長寧區(qū)心血管疾病疾病動物模型建模

另外pirb在髓細(xì)胞和b細(xì)胞的表達隨細(xì)胞分化增加。在免疫系統(tǒng)，pirb作為主要組織相容性復(fù)合物1(classimajorhistocompatibilitycomplex，mhc1)的受體，參與免疫調(diào)節(jié)，包括中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞整合素通路、細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞、b淋巴細(xì)胞和體液—細(xì)胞免疫應(yīng)答等。pirb的前兩個細(xì)胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域(d1-d2)介導(dǎo)mhci和pirb的結(jié)合。在系統(tǒng)(centralnervoussystem，cns)，pirb在許多腦區(qū)包括皮層、海馬、小腦和嗅球都有表達，但在成年脊髓不表達。在細(xì)胞層面，pirb不僅表達于神經(jīng)元，也表達于星形膠質(zhì)細(xì)胞。在許多病理條件下，如腦外傷、中風(fēng)和cns，pirb的mrna和蛋白表達水平增加。上海東寰在動物建模方面已經(jīng)有了多年的技術(shù)經(jīng)驗。長寧區(qū)心血管疾病疾病動物模型建模

目前鑒定出15個外顯子，外顯子1起始密碼為atg，外顯子15的終止密碼子是tga(轉(zhuǎn)錄本：)。pirb蛋白屬于i型跨膜糖蛋白，包含由六個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(domain，d)組成(d1-d6)的胞外段，一個疏水的跨膜段，三個免疫受體酪氨酸依賴的抑制序列(immunoreceptortyrosinebasedinhibitorymotifs，itims)和一個itims樣序列組成的胞內(nèi)段。理論上講，pirb的分子量約為92kd，但是western-blot分析中，pirb經(jīng)常位于105kd處，因為pirb是糖蛋白。以往研究發(fā)現(xiàn)，pirb在免疫系統(tǒng)和中樞調(diào)節(jié)中均發(fā)揮重要作用。在免疫系統(tǒng)中，pirb在許多造血細(xì)胞都有表達，包括b細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和樹突細(xì)胞，但是在胸腺細(xì)胞、成熟的t細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞不表達。非酒肝疾病動物模型建模價格小鼠疾病模型有助于遺傳性疾病致病基因的發(fā)現(xiàn)與驗證。

該模型能夠幫助我們研究pirb基因在免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)的功能以及下游的調(diào)節(jié)機制。本發(fā)明的另一目的在于提供上述小鼠動物模型的構(gòu)建方法。本發(fā)明所采用的第一種技術(shù)方案是：pirb基因敲入的小鼠動物模型，包括確定pirb基因的待敲入的特異性靶位點grna1和grna2，將pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的內(nèi)含子1內(nèi)，所述grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如。本發(fā)明所采用的第二種技術(shù)方案為：pirb基因敲入的小鼠動物模型的構(gòu)建方法，具體按照以下步驟實施：步驟1、基于crispr/cas9技術(shù)構(gòu)建針對c57bl/6j小鼠rosa26基因的特異性grna1和grna2，grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如；步驟2、構(gòu)建“cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya”基因盒打靶載體，將打靶載體進行線性化處理；步驟3、步驟2中將含有l(wèi)oxp位點打靶載體、步驟1中有活性的grna1和grna2與cas9蛋白共同注射進入**小鼠受精卵中，獲得f0代小鼠；步驟4、將步驟3中性成熟的陽性f0小鼠分別與野生型鼠交配繁一代，獲得f1代雜合子小鼠，通過pcr、測序和southern雜交確定動物基因型；步驟5、將步驟4獲得的f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子小鼠。

1、動物模型名稱：膽管結(jié)扎致肝膽管性肝硬化大鼠模型2、實驗動物種屬：SD大鼠3、實驗動物性別：雄性4、實驗動物年齡：5周5、實驗動物體重：200~220g6、實驗動物環(huán)境：SPF級1、實驗方法：用膽管結(jié)扎法。大鼠按10mg/kg體重腹腔注射3％戊巴比妥鈉麻醉，腹部皮膚消毒，無菌操作沿腹部正中線剪開腹腔，分離出膽管，在膽管近端和遠(yuǎn)端2處結(jié)扎膽管。手術(shù)后正常飼養(yǎng)28天。28天后解剖取肝臟進行組織病理學(xué)檢查。2、檢測標(biāo)準(zhǔn)：肝臟病理切片鏡下小膽管伴纖維組織增生積分按程度為0-3分：0分：無明顯病變；1分：呈局灶性分布，受累面積在30%以下者；2分：呈多灶性分布，受累面積在30%-70%之間者；3分：呈彌漫性分布，受累面積在70%以上者。查閱已有的相關(guān)小鼠模型綜述文獻。

即為本發(fā)明構(gòu)建的一種pirb基因敲入的小鼠動物模型。本發(fā)明所采用第二種技術(shù)方案的特點還在于，步驟1中得到grna1和grna2后分別與trancrrna在25℃孵育10min形成二級結(jié)構(gòu)。步驟3中g(shù)rna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl。步驟4中southern雜交采用bamhi和avrii核酸內(nèi)切酶切割f1代雜合子小鼠的dna。本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明提供了pirb基因敲入的小鼠動物模型及其構(gòu)建方法，本發(fā)明的小鼠動物模型對于pirb基因功能的研究和在體驗證提供了良好的基礎(chǔ)。分離自pirb基因敲入小鼠的細(xì)胞還可以用于研究pirb發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的下游機制。通過pirb敲入動物模型與不同類型cre小鼠的雜交，可以用于研究ad不同***或不同細(xì)胞類型pirb的調(diào)節(jié)作用。附圖說明圖1為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠插入pirb基因cds和loxp位點的打靶質(zhì)粒載體的構(gòu)建圖；圖2為本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠模型的構(gòu)建方法的流程圖；圖3為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠的基因型pcr結(jié)果鑒定電泳圖；圖4為本發(fā)明f1代pirb敲入的小鼠驗證pirb基因敲入效果的測序峰圖；圖5為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進行southern鑒定的方法示意圖；圖6為本發(fā)明f1代pirb基因敲入的小鼠進行southern鑒定的結(jié)果圖?？梢院喕瘜嶒灢僮骱蜆悠肥占?。哪家公司提供疾病動物模型建模說明書

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