大鼠疾病動物模型建模優(yōu)勢

1、動物模型名稱：二甲基苯蒽(DMBA)致乳腺*大鼠模型2、實驗動物種屬：SD大鼠3、實驗動物性別：雌性4、實驗動物年齡：6~8周齡5、實驗動物體重：80~100g6、實驗動物環(huán)境：SPF級 1、實驗方法：二甲基苯并蒽(DMBA)誘導(dǎo)。大鼠按100mg/kg體重于臀部皮下一次性注射10mg/mL的DMBA溶液1次。正常飼養(yǎng)致24周。2、檢測標準：模型組大鼠第5對乳房直徑在各測定時間點與正常對照組比較有***性差異；大鼠注射致*劑后乳腺上皮組織逐漸發(fā)生有規(guī)律的變化，乳腺導(dǎo)管上皮細胞首先發(fā)生上皮增生、不典型增生，并逐漸加重，在第9周時可見同一大鼠的多個乳腺出現(xiàn)不同程度的導(dǎo)管上皮增生和不典型增生。第13周開始發(fā)現(xiàn)>3mm的乳腺*，至第24周時70%的大鼠發(fā)生乳腺*，并可見一只大鼠同時發(fā)生多個乳腺*，而同一大鼠的其他乳腺亦呈現(xiàn)出不同程度的上皮細胞增生和不典型增生，提示處于*發(fā)生的不同進展階段。上海東寰提供動物模型構(gòu)建過程中的原始實驗記錄及數(shù)據(jù)圖片。大鼠疾病動物模型建模優(yōu)勢

1、自發(fā)性**動物模型:未經(jīng)人為處理;自然發(fā)生;自發(fā)性**的總體評價--動物自發(fā)性**的病因往往是由動物的遺傳特性決定的與人癢的病因有較大距離。各動物**生長速度差異較大很難在限定時間內(nèi)獲得大量生長均勻的荷瘤動物(tumor-bearinganimals)。因此，自發(fā)性**動物模型很少在抗**藥物的常規(guī)篩選中廣泛應(yīng)用。2、誘發(fā)性**動物模型:在實驗條件下:使用致*物(carcinogens);誘發(fā)動物發(fā)生**animalmodelofinducedtumor)指使用致*因素(carcinogens)在實驗條件下誘發(fā)動物發(fā)生**的動物模型，它是進行實驗**學研究的常用方法。常用于驗證可疑致*因素的作用也越來越多地應(yīng)用干**發(fā)生機理的研究及防治效果的觀察上，在**病因?qū)W、遺傳學、生物學等方面的研究中有重要地位。由于誘發(fā)因素和條件可人為控制，誘發(fā)率遠高于自然發(fā)病率故在**實驗研究中優(yōu)于自發(fā)瘤。用于誘發(fā)實驗性**的動物種類很多，它們因種族不同而對相同致*因素有不同的反應(yīng)性。常用的動物以哺乳動物為主，其中嚙齒類動物的使用**多，應(yīng)用**廣，包括各種大鼠、小鼠、際鼠等。。提供疾病動物模型建模原理能夠準確模擬人相關(guān)特定功能與疾病特征。

    f1代小鼠southern印記的5’探針引物如下：primersfor5’probe:5’probeforwardprimer:5’-aaacgtggagtaggcaatacccagg-3’5’probereverseprimer:5’-aaagaagggtcacctcagtctccct-3’primersfor3’probe:3’probeforwardprimer:5’-ttctgggcaggcttaaaggctaac-3’3’probereverseprimer:5’-aggagcgggagaaatggatatgaag-3’southern印記的目標片段大小如下：5’probe-bamhi:3’probe-avrii:。步驟c、采用限制性內(nèi)切酶bamhi和avrii對dna進行切割；瓊脂糖凝膠電泳分離dna；步驟d、將dna轉(zhuǎn)到尼龍膜上；步驟e、探針變性后，與dna分子進行雜交，nbt/bcip化學顯色法顯色，拍照觀察。southern雜交結(jié)果如圖6所示，可以看到：6、8、9號pirb基因敲除小鼠如果被bamhi切割，在，wt小鼠只在，如果被avrii切割，pirb基因敲除小鼠在，wt小鼠只在。步驟6、將f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子pirb基因敲入小鼠，即為本發(fā)明所述小鼠pirb基因敲入的動物模型。將本發(fā)明獲得的動物模型f2代純合子小鼠與同品系小鼠組織/細胞特異性cre表達的小鼠雜交，獲得f3代小鼠，可以實現(xiàn)在不同組織或者細胞類型中敲入pirb基因。對f3代小鼠進行基因型的鑒定：含有無(pirb-cwt)、一個(pirb-chet)或者兩個。

    技術(shù)領(lǐng)域：本發(fā)明屬于遺傳學和生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及pirb基因敲入的小鼠動物模型，還涉及上述小鼠動物模型的構(gòu)建方法。背景技術(shù)：鼠源成對免疫球蛋白樣受體b(pairedimmunoglobulin-likereceptorb，pirb)，是人類免疫球蛋白樣受體b2(humanleukocyteimmunoglobulin(ig)-likereceptorb2，lilrb2)的同源基因，pirb基因(ncbireferencesequence：)位于小鼠的7號染色體近端，總大小為，編碼841個氨基酸，目前鑒定出15個外顯子，外顯子1起始密碼為atg，外顯子15的終止密碼子是tga(轉(zhuǎn)錄本：)。pirb蛋白屬于i型跨膜糖蛋白，包含由六個免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(domain，d)組成(d1-d6)的胞外段，一個疏水的跨膜段，三個免疫受體酪氨酸依賴的抑制序列(immunoreceptortyrosinebasedinhibitorymotifs，itims)和一個itims樣序列組成的胞內(nèi)段。理論上講，pirb的分子量約為92kd，但是western-blot分析中，pirb經(jīng)常位于105kd處，因為pirb是糖蛋白。以往研究發(fā)現(xiàn)，pirb在免疫系統(tǒng)和中樞調(diào)節(jié)中均發(fā)揮重要作用。在免疫系統(tǒng)中，pirb在許多造血細胞都有表達，包括b細胞、肥大細胞、巨噬細胞、粒細胞和樹突細胞，但是在胸腺細胞、成熟的t細胞和自然殺傷細胞不表達。上海東寰為您提供完善的小鼠動物疾病模型。

誘發(fā)性**模型的原理是利用外源性致*因素引起細胞遺傳特性異常而呈現(xiàn)出異常生長和高增殖活性，形成**。致*因素主要有化學性、物理性及生物性致*物，而化學性致*物(chemicalcarcinogens)**常見，已確知的多達一千余種，用于誘發(fā)實驗性**的種類亦很多，如苯并薩，申基膽菌、聯(lián)苯胺、亞硝胺類、黃曲霉***類。各種致癢物的致*強度、致*譜等特性相差較大，同一種致*物經(jīng)不同途徑給藥所致**部位或類型可有很大差異。有些化學性致*物具有明顯的親***或組織特性。因此，實驗工作中應(yīng)根據(jù)需要選用適當致*物和致*途徑，并確定其他影響因素或?qū)嶒灄l件?；驹?利用外源性致*物引起細胞遺傳特性改變，從而出現(xiàn)異常生長和高增殖活性細胞形成**。外源性致*物主要有化學性、物理性(如放射性物質(zhì))及生物性(如誘發(fā)動物**的病毒),其中以化學性致*物**為常用動物疾病模型的另一個富有成效的用途。視覺疾病動物模型建模公司

生物醫(yī)學研究的進展常常依賴于使用動物模型作為實驗假說和臨床假說二者的試驗基礎(chǔ)。大鼠疾病動物模型建模優(yōu)勢

    步驟3、pmsg處理c57bl/6雌性小鼠(6周齡，平均體重20g)，46h后注射hcg，與雄性小鼠合籠交配，次日取受精卵進行顯微注射，將步驟1的grna1、grna2、cas9蛋白以及線性化后的打靶載體一起注射到受精卵中，取注射后存活的受精卵移植到假孕母鼠體內(nèi)，產(chǎn)出小鼠，即f0代小鼠。上述步驟中g(shù)rna1、grna2的濃度均為2～10pmol/ul，cas9蛋白的注射濃度為30～100ng/μl，cas9蛋白購自newenglandbiolabs，貨號為m0386m。步驟4、提取f0代小鼠尾部dna，pcr擴增產(chǎn)物測序，鑒定是否為嵌合體。本發(fā)明用于f0代小鼠pirb基因pcr鑒定的特異性引物如下：pcrprimers1(℃):5’armforwardprimer(f1):5’-tacgccacagggagtccaagaatg-3’5’kireverseprimer(r1):5’-gatggggagagtgaagcagaacg-3’pcrprimers2(℃):3’kiforwardprimer(f2):5’-ctgctgtccattccttattccatag-3’3’armreverseprimer(r2):5’-ctggaaatcaggctgcaaatctc-3’。primers1對應(yīng)的擴增產(chǎn)物大小為，primers2對應(yīng)的擴增產(chǎn)物為。用于f0代小鼠測序的引物如下：sequencingprimerforpcrproduct1:5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer。大鼠疾病動物模型建模優(yōu)勢

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