浙江正規(guī)EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

上海東寰生物科技有限公司即核苷滲入法。以前常用的核苷滲入法是BrdU(胸腺嘧啶核苷酸類似物)法，但BrdU法的缺點(diǎn)是需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合，導(dǎo)致了DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的破壞，影響了其他染料的結(jié)合染色，導(dǎo)致染色彌散，準(zhǔn)確性降低等問(wèn)題。EdU法作為新型的核苷滲入法具有以下優(yōu)點(diǎn)：安全—–不使用[3H]thymidine，無(wú)放射性污染。簡(jiǎn)單—–基于小分子化學(xué)反應(yīng)的檢測(cè)方法，簡(jiǎn)單高效，需三步：EdU孵育；細(xì)胞固定；熒光檢測(cè)。無(wú)需DNA變性和孵育抗體。EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的價(jià)格。浙江正規(guī)EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書

但該方法由于有放射性污染并且很難實(shí)現(xiàn)單細(xì)胞檢測(cè)而受到很大的限制，隨后逐漸被基于抗體檢測(cè)的BrdU(bromo-deoxyuridine)法所替代。BrdU法步驟繁多，且需要使用BrdU抗體，影響因素較多，穩(wěn)定性比較差。并且由于BrdU法需要使用抗體，有時(shí)會(huì)和其它目的蛋白基于抗體的檢測(cè)相互產(chǎn)生干擾。EdU法基于EdU摻入和后續(xù)的點(diǎn)擊反應(yīng)，無(wú)需使用抗體、操作便捷、檢測(cè)靈敏度高，是一種在BrdU法基礎(chǔ)上升級(jí)換代的新方法，將會(huì)逐步取代BrdU法。MTT法(C0009)、WST-1法(C0035、C0036)、CCK-8法(C0037、C0038、C0039、C0040、C0041、C0042、C0043、C0046)和CellTiter-Lumi?化學(xué)發(fā)光法(C0065、C0068)都是基于細(xì)胞活性的細(xì)胞增殖檢測(cè)方法，能檢測(cè)到細(xì)胞的總體增殖效果，但無(wú)法檢測(cè)到單個(gè)的增殖細(xì)胞。天津哪一家EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒優(yōu)勢(shì)上海哪家EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒值得信賴？

EdU檢測(cè)方法更快速、更靈敏、更準(zhǔn)確。EdU檢測(cè)染料只有BrdU抗體大小的1/500，在細(xì)胞內(nèi)很容易擴(kuò)散，無(wú)需DNA變性（酸解、熱解、酶解等）即可有效檢測(cè)，可有效避免樣品損傷，在細(xì)胞和組織水平能更準(zhǔn)確地反映細(xì)胞增殖等現(xiàn)象。EdU染色(a)通過(guò)用10:1去離子水稀釋10x反應(yīng)緩沖液進(jìn)行配制1xEdU反應(yīng)緩沖液；(b)按照溶解200mg緩沖添加劑溶于1ml去離子水的比例稱取適量的粉末進(jìn)行溶解，即為可用的緩沖添加劑的濃度，建議現(xiàn)用現(xiàn)配；注：緩沖添加劑為白色粉末，較難準(zhǔn)確稱量，稱量范圍可稍微放寬，但是不應(yīng)超過(guò)±20%，且該粉末較易氧化，使用后請(qǐng)旋緊管蓋，如試劑出現(xiàn)棕黃色，則需報(bào)廢或更換。

    具有保密性的材料除外）。2、目的蛋白相應(yīng)一抗：請(qǐng)您提供質(zhì)量保證的一抗（或委托我公司準(zhǔn)備）。抗體的使用量通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)后進(jìn)行確認(rèn)，原則上不回收使用一抗。3、陽(yáng)性對(duì)照樣品（盡量提供）。4、相關(guān)文獻(xiàn)（可選）。注：若要檢測(cè)磷酸化蛋白，請(qǐng)?jiān)?-3個(gè)月內(nèi)進(jìn)行，因?yàn)殚L(zhǎng)時(shí)間保存的樣品容易使磷酸化蛋白去磷酸化而檢測(cè)不到磷酸化條帶。五、提交給客戶結(jié)果1、預(yù)實(shí)驗(yàn)顯色結(jié)果（TIFF格式、JPEG格式或PNG格式），預(yù)實(shí)驗(yàn)采取3個(gè)一抗稀釋度，選取部分實(shí)驗(yàn)樣本。2、正式實(shí)驗(yàn)顯色結(jié)果（TIFF格式、JPEG格式或PNG格式）。3、完整實(shí)驗(yàn)報(bào)告。六、服務(wù)項(xiàng)目說(shuō)明1、提供的蛋白量與待檢測(cè)的目的蛋白數(shù)量有關(guān)，蛋白數(shù)量增加相應(yīng)的樣品量也要增加。2、每張膜樣品數(shù)量為1-8個(gè)，不足8個(gè)以8個(gè)收取。9-16個(gè)樣品為2張膜，17-24個(gè)樣品為3張膜；以此類推。舉例：7個(gè)樣品，1個(gè)目的蛋白，算1張膜；有9個(gè)樣品，1個(gè)目的蛋白，算2張膜；7個(gè)樣品，2個(gè)目的蛋白，算2張膜，有9個(gè)樣品，2個(gè)目的蛋白，算4張膜。注：以上為一般算法。如果客戶樣品數(shù)量需要按照組別等來(lái)進(jìn)行上樣時(shí)，需要重新確定每張膜的上樣量及膜的張數(shù)。3、選擇部分樣品進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，參考目的蛋白一抗說(shuō)明書進(jìn)行3個(gè)稀釋度的預(yù)實(shí)驗(yàn)。EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒的功能具體介紹。

另一方面，EdU上的乙炔基能與生物素標(biāo)記的疊氮化物(Biotinlabeledazide)通過(guò)一價(jià)銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱作點(diǎn)擊反應(yīng)(Clickreaction)，其反應(yīng)原理參見圖1。通過(guò)點(diǎn)擊反應(yīng)，新合成的DNA會(huì)被相應(yīng)的生物素探針?biāo)鶚?biāo)記，從而可以使用適當(dāng)?shù)臋z測(cè)設(shè)備檢測(cè)到增殖的細(xì)胞。圖1.BeyoClick?EdU檢測(cè)法中的點(diǎn)擊反應(yīng)(Clickreaction)原理圖。生物素或熒光探針等標(biāo)記的疊氮化物(LabeledAzide)與摻入到細(xì)胞DNA中的EdU，在銅離子的催化發(fā)生共價(jià)反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，終使細(xì)胞DNA標(biāo)記上生物素等探針。本試劑盒反應(yīng)簡(jiǎn)單、檢測(cè)靈敏度高。本試劑盒基于簡(jiǎn)單高效的點(diǎn)擊反應(yīng)，無(wú)需DNA變性，只需少量的小分子疊氮化物探針即可非常有效地標(biāo)記出摻入的EdU，并且可以檢測(cè)到單個(gè)細(xì)胞的增殖情況。上海東寰告訴您如何正確使用EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒？河北如何使用EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒購(gòu)買

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該產(chǎn)品是采用成像檢測(cè)方法對(duì)貼壁細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細(xì)胞可在孵育EdU后進(jìn)行細(xì)胞涂片處理，固定后再采用貼壁細(xì)胞的染色流程進(jìn)行檢測(cè)。也可以應(yīng)用于流式細(xì)胞儀檢測(cè)。建議染色完成后立即進(jìn)行熒光顯微鏡拍照觀察；如果條件限制，請(qǐng)于4°C條件下避光濕潤(rùn)保存3天之內(nèi)完成拍照。若為細(xì)胞爬片或涂片，可使用抗熒光淬滅封片劑進(jìn)行封片后于4°C條件下保存及拍照檢測(cè)。而EdU檢測(cè)方法不需要?jiǎng)×业腄NA變性，只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理，能夠較好地保護(hù)細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識(shí)別位點(diǎn)，操作步驟更加快速、靈敏和準(zhǔn)確浙江正規(guī)EdU細(xì)胞增殖檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書