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YAP和TEAD1被AARS1乳酸化，被SIRT1去乙?；?/h1>
來源：
發(fā)布時間：2024-09-30
第一步，AARS1分別乳酸化YAP和TEADK90和K108位點
乳酸化蛋白質(zhì)組學(xué)KEGG分析富集多種通路，重點集中在Hippo信號通路上，YAP和TEAD1分別在K90和K108位點發(fā)生了乳酸化（圖1a-b）。IP-WB檢測也顯示YAP-TEAD發(fā)生乳酸化（圖1c）。此外，構(gòu)建YAP K90R和TEAD1 K108R突變體進(jìn)行IP-WB檢測顯示沒有發(fā)生乳酸化（圖1d）。另外，葡萄糖剝奪降低YAP-TEAD1的乳酸化水平，而乳酸處理明顯恢復(fù)其的乳酸化水平（圖1e-f）。
第二步，AARS1與YAP-TEAD1相互作用
Co-IP實驗發(fā)現(xiàn)AARS1與YAP-TEAD1互作（圖1g），細(xì)胞分離實驗表明主要發(fā)生在細(xì)胞核內(nèi)（圖1h）。GST pulldown實驗也顯示AARS1和YAP-TEAD1直接互作（圖1i-j）。體外乳酸化實驗表明，AARS1能夠直接使WT TEAD1乳酸化（圖1k），但不能使其K108R突變體乳酸化（圖1l）。 在HEK293FT細(xì)胞中，過表達(dá)WT AARS1而非其5M突變體促進(jìn)了YAP-TEAD1的乳酸化(圖1m)，而敲低AARS1則明顯降低了YAP-TEAD1的乳酸化水平(圖1n)。表明AARS1與YAP-TEAD1相互作用，并使其乳酸化修飾。
圖1 AARS1與YAP-TEAD1相互作用，并使其乳酸化修飾（Ref. Fig 2/S2）
第三步，YAP和TEAD直接被SIRT1去乙?；?nbsp;
探索可能導(dǎo)致YAP去乙酰化的酶。Sirtuin（去乙酰化酶）抑制劑煙酰胺(NAM)處理細(xì)胞，明顯增加了YAP的乳酸化（圖2a）。對sirtuin去乙?；讣易宄蓡T(SIRT1-SIRT7)進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)SIRT1的過表達(dá)明顯降低了YAP的乳酸化水平（圖2b）。同時，Co-IP實驗顯示SIRT1與YAP相互作用（圖2c）。構(gòu)建SIRT1的催化缺陷突變體(H363Y)，Co-IP實驗發(fā)現(xiàn)SIRT1的催化缺陷突變體(H363Y)未能降低細(xì)胞中YAP的乳酸化水平（圖2d）。表明SIRT1使YAP和TEAD去乙?；?，導(dǎo)致YAP和TEAD乳酸化水平增加。
圖2 YAP-TEAD的乳酸化促進(jìn)Hippo通路靶基因的表達(dá)，直接調(diào)控AARS1（Ref. Fig3/S2/3）
全文分享可查閱：【《JCI》解讀：腫LIU乳酸化修飾與泛素化修飾對抗！丙烯酰tRNA合成酶AARS1乳酸化修飾YAP復(fù)合體促進(jìn)信號傳導(dǎo)】。
第一步，AARS1分別乳酸化YAP和TEADK90和K108位點
乳酸化蛋白質(zhì)組學(xué)KEGG分析富集多種通路，重點集中在Hippo信號通路上，YAP和TEAD1分別在K90和K108位點發(fā)生了乳酸化（圖1a-b）。IP-WB檢測也顯示YAP-TEAD發(fā)生乳酸化（圖1c）。此外，構(gòu)建YAP K90R和TEAD1 K108R突變體進(jìn)行IP-WB檢測顯示沒有發(fā)生乳酸化（圖1d）。另外，葡萄糖剝奪降低YAP-TEAD1的乳酸化水平，而乳酸處理明顯恢復(fù)其的乳酸化水平（圖1e-f）。
第二步，AARS1與YAP-TEAD1相互作用
Co-IP實驗發(fā)現(xiàn)AARS1與YAP-TEAD1互作（圖1g），細(xì)胞分離實驗表明主要發(fā)生在細(xì)胞核內(nèi)（圖1h）。GST pulldown實驗也顯示AARS1和YAP-TEAD1直接互作（圖1i-j）。體外乳酸化實驗表明，AARS1能夠直接使WT TEAD1乳酸化（圖1k），但不能使其K108R突變體乳酸化（圖1l）。 在HEK293FT細(xì)胞中，過表達(dá)WT AARS1而非其5M突變體促進(jìn)了YAP-TEAD1的乳酸化(圖1m)，而敲低AARS1則明顯降低了YAP-TEAD1的乳酸化水平(圖1n)。表明AARS1與YAP-TEAD1相互作用，并使其乳酸化修飾。
圖1 AARS1與YAP-TEAD1相互作用，并使其乳酸化修飾（Ref. Fig 2/S2）
第三步，YAP和TEAD直接被SIRT1去乙?；?nbsp;
探索可能導(dǎo)致YAP去乙酰化的酶。Sirtuin（去乙酰化酶）抑制劑煙酰胺(NAM)處理細(xì)胞，明顯增加了YAP的乳酸化（圖2a）。對sirtuin去乙?；讣易宄蓡T(SIRT1-SIRT7)進(jìn)行篩選，發(fā)現(xiàn)SIRT1的過表達(dá)明顯降低了YAP的乳酸化水平（圖2b）。同時，Co-IP實驗顯示SIRT1與YAP相互作用（圖2c）。構(gòu)建SIRT1的催化缺陷突變體(H363Y)，Co-IP實驗發(fā)現(xiàn)SIRT1的催化缺陷突變體(H363Y)未能降低細(xì)胞中YAP的乳酸化水平（圖2d）。表明SIRT1使YAP和TEAD去乙?；?，導(dǎo)致YAP和TEAD乳酸化水平增加。
圖2 YAP-TEAD的乳酸化促進(jìn)Hippo通路靶基因的表達(dá)，直接調(diào)控AARS1（Ref. Fig3/S2/3）
全文分享可查閱：【《JCI》解讀：腫LIU乳酸化修飾與泛素化修飾對抗！丙烯酰tRNA合成酶AARS1乳酸化修飾YAP復(fù)合體促進(jìn)信號傳導(dǎo)】。
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