虹口區(qū)品質好的疾病動物模型建模

    來源：ZSCI基礎研究中如果加入動物實驗部分則使得研究更加趨于完善，投稿時中稿率也相應會增加。但將動物實驗做好卻不是一件容易的事情。這篇文章主要講動物模型的構建技術，把骨科、糖尿病相關的動物模型構建做了一個***的技術匯總，建議先碼后讀，文章內容有部分做了簡化，想看詳細講解可以在文末獲取課件！一、骨科相關動物模型1.骨關節(jié)炎1）骨關節(jié)炎模型構建方法（誘發(fā)性）-關節(jié)腔內手術法、關節(jié)腔注射法。2）模型評分標準①SafraninO染色與OARSI評分（PMID：31046827、30942801）②HE染色與OARSI評分（PMID：30609097）③SafraninO染色與Mankin評分（PMID：30609097）2.骨質疏松癥1）骨關節(jié)炎模型構建方法去趨法模型PMID：31037128實驗動物：小鼠方法：在戊巴比妥麻醉下進行雙側卵巢切除術以誘導骨質疏松癥，同時對照組小鼠*進行卵巢外置但未切除。2）模型檢測指標(PMID：31037128)①HE染色②Micro-CT③TRAcP染色④Micro-CT相關指標檢測3.類風濕性關節(jié)炎類風濕性關節(jié)炎（RA）是一種慢性自身免疫性疾病狀態(tài)，其特征是滑膜增生，軟骨退化和脊椎關節(jié)的骨侵蝕4.強直性脊柱炎1）強直性脊柱炎模型構建方法2）模型檢測指標。實驗動物向小型化的發(fā)展趨勢更有利于實驗者的日常管理和實驗操作。虹口區(qū)品質好的疾病動物模型建模

    本能發(fā)明的另一目的是公開了如上所述的方法制備的鼠慢性背根神經壓迫模型的用途是將該模型用于腰椎間盤突出***方法研究和/或影像學檢測研究。進一步地，該模型用于與磁性相關的***和/或檢測方面的研究，比如經顱磁刺激和核磁共振。本發(fā)明利用壓迫元件插入腰椎椎間孔，模擬腰椎間盤突出后突出物對神經根的持續(xù)慢性的機械壓迫癥狀，有益效果有：1.應用機械壓迫神經根模擬腰椎間盤突出病理，癥狀的病因學與臨床情況接近；2.相關的疼痛行為類似于特定的慢性疼痛癥狀，且易于客觀測量；3.制備方法簡單，對動物損傷小，穩(wěn)定性好，成功率高；4.造模關鍵材料壓迫元件不受磁場干擾，無在磁場作用下移位風險，有利于后續(xù)對動物進行磁療，經顱磁刺激等***及核磁共振等檢查；5.造模關鍵材料壓迫元件不影響磁場，不會對***儀器和核磁共振等儀器產生不良影響；6.此方法獲得的模型由于采用了h62黃銅或聚乳酸材料制備的壓迫元件，使得研究方法與檢測方法不受磁場作用限制，豐富了腰椎間盤突出臨床前研究的***方法及影像學檢測，為臨床研究提供理論依據。以下將結合附圖對本發(fā)明作進一步說明，以充分說明本發(fā)明的目的、技術特征和技術效果。附圖說明圖1是壓迫元件插入椎間孔的結構示意圖。黃浦區(qū)非酒肝疾病動物模型建模如何定義好的小鼠疾病模型？

    pirb在軸突生長錐表達，位于富含肌動蛋白的前緣和synapsin免疫陽性的囊泡中，在神經元突起的表達呈點狀分布。文獻表明，pirb表達隨年齡增加，特別是在老齡認知損傷的小鼠海馬中，pirb能夠抑制軸突再生和突觸可塑性。研究表明小鼠aβ寡聚體對海馬長時程增強的破壞作用需要pirb的參與，在ad轉基因模型中，pirb不僅參與成年小鼠記憶缺失，而且介導幼年小鼠視皮層突觸可塑性的丟失。這些研究提示我們，pirb參與突觸可塑性，抑制pirb可能對ad起到***效應。但是在cns，pirb的功能和下游抑制性信號通路仍然未被闡明，因此迫切需要pirb的細胞和動物模型。目前對于pirb基因功能的研究，多采用可溶性的pirb的胞外段(pirbextracellularpeptide，pep)和抑制劑，或者采用慢病毒轉染。前者受到是否能夠透過血腦屏障和抑制劑效率的影響，后者慢病毒轉染在原代細胞和在體的轉染效率比較低，使研究pirb的功能受到極大的限制。為解決這些問題，我們通過crispr/cas9技術建立了pirb基因敲入小鼠，將pirb基因敲入c57bl/6j的rosa26位點，為研究pirb在免疫系統或者神經系統的作用和機制提供了很好的工具。技術實現要素：本發(fā)明的目的在于提供pirb基因敲入的小鼠動物模型。

    f1代小鼠southern印記的5’探針引物如下：primersfor5’probe:5’probeforwardprimer:5’-aaacgtggagtaggcaatacccagg-3’5’probereverseprimer:5’-aaagaagggtcacctcagtctccct-3’primersfor3’probe:3’probeforwardprimer:5’-ttctgggcaggcttaaaggctaac-3’3’probereverseprimer:5’-aggagcgggagaaatggatatgaag-3’southern印記的目標片段大小如下：5’probe-bamhi:3’probe-avrii:。步驟c、采用限制性內切酶bamhi和avrii對dna進行切割；瓊脂糖凝膠電泳分離dna；步驟d、將dna轉到尼龍膜上；步驟e、探針變性后，與dna分子進行雜交，nbt/bcip化學顯色法顯色，拍照觀察。southern雜交結果如圖6所示，可以看到：6、8、9號pirb基因敲除小鼠如果被bamhi切割，在，wt小鼠只在，如果被avrii切割，pirb基因敲除小鼠在，wt小鼠只在。步驟6、將f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子pirb基因敲入小鼠，即為本發(fā)明所述小鼠pirb基因敲入的動物模型。將本發(fā)明獲得的動物模型f2代純合子小鼠與同品系小鼠組織/細胞特異性cre表達的小鼠雜交，獲得f3代小鼠，可以實現在不同組織或者細胞類型中敲入pirb基因。對f3代小鼠進行基因型的鑒定：含有無(pirb-cwt)、一個(pirb-chet)或者兩個。查閱已有的相關小鼠模型綜述文獻。

pirb的mrna和蛋白表達水平***增加。在cns，pirb是髓鞘抑制因子nogo-a、mag、omgp的受體，參與神經元突起芽發(fā)和生長錐塌陷，抑制神經元軸突再生和突觸可塑性。pirb的細胞外免疫球蛋白結構域(d3-d6)介導了pirb與nogoa的結合。近年來關于阿爾茨海默病(alzheimer’sdisease，ad)研究還發(fā)現，pirb是aβ42寡聚體的高親和力受體，親和力達到納摩爾水平。pirb的前兩個細胞外免疫球蛋白結構域(d1-d2)介導了aβ42寡聚體和pirb的相互作用，導致絲切蛋白(cofilin)信號通路****組織化學染色結果發(fā)現。這類動物疾病模型是指各種疾病共同性的一些病理變化過程的模型。無錫疾病動物模型建模說明書

動物模型的意義和優(yōu)越性！虹口區(qū)品質好的疾病動物模型建模

實驗動物年齡：成年5、實驗動物體重：160-200g6、實驗動物環(huán)境：SPF級1、實驗方法：熱力致皮膚損傷法。麻醉大鼠，根據體重腹部備皮，然后固定于實驗臺上。將大鼠移近加熱純凈水的燒杯，將紗布條浸入熱水中，待水溫恒定于99℃時，取出紗布，立即平鋪于待燙部位，于紗布接觸大鼠皮膚后開始計時。致傷3s為淺II°燙傷，致傷10s為深II°燙傷。2、檢測標準：a.皮膚大體觀察：致傷3s大鼠局部皮膚發(fā)紅、輕微水腫。愈合后毛發(fā)生長良好，有少量紅褐**素沉著，皮膚輕微攣縮，表皮光滑；致傷10s大鼠局部皮膚發(fā)白、水腫。愈合后毛發(fā)生長良好，皮膚瘢痕形成，表面粗糙不平。b.皮膚組織病理學觀察：致傷3s大鼠表皮層次尚清楚，細胞明顯腫脹、變性，層次結構尚清楚，細胞核結構不清；致傷10s大鼠表皮細胞部分脫落，結構不清，明顯變性、壞死，部分細胞已溶解虹口區(qū)品質好的疾病動物模型建模

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