武漢病毒全基因組測序突變分析哪家好

來源: 發(fā)布時間:2023-10-22

能實現(xiàn)對病毒的全基因組進行測序的技術手段:早期在高通量測序技術普及之前,對病毒的全基因組進行測序是通過非特異性擴增+克隆結合sanger測序來完成的。當物種有了參考的序列之后,可以通過特異性擴增+sanger測序獲得全基因組序列。Sanger測序準確度高,讀長很長,但與此同時,擴增和克隆工作費時費力,由于流程繁瑣,加上快速變異導致引物無法通用,該方法對于大量基因組的測序工作而言,可操作性不強,這對于研究者一直是一個困擾。高通量測序技術正式啟用之后,研究者可以將樣品處理至標準濃度和體積后進行測序和分析,減少了工作量,增加了成功率。探普生物進行了大量有針對性的研發(fā)和測試,開發(fā)了全套的實驗和分析流程用于對病毒的全基因組進行測序,該流程自運行以來廣受研究者們好評。




對病毒全基因組進行測序,是利用生物信息分析手段,得到病毒的全基因組序列.武漢病毒全基因組測序突變分析哪家好

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二代測序應用的患者類型的推薦:共識明確指出了二代測序應用的患者類型及使用的時機的意見:對于神經(jīng)系統(tǒng)急性傳染/血流傳染/呼吸道傳染患者,3天是二代測序使用的時機,在傳統(tǒng)方法(常規(guī)的生化檢查和培養(yǎng))3天未報陽性且經(jīng)驗性調整無效時,強烈推薦二代測序檢測;對疑似病毒傳染患者,包括:疑似神經(jīng)系統(tǒng)病毒傳染和病毒性肺炎且病情持續(xù)進展的患者,若完善傳統(tǒng)PCR檢測后依然未獲得明確的病原學證據(jù)時,強烈推薦二代測序檢測。對于疑似局灶性傳染患者完成常規(guī)的生物化學、培養(yǎng)或PCR檢測后,若未能獲取病原學診斷結果,推薦將二代測序作為檢測方法。而對于懷疑繼發(fā)性血流傳染患者:在原發(fā)傳染灶的病原學檢測為陰性或因各種因素無法送檢合適標本的情況下,可考慮將血標本的二代測序檢測作為二線檢測。國內全基因組病毒二代測序找哪家病毒全基因組測序具有的特點:獨有的一定定量技術,實現(xiàn)病原定量分析。

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二代測序可以用于對病毒的全基因組進行測序有哪些挑戰(zhàn)?二代測序相較sanger測序,差異主要就是單次運行可以獲得海量的數(shù)據(jù)量,因此也稱為高通量測序。想要通過高通量測序獲得病毒全序列,需要經(jīng)歷:核酸純化-文庫構建-生物信息學分析這三大基本流程。而高通量測序技術本身并不是以病毒為目標開發(fā)的,因此每個環(huán)節(jié)都是挑戰(zhàn)。核酸純化步驟決定了Input核酸的起始濃度和總量,從而決定了文庫構建的成敗、質量和產量;文庫的好壞決定了數(shù)據(jù)的質量和產出;而數(shù)據(jù)的質量產出直接影響分析結果。樣品一般核酸濃度很低,且?guī)в写罅克拗魑廴?,因此實驗部分和分析部分都比較困難。探普生物基于這些困難點,進行了大量有針對性的研發(fā)和測試,開發(fā)了全套的實驗和分析流程用于對病毒的全基因組進行測序,該流程自運行以來廣受研究者們好評。


全基因組測序要注意的事項:全基因組測序是對未知基因組序列的物種進行個體的基因組測序。技術路線:提取基因組DNA,然后隨機打斷,電泳回收所需長度的DNA的片段(0.2~5Kb),加上接頭,進行DNA簇(Cluster)制備,后利用Paired-End(Solexa)或者Mate-Pair(SOLiD)的方法對插入片段進行測序。然后對測得的序列組裝成Contig,通過Paired-End的距離可進一步組裝成Scaffold,進而可組裝成染色體等。組裝效果與測序深度與覆蓋度、測序質量等有關。常用的組裝有:SOAPdenovo、Trimity、Abyss等。測序深度(Sequencingdepth)是指測序得到的堿基總量(bp)與基因組大小的比值,它是評價測序量的指標之一。測序深度與基因組覆蓋度之間是一個正相關的關系,測序帶來的錯誤率或假陽性結果會隨著測序深度的提升而下降。測序的個體,如果采用的是雙末端或Mate-Pair方案,當測序深度在50X~100X以上時,基因組覆蓋度和測序錯誤率控制均得以保證,后續(xù)序列組裝成染色體才能變得更容易與準確。



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高通量測序在病毒準種研究中如何應用 在采用高通量測序技術研究準種耐藥性方面,人類免疫缺陷病毒(HIV)較為突出。人類免疫缺陷病毒的逆轉錄酶有非常大的錯配傾向,造成幾乎每復制1輪出現(xiàn)1個堿基對替換突變。被侵染的個體中存在非常巨大的病毒群,每天有1010個病毒粒子產生和死亡,在侵染后這種行為導致病毒快速形成一個多樣性的群,即準種。高通量測序是研究大群體中序列突變體特征的先進方法,它的一種應用是對個體抗病毒治療失敗時產生的數(shù)量很少的耐藥突變的定量研究。病毒全基因測序技術對疾病的致病原進行全基因組測序研究,能發(fā)現(xiàn)其中的變異與遺傳情況。全基因組二代測序分析公司

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