速溶型PEI轉(zhuǎn)染試劑好用么

來源: 發(fā)布時間:2024-05-30

化學(xué)轉(zhuǎn)染方法是生物醫(yī)學(xué)研究中常用的轉(zhuǎn)染方法,主要包括兩類:陽離子脂質(zhì)體和陽離子聚合物。其基本原理是利用陽離子的化學(xué)分子與帶有負(fù)電荷的核酸通過正負(fù)電荷作用形成穩(wěn)定的復(fù)合物。一方面使復(fù)合體整體帶上正電荷(多數(shù)細(xì)胞膜表面帶有弱的負(fù)電荷,通過電荷作用吸引復(fù)合體到細(xì)胞膜表面);另一方面對線性的核酸進(jìn)行濃縮,使其體積變小更易穿透細(xì)胞膜。陽離子聚合物類轉(zhuǎn)染試劑可以說是貧窮實(shí)驗(yàn)室的福音了。早在2012年就有研究小組在大名鼎鼎的Nature Protocol上發(fā)表了PEI作為轉(zhuǎn)染試劑的詳細(xì)方法,到現(xiàn)在被越來越多的實(shí)驗(yàn)室采用。更多關(guān)于Polysciences PEI相關(guān)產(chǎn)品內(nèi)容歡迎咨詢上海曼博生物醫(yī)藥科技有限公司!也歡迎關(guān)注我們的公眾號:Mine-Bio用PEI轉(zhuǎn)染試劑為什么會出現(xiàn)沉淀?速溶型PEI轉(zhuǎn)染試劑好用么

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PEI在于可以應(yīng)用于體內(nèi)試驗(yàn)。當(dāng)初試驗(yàn)經(jīng)費(fèi)很有限,被逼無奈只能放棄脂質(zhì)體2000,選擇PEI,以至于相當(dāng)長的時間內(nèi),轉(zhuǎn)染試驗(yàn)都不順利。下面是幾點(diǎn)關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染的注意要點(diǎn):1.PEI的使用量可以參照脂質(zhì)體2000的說明書,所用質(zhì)粒盡量去內(nèi)2.轉(zhuǎn)染時,一定要把PEI+DMEM加入到質(zhì)粒+DMEM中,順序不可錯,輕微混勻,靜止20min3.轉(zhuǎn)染后4小時,一定要換液!換含有FBS的完全培養(yǎng)液!因?yàn)镻EI對細(xì)胞毒性太大4.如果后續(xù)試驗(yàn)涉及到穩(wěn)定篩選,建議把血清濃度適當(dāng)提高。PS:事實(shí)證明,PEI是可行的,已經(jīng)做出穩(wěn)定細(xì)胞系了。更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!也歡迎關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio ,私信回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請“即可申請PEI試用裝!

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)是生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室中常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導(dǎo)入到靶細(xì)胞內(nèi)。目前主要有三種主流方法:生物轉(zhuǎn)染,物理轉(zhuǎn)染和化學(xué)轉(zhuǎn)染。其中生物轉(zhuǎn)染主要是利用病毒等微生物作為基因?qū)胼d體,以慢病毒、腺病毒和腺相關(guān)病毒等常見,其侵染效率可以達(dá)到90%以上,但常因安全性等問題,很多實(shí)驗(yàn)室對其敬而遠(yuǎn)之。物理轉(zhuǎn)染主要包括顯微注射、電穿孔和基因,無論哪一種都需要特定的設(shè)備,且一分錢一分貨,性能好的價(jià)格也都相對較高。近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物!歡迎關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“申請PEI”,即可參加活動!更多關(guān)于Polysciences PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品信息,歡迎咨詢上海曼博生物!用PEI轉(zhuǎn)染試劑時出現(xiàn)沉淀什么原因?

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1.對于某些類型的細(xì)胞如HEK-293、HEK293T、NIH/3T3和COS細(xì)胞,在轉(zhuǎn)染前兩天鋪板可顯著提高轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)水平。如果選擇轉(zhuǎn)染前兩天鋪板,可適當(dāng)降低鋪板密度,以確保轉(zhuǎn)染時細(xì)胞的匯合度仍為70~80%。2.對于接觸抑制敏感的細(xì)胞,可適當(dāng)降低鋪板密度。3.即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復(fù)合物仍能轉(zhuǎn)染細(xì)胞,但是DNA-PEI復(fù)合物必須在無蛋白存在的條件下形成。我們推薦使用Opti-MEMITM培養(yǎng)基以達(dá)到*轉(zhuǎn)染效率。其他的無蛋白培養(yǎng)基則需測試與線性PEI轉(zhuǎn)染試劑的兼容性。4.對大多數(shù)細(xì)胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLEndoFectinTM試劑都能獲得較高轉(zhuǎn)染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1~4μL體積線性PEI轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行優(yōu)化。更多關(guān)于PEI轉(zhuǎn)染試劑相關(guān)產(chǎn)品問題,歡迎咨詢上海曼博生物!近期還有PEIfree申請活動,歡迎咨詢上海曼博生物!歡迎關(guān)注我們的公眾號Mine-bio,回復(fù)“PEI轉(zhuǎn)染試劑”即可領(lǐng)??!PEI轉(zhuǎn)染試劑會有毒性嗎?速溶型PEI轉(zhuǎn)染試劑好用么

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PEIMAX粉末配置方法:1)將1gPEIMAX40K放入盛有900mL水的玻璃燒杯中;2)放入攪拌轉(zhuǎn)子,放置于磁力攪拌器上,設(shè)置攪拌程序以形成一個較小的漩渦;3)等待PEIMAX40K完全溶解,通常需要5分鐘左右;4)用25mL塑料移液管加入1N氫氧化鈉滴定至pH6.9~7.1;5)如果不小心超過7.1,則使用1N的鹽酸和新的塑料移液管將pH重新滴定至6.9~7.1;6)將溶液轉(zhuǎn)移到1L玻璃量筒中,加入水定容至1L;7)用無菌真空過濾膜過濾配制的轉(zhuǎn)染試劑溶液;8)按需分裝,4°C儲存(切記不可冷凍);注:未經(jīng)配制的粉末有效期為2年。配置成液體后分裝在合適的瓶子中,并且保存在4℃的轉(zhuǎn)染試劑將可在6個月之內(nèi)保持性能。如jin用于蛋白定性研究,分裝的轉(zhuǎn)染試劑可延長有效使用期至1年。如想申請PEI試用裝,請關(guān)注我們的公眾號:Mine-bio,回復(fù)關(guān)鍵詞“PEI申請”,即可參加!速溶型PEI轉(zhuǎn)染試劑好用么