北京如何使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒

EdU（5-溴-2-脫氧尿嘧啶）試劑盒是一種嘧啶類似物，可以在DNA合成期整合入DNA雙鏈。通過以上原理圖的對比，大家不難發(fā)現(xiàn)，EdU法檢測細(xì)胞增殖，無須抗體，無變性步驟，保持細(xì)胞形態(tài)和DNA完整性，是一種簡單，可靠，省事的創(chuàng)新方法。但是，現(xiàn)在依然有很多研究者們依然沒有得到細(xì)胞增殖檢測*行之有效，節(jié)約反應(yīng)時間的方法。Abbkine的EdU檢測試劑盒有兩個型號，分別匹配的是兩種不同的熒光通道，細(xì)胞增殖成像分析試劑盒（EdU法）(綠色熒光)，KTA2030，488通道；細(xì)胞增殖成像分析試劑盒（EdU法）(橘紅色熒光)，KTA2031，549通道。EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的特點是什么？上海東寰告訴您。北京如何使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒

    熒光試劑請避光保存。反應(yīng)緩沖液10X1ml催化劑溶液25x400ulTAMRA紅色熒光溶液400x25ul緩沖添加劑粉末200mgHoechstX20ul使用前須知該產(chǎn)品是采用成像檢測方法對貼壁細(xì)胞進行檢測，適用于熒光顯微鏡、共聚焦顯微鏡等儀器。非貼壁細(xì)胞可在孵育EdU后進行細(xì)胞涂片處理，固定后再采用貼壁細(xì)胞的染色流程進行檢測。也可以應(yīng)用于流式細(xì)胞儀檢測。實驗步驟(以24孔板，HK2貼壁細(xì)胞為例)EdU標(biāo)記(a)將細(xì)胞完全培養(yǎng)基中按照500:1的比例加入EdU溶液，制成2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基；(b)提前將2xEdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后等體積加入到細(xì)胞原有培養(yǎng)基中，獲得lxEdU溶液，其中EdU的終濃度為10uM；注：1)我們不建議替換全部培養(yǎng)基，因為這樣可能會影響細(xì)胞增殖的速度；2)配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜；(c)每孔加入300ul含EdU培養(yǎng)基孵育細(xì)胞2小時，棄培養(yǎng)基；注：1)培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長狀態(tài)；2)大多數(shù)**細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2小時的孵育時間(d)以lxPBS清洗細(xì)胞兩次，毎次5分鐘，以除去未摻入DNA的EdU殘留。注：貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強度。細(xì)胞的固定和通透(a)每孔加入150ul4%多聚甲醛細(xì)胞固定液，室溫培養(yǎng)30分鐘，棄固定液；(b)毎孔加入150ul2mg/ml甘氨酸。湖北EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的發(fā)展前景如何呢？

EdU(5-ethynyl-2-deoxyuridine)，中文名為5-乙炔基-2-脫氧尿苷，是一種新型胸苷(胸腺嘧啶脫氧核苷，thymidine)類似物，EdU可以在DNA合成過程中替代胸苷摻入到新合成的DNA中。另一方面，EdU上的乙炔基能與生物素標(biāo)記的疊氮化物(Biotinlabeledazide)通過一價銅離子的催化發(fā)生共價反應(yīng)，形成穩(wěn)定的三唑環(huán)，該反應(yīng)非常迅速，被稱作點擊反應(yīng)(Clickreaction)，其反應(yīng)原理參見圖1。通過點擊反應(yīng)，新合成的DNA會被相應(yīng)的生物素探針?biāo)鶚?biāo)記，從而可以使用適當(dāng)?shù)臋z測設(shè)備檢測到增殖的細(xì)胞。

BrdU法和BeyoClick?EdU法檢測原理的比較。A.BrdU法需使用大分子的BrdU抗體，由于空間位阻，雙鏈DNA須變性后才能使BrdU抗體與BrdU結(jié)合。法使用小分子標(biāo)記的疊氮化物(Azide)，無需DNA變性，操作更便捷，兼容性好，檢測結(jié)果更加穩(wěn)定可靠。本試劑盒檢測快速。相對于BrdU法，本試劑盒采用BeyoClick?EdU法檢測新合成的DNA，所需時間縮短。經(jīng)本試劑盒處理后，增殖的細(xì)胞呈棕色，可以用普通光學(xué)顯微鏡進行觀察。HeLa細(xì)胞用本試劑盒檢測細(xì)胞增殖的效果參見圖3。圖3.HeLa細(xì)胞用本試劑盒檢測細(xì)胞增殖的效果圖。無EdU組觀察不到棕色染色(左側(cè)一列)；EdU(10μM)孵育2小時組有明顯的棕色染色(中間一列)；而用10mM的DNA合成抑制劑羥基脲(Hydroxyurea)提前預(yù)處理0.5小時后，棕色染色減弱，說明DNA合成被抑制后，EdU的摻入被抑制(右側(cè)一列)。上海EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒的發(fā)展趨勢。

    EdU細(xì)胞増殖檢測試劑盒(紅色熒光)使用說明產(chǎn)品簡介細(xì)胞增殖是評價細(xì)胞活性、代謝、生理和病理狀況的重要指標(biāo)。EdU(5-Ethynyl-2,-deoxyuridine)是一種胸腺嘧啶核苷類似物，其連有的炔烴基團在天然化合物中很少見，能夠在細(xì)胞增殖時期代替胸腺嘧啶(T)摻入正在復(fù)制的DNA分子中，通過基于EdU與熒光染料的特異性共軛反應(yīng)，把熒光集團標(biāo)記到新合成的含有EdU的DNA上面，這樣就可以進行高效快速的檢測出DNA復(fù)制活性，廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖、細(xì)胞分化、生長與發(fā)育、DNA損傷修復(fù)等方面的研究。傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法需要DNA變性、抗原修復(fù)、抗原抗體過夜孵育等復(fù)雜繁瑣的操作步驟。而EdU檢測方法不需要劇烈的DNA變性，只需溫和的細(xì)胞固定化和透化處理，能夠較好地保護細(xì)胞形態(tài)、DNA整體結(jié)構(gòu)及細(xì)胞內(nèi)抗原識別位點，操作步驟更加快速、靈敏和準(zhǔn)確。EdU與胸腺嘧啶(T)結(jié)構(gòu)非常相似，而EdU染料大小只有BrdU抗體的1/500,在細(xì)胞內(nèi)很容易擴散，無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等)，可有效避免樣品損傷，而且無需抗原抗體反應(yīng)，能在細(xì)胞和組織水平更快速便捷地反映DNA復(fù)制活性。試劑盒組分產(chǎn)品編號試劑濃度試劑量保存條件EdU溶液1000X40ul室溫運輸，4℃長期儲存，勿凍存。使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒前的安全檢查。福建咨詢EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒原理

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這一類細(xì)胞增殖用熒光標(biāo)記采用溫和的點擊實驗方案，準(zhǔn)確且兼容各種抗體實驗方案，整個實驗可在30分鐘內(nèi)完成，在結(jié)果的數(shù)據(jù)豐富程度方面，堪比多重分析方法。此外，該方法適用于培養(yǎng)的細(xì)胞或組織切片，可用流式細(xì)胞術(shù)分析檢測EdU Flow Cytometry Kit 594（BCK-FC594-100）；可進行HCS分析或進行細(xì)胞裂解液微孔板檢測EdU HTS Kit 594（BCK-HTS594-20）；也可適用于培養(yǎng)中的細(xì)胞，或通過注射方法進行實驗的小動物樣本，進行體內(nèi)成像分析In Vivo EdU Click Kit 594(BCK594-IV-IM-M)、流式細(xì)胞檢測或HCS高通量檢測。(共有488、555、594、647四種熒光染料可選）。北京如何使用EdU細(xì)胞增殖檢測試劑盒