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SCARB2如何調(diào)控MYC轉(zhuǎn)錄活性？
SCARB2如何調(diào)控MYC轉(zhuǎn)錄活性？
第一步，SCARB2是否影響MYC蛋白修飾
翻譯后修飾在控制MYC的表達(dá)和活性中起關(guān)鍵作用。Anti-MYC IP-WB實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，SCARB2正向調(diào)控MYC蛋白乙?；揎椝剑▓D1d)。定量質(zhì)譜(MS)蛋白質(zhì)組學(xué)發(fā)現(xiàn)，MYC的賴氨酸(K) 148和326乙?；脑赟CARB2過表達(dá)組富集。構(gòu)建MYC-K148R和K326R突變體，anti-MYC IP-WB 實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)SCARB2只減弱MYC-K148R乙?；揎椝剑▓D1e）。表明SCARB2上調(diào)MYC-K148乙?；?。
第二步，SCARB2通過何種分子影響MYC蛋白乙?；揎?
研究表明p300、HDACs、KAT5、SIRT1和GCN5以直接和間接的方式影響MYC的乙酰化和去乙?；Ｍㄟ^IP-WB篩選發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)SCARB2可恢復(fù)由去乙酰化酶HDAC3介導(dǎo)的MYC乙?；档停▓D1f），表明SCARB2主要以HDAC3依賴的方式影響MYC乙?；?
第三步，MYC蛋白乙酰化修飾影響MYC轉(zhuǎn)錄活性
熒光素酶實(shí)驗(yàn)顯示，K148R突變降低了MYC的轉(zhuǎn)錄活性（圖1g）。ChIP-qPCR結(jié)果顯示，MYC-K148R突變減少了MYC與其靶基因的結(jié)合（圖1h）。研究顯示位于MYC-CT結(jié)構(gòu)域的K148介導(dǎo)MYC與GCN5、KAT5和BRD4等輔因子的相互作用，Co-IP實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證了該結(jié)論（圖1i）。功能實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，MYC-K148R突變的HCCLM3細(xì)胞的增殖能力和球形成能力明顯降低（圖1j）。表明，SCARB2增強(qiáng)的MYC-K148乙酰化為關(guān)鍵輔因子提供對接位點(diǎn)，對MYC的轉(zhuǎn)錄活性至關(guān)重要（圖1k）。
廣州基云專注互作機(jī)制研究，包括免疫沉淀試驗(yàn)（IP、RIP、CHIP、CHIRP）和蛋白組芯片檢測試驗(yàn)，協(xié)助輕松突破互作機(jī)制，讓科研成果更上一層樓。
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圖1SCARB2通過MYC-K148位點(diǎn)破壞hdac3介導(dǎo)的MYC去乙?；≧ef. Fig 3/4）
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