shù)對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序主要是通過(guò)非特異性擴(kuò)增+克隆結(jié)合sanger測(cè)序來(lái)完成。

RNA/DNA病毒測(cè)序?qū)Σ《净蚪M進(jìn)行測(cè)序是快速了解病毒突變、毒力變化、病毒型別的有效方法?？梢愿鶕?jù)病毒基因組大小和類(lèi)型，采用PCR、RT-PCR或shotgun測(cè)序法，對(duì)病毒的部分或全長(zhǎng)基因組測(cè)序，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。服務(wù)標(biāo)準(zhǔn):測(cè)出的序列準(zhǔn)確性在99%以上;病毒全基因組測(cè)序測(cè)出序列在總基因組大小95%以上;數(shù)小于5個(gè);Shotgun測(cè)序的覆蓋度在6以上;PCR和RT-PCR測(cè)序達(dá)到2。服務(wù)說(shuō)明：1、提供病毒DNA或RNA作為樣品。2、PCR測(cè)序的DNA樣品總量大于5μg，濃度大于20ng/μl。DNA無(wú)降解。3、Shotgun測(cè)序法的DNA樣品總量大于20μg，濃度大于100ng/μl。DNA無(wú)降解。4、用RT-PCR和PCR測(cè)序法在提供參考序列時(shí)需同時(shí)提交樣品部分序列與參考序列的比對(duì)文件，確保同源性在95%以上。

全基因組測(cè)序要注意的事項(xiàng)：全基因組測(cè)序是對(duì)未知基因組序列的物種進(jìn)行個(gè)體的基因組測(cè)序。技術(shù)路線(xiàn)：提取基因組DNA，然后隨機(jī)打斷，電泳回收所需長(zhǎng)度的DNA的片段（0.2~5Kb），加上接頭,進(jìn)行DNA簇（Cluster）制備，后利用Paired-End（Solexa）或者M(jìn)ate-Pair（SOLiD）的方法對(duì)插入片段進(jìn)行測(cè)序。然后對(duì)測(cè)得的序列組裝成Contig，通過(guò)Paired-End的距離可進(jìn)一步組裝成Scaffold，進(jìn)而可組裝成染色體等。組裝效果與測(cè)序深度與覆蓋度、測(cè)序質(zhì)量等有關(guān)。常用的組裝有：SOAPdenovo、Trimity、Abyss等。測(cè)序深度（Sequencingdepth）是指測(cè)序得到的堿基總量（bp）與基因組大小的比值，它是評(píng)價(jià)測(cè)序量的指標(biāo)之一。測(cè)序深度與基因組覆蓋度之間是一個(gè)正相關(guān)的關(guān)系，測(cè)序帶來(lái)的錯(cuò)誤率或假陽(yáng)性結(jié)果會(huì)隨著測(cè)序深度的提升而下降。測(cè)序的個(gè)體，如果采用的是雙末端或Mate-Pair方案，當(dāng)測(cè)序深度在50X~100X以上時(shí)，基因組覆蓋度和測(cè)序錯(cuò)誤率控制均得以保證，后續(xù)序列組裝成染色體才能變得更容易與準(zhǔn)確。高通量測(cè)序能否定向檢測(cè)細(xì)菌病毒等微生物?

病毒全基因組測(cè)序定：上海探普生物科技有限公司的對(duì)病毒的全基因組進(jìn)行測(cè)序有什么優(yōu)勢(shì)？全國(guó)開(kāi)設(shè)病毒相關(guān)測(cè)序的公司不超過(guò)5家，只有探普生物是專(zhuān)門(mén)為病毒研究者服務(wù)的，探普生物的研發(fā)團(tuán)隊(duì)和實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)都來(lái)自全國(guó)各地病毒學(xué)、微生物學(xué)專(zhuān)業(yè)的高校，碩士及以上學(xué)歷成員超過(guò)60%，團(tuán)隊(duì)具備普通測(cè)序?qū)嶒?yàn)和分析基礎(chǔ)之外，同時(shí)具備病毒學(xué)及微生物學(xué)的學(xué)術(shù)背景，相當(dāng)了解病毒相關(guān)樣本情況、研究方向等。研究者在項(xiàng)目咨詢(xún)的時(shí)候就可以明顯感覺(jué)到探普生物的專(zhuān)業(yè)性，溝通順暢，省時(shí)省力。病毒全基因組測(cè)序具有的特點(diǎn)：獨(dú)有的一定定量技術(shù)，實(shí)現(xiàn)病原定量分析。病毒全序列測(cè)序

DNA病毒基因組測(cè)序：一種指定DNA病毒盡量完整的序列。病毒全序列測(cè)序

人類(lèi)的病毒性傳染很普遍，病毒可以通過(guò)呼吸道、消化道、皮膚等多種途徑進(jìn)行傳播，常常會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的公共健康問(wèn)題，對(duì)人類(lèi)的健康造成威脅。傳統(tǒng)的病毒檢測(cè)方法主要依賴(lài)于細(xì)胞培養(yǎng)法、抗原抗體結(jié)合法等，這些方法耗時(shí)久，靈敏度低，往往不能夠滿(mǎn)足臨床檢測(cè)需求。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，PCR方法用于病毒檢測(cè)的案例越來(lái)越多，但該方法的特異性限制了其同時(shí)檢測(cè)其它病毒的能力。因此，需要通過(guò)新的技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)。隨著二代測(cè)序技術(shù)成本的降低與普及，二代測(cè)序在臨床病原體檢測(cè)方面的優(yōu)勢(shì)也越加突顯。該技術(shù)基于二代測(cè)序平臺(tái)，可以直接從樣本中獲得病原體的核酸序列信息，再通過(guò)生物信息學(xué)的方法對(duì)得到的序列進(jìn)行分析，可以快速地對(duì)樣本中可能存在的全部病原體進(jìn)行鑒定，縮短了臨床檢測(cè)的周期。病毒全序列測(cè)序

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