浦東新區(qū)大鼠疾病動物模型建模

r3):5’-atactccgaggcggatcacaa-3’步驟4、鑒定為pirb基因敲入的f0代雄性小鼠7周齡、雌性小鼠6周齡分別與野生型異性小鼠交配獲得f1代雜合子小鼠，圖2為本發(fā)明f1代雜合子小鼠pirb基因敲除小鼠的流程圖，小鼠出生后20天進行pcr鑒定，若有陽性小鼠出生，則表示轉基因已經整合到生殖細胞。(1)通過pcr方法對獲得的f1代小鼠進行基因型的鑒定：(a)dna的提?。悍椒?：采用takaraminibestuniversalgenomicdnaextractionkit()來獲得高純度的基因組dna。步驟a.每只小鼠剪下一段尾巴(2～5mm)，放入離心管中，加入180μlbuffergl，20μl蛋白激酶k和10μlrnasea。步驟b.將步驟a離心管內于56℃孵育過夜。步驟c.過夜后12000rpm離心2min去除雜質。步驟d.加入200μlbuffergb和200μl無水乙醇，充分混勻。步驟e.將吸附柱放在收集管上，將步驟d得到的樣品加到吸附柱里，12000rpm離心2min，棄掉收集管中液體。步驟f.棄去液體后在吸附柱中加入500μlbufferwa，12000rpm離心1min，棄掉收集管中液體。步驟g.在收集管中加入700μlbufferwb，12000rpm離心1min。棄掉收集管中液體。注意：bufferwb需要與100％乙醇預混，沿管壁加入bufferwb沖走殘余的鹽。步驟h.重復步驟g一次。臨床上平時不易見到的疾病可用動物隨時復制出來。浦東新區(qū)大鼠疾病動物模型建模

葡聚糖硫酸鈉（DSS）致潰瘍性結腸炎小鼠模型：1、動物模型名稱：葡聚糖硫酸鈉（DSS）致潰瘍性結腸炎小鼠模型2、實驗動物種屬：BALB/c小鼠3、實驗動物性別：雄性4、實驗動物年齡：成年鼠5、實驗動物體重：18g-22g6、實驗動物環(huán)境：SPF級1、實驗方法：實驗前小鼠禁食不禁水24h，24小時后提起鼠尾將其懸空，使掙扎以排出大腸遠端的大便。小鼠自由飲用5%葡聚糖硫酸鈉（DSS）溶液，連續(xù)14天。進行疾病活動指數(shù)(DAI)的評估、取結腸進行組織病理學檢查。2、檢測標準：DAI評分明顯升高，與對照組比較具統(tǒng)計學意義。結腸病理鏡檢可見結腸炎癥、病變深度、隱窩破壞、潰瘍病變.長寧區(qū)成瘤疾病動物模型建模開展小鼠疾病模型初步研究分析小鼠疾病模型研究初步結果與生物學信息資料等相關知識間的差距！

在一個具體實施方式中，壓迫元件采用黃銅和鋅的混合物制備而成。具體地，混合物為h62黃銅，即含銅量為％～％，余量為鋅含量的黃銅。而銅、鋅皆屬于非鐵磁性物質。在另一個具體實施方式中，壓迫元件采用聚乳酸(polylactic，pla)制備而成。pla是一種無毒無刺激的合成高分子材料，其原料是乳酸，不含任何金屬。h62黃銅棒或pla棒在體內，即不會受磁療、電療引起的磁場、電場干擾，也不會對磁療、電療儀器及磁共振儀器產生不良影響。得到大鼠慢性背根神經壓迫模型。

實驗期間每天進行陰道涂片，觀測動情周期變化。進一步地，檢測***水平是指：檢測雌***(e2)、促卵泡生長素(fsh)和促黃體生成素(lh)的水平。進一步地，檢測對比卵巢重量是指：比較各組大鼠雙側卵巢臟器系數(shù)。進一步地，陰道涂片是指：采用陰道脫落細胞涂片法，使用染色劑為亞甲基藍。本發(fā)明利用順鉑成功地建立了大鼠卵巢早衰模型，為基礎研究建立穩(wěn)定的卵巢早衰動物模型奠定了良好的基礎。本發(fā)明使用的各種術語和短語具有本領域技術人員公知的一般含義。提及的術語和短語如有與公知含義不一致的，以本發(fā)明所表述的含義為準。附圖說明圖1：e2水平檢測結果示意圖。圖2：fsh水平檢測結果示意圖。圖3：lh水平檢測結果示意圖。圖4：大鼠體重檢測結果示意圖。廣泛應用于藥效評價、轉化醫(yī)學等醫(yī)學前沿領域。

1、動物模型名稱：二甲基苯蒽(DMBA)致乳腺*大鼠模型2、實驗動物種屬：SD大鼠3、實驗動物性別：雌性4、實驗動物年齡：6~8周齡5、實驗動物體重：80~100g6、實驗動物環(huán)境：SPF級1、實驗方法：二甲基苯并蒽(DMBA)誘導。大鼠按100mg/kg體重于臀部皮下一次性注射10mg/mL的DMBA溶液1次。正常飼養(yǎng)致24周。2、檢測標準：模型組大鼠第5對乳房直徑在各測定時間點與正常對照組比較有***性差異；大鼠注射致*劑后乳腺上皮組織逐漸發(fā)生有規(guī)律的變化，乳腺導管上皮細胞首先發(fā)生上皮增生、不典型增生，并逐漸加重，在第9周時可見同一大鼠的多個乳腺出現(xiàn)不同程度的導管上皮增生和不典型增生。第13周開始發(fā)現(xiàn)>3mm的乳腺*，至第24周時70%的大鼠發(fā)生乳腺*，并可見一只大鼠同時發(fā)生多個乳腺*，而同一大鼠的其他乳腺亦呈現(xiàn)出不同程度的上皮細胞增生和不典型增生，提示處于*發(fā)生的不同進展階段。能夠準確模擬人相關特定功能與疾病特征。南京哪一家疾病動物模型建模

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該模型能夠幫助我們研究pirb基因在免疫系統(tǒng)和神經系統(tǒng)的功能以及下游的調節(jié)機制。本發(fā)明的另一目的在于提供上述小鼠動物模型的構建方法。本發(fā)明所采用的第一種技術方案是：pirb基因敲入的小鼠動物模型，包括確定pirb基因的待敲入的特異性靶位點grna1和grna2，將pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的內含子1內，所述grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如。本發(fā)明所采用的第二種技術方案為：pirb基因敲入的小鼠動物模型的構建方法，具體按照以下步驟實施：步驟1、基于crispr/cas9技術構建針對c57bl/6j小鼠rosa26基因的特異性grna1和grna2，grna1的基因序列如seqid**所示，grna2的基因序列如；步驟2、構建“cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya”基因盒打靶載體，將打靶載體進行線性化處理；步驟3、步驟2中將含有l(wèi)oxp位點打靶載體、步驟1中有活性的grna1和grna2與cas9蛋白共同注射進入**小鼠受精卵中，獲得f0代小鼠；步驟4、將步驟3中性成熟的陽性f0小鼠分別與野生型鼠交配繁一代，獲得f1代雜合子小鼠，通過pcr、測序和southern雜交確定動物基因型；步驟5、將步驟4獲得的f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子小鼠。浦東新區(qū)大鼠疾病動物模型建模

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