湖北哪一家EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢

通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應(yīng)，把熒光集團(tuán)標(biāo)記到新合成的含有EdU的DNA上面，這樣就可以進(jìn)行高效快速的檢測出DNA復(fù)制活性，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)等方面的研究。EdU標(biāo)記(a)將細(xì)胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細(xì)胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因?yàn)檫@樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2小時(shí)，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時(shí)間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)；2)大多數(shù)**細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2小時(shí)的孵育時(shí)間(d)以lxPBS清洗細(xì)胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。注：貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的功能具體介紹。湖北哪一家EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢

EdU上的乙炔基能與生物素標(biāo)記的疊氮化物(Biotinlabeledazide)通過一價(jià)銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱作點(diǎn)擊反應(yīng)(Clickreaction)，其反應(yīng)原理參見圖1。通過點(diǎn)擊反應(yīng)，新合成的DNA會被相應(yīng)的生物素探針?biāo)鶚?biāo)記，從而可以使用適當(dāng)?shù)臋z測設(shè)備檢測到增殖的細(xì)胞。EdU檢測法中的點(diǎn)擊反應(yīng)(Clickreaction)原理圖。生物素或熒光探針等標(biāo)記的疊氮化物(LabeledAzide)與摻入到細(xì)胞DNA中的EdU，在銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，終使細(xì)胞DNA標(biāo)記上生物素等探針。河南EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢上海東寰告訴您EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的應(yīng)用范圍。

細(xì)胞活性的細(xì)胞增殖檢測方法，能檢測到細(xì)胞的總體增殖效果，但無法檢測到單個(gè)的增殖細(xì)胞。這幾種方法盡管都不是檢測DNA合成的，但被用于替代[3H]thymidine摻入法。CFDA SE法(C0051、C1031)基于細(xì)胞熒光示蹤的原理能檢測到單個(gè)的增殖細(xì)胞，但由于每增殖一次熒光減弱一半，在熒光顯微鏡下較難區(qū)分熒光減弱一半的細(xì)胞，檢測靈敏度不是很高，通常適用于流式細(xì)胞儀檢測。在進(jìn)行科學(xué)研究時(shí)，上述這些基于細(xì)胞活性或CFDA SE的方法可以作為EdU法的補(bǔ)充性檢測方法。

該方法無需DNA變性，無需抗原修復(fù)，無需抗原抗體反應(yīng)，簡單、靈敏、快速、準(zhǔn)確，適合各種細(xì)胞系的細(xì)胞增殖檢測，尤其適用于各種細(xì)胞系的高通量篩選實(shí)驗(yàn)，如在藥物篩選中檢測加藥后細(xì)胞增殖變化。EdU方法無需DNA變性，完全適用于各種顯微成像技術(shù)，在10X，20X，40X都能得到很好的成像效果。EdU細(xì)胞增殖檢測方法不需要?jiǎng)×业腄NA變性操作，只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理，能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識別位點(diǎn)。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒使用時(shí)的注意事項(xiàng)。

細(xì)胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛細(xì)胞固定液，室溫培養(yǎng)30分鐘，棄固定液；(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸，搖床孵育5分鐘，以中和過量的多聚甲醛；(c)棄甘氨酸溶液，每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；(d)每孔加入300ul0.5%TritonX-100細(xì)胞通透液，室溫通透10分鐘，棄細(xì)胞通透溶液；(e)每孔加入300ulPBS洗液，室溫清洗5分鐘；該產(chǎn)品是采用成像檢測方法對貼壁細(xì)胞進(jìn)行檢測，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細(xì)胞可在孵育EdU后進(jìn)行細(xì)胞涂片處理，固定后再采用貼壁細(xì)胞的染色流程進(jìn)行檢測。也可以應(yīng)用于流式細(xì)胞儀檢測。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒對如今市場的影響。湖南哪家公司提供EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒供應(yīng)商

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EdU法檢測試劑盒是Brdu方法的**性突破。EdU（5-溴-2-脫氧尿嘧啶）試劑盒是一種嘧啶類似物，與BrdU檢測方法相比，EdU檢測方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU檢測染料只有BrdU抗體大小的1/500，在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散，無需DNA變性（酸解、熱解、酶解等）即可有效檢測，可有效避免樣品損傷，在細(xì)胞和組織水平能更準(zhǔn)確地反映細(xì)胞增殖等現(xiàn)象。EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物，能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替T滲入正在復(fù)制的DNA分子，通過基于EdU與Apollo®熒光染料的特異性反應(yīng)檢測DNA復(fù)制活性，通過檢測EdU標(biāo)記便能準(zhǔn)確地反映細(xì)胞的增殖情況。湖北哪一家EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒優(yōu)勢

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