CHO細胞PEI轉染試劑價格

來源: 發(fā)布時間:2022-11-14

準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。

依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用2-5μL線性PEI轉染試劑。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如Falcon5mL/14mL離心管。轉染細胞:直接向每個孔中加入DNA-PEI復合物并輕輕渦旋培養(yǎng)板/培養(yǎng)皿。在無血清條件下轉染時,去除生長培養(yǎng)基,替換成無血清培養(yǎng)基,然后滴DNA-PEI復合物。轉染3h后,添加?體積的包含30%血清的生長培養(yǎng)基。 有誰了解PEI轉染試劑?CHO細胞PEI轉染試劑價格

CHO細胞PEI轉染試劑價格,PEI轉染試劑

細胞轉染實驗是生物醫(yī)學實驗室中常規(guī)的研究手段,目的是把外源基因、蛋白或者小分子導入到靶細胞內。目前主要有三種主流方法:生物轉染,物理轉染和化學轉染。其中生物轉染主要是利用病毒等微生物作為基因導入載體,以慢病毒、腺病毒和腺相關病毒等常見,其侵染效率可以達到90%以上,但常因安全性等問題,很多實驗室對其敬而遠之。物理轉染主要包括顯微注射、電穿孔和基因,無論哪一種都需要特定的設備,且一分錢一分貨,性能好的價格也都很性感。


線性PEI轉染試劑轉染步驟PEI轉染試劑有沒有毒性?

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對大多數(shù)細胞來而言,每1μgDNA使用3.0μLPEIMAX轉染試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每1μgDNA使用1.5~4μL體積線性PEIMAX轉染試劑進行優(yōu)化。.PEIMAX(MW40,000)為Polysciences公司生產的化合物產品,每批產品出廠前都經過嚴格的檢測,保證每批產品都100%合格、穩(wěn)定且品質高,但由于作為轉染試劑使用過程中有很多實驗室因素(配置方法,PH,水純度,稱量的準度,dnaRNA純度,細胞狀態(tài),細胞品系…)造成溶解出現(xiàn)問題或者轉染效率出現(xiàn)差異,所以廠家只受理該產品純度,分子量及重量缺失破損等相關投訴,針對極個別客戶溶解問題和轉染效率問題我們能友善解決。

方法:1.細胞分盤:通過胰酶消化收集細胞,用適當?shù)耐耆囵B(yǎng)基以4×105至8×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于60mm組織培養(yǎng)皿上(根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿,使細胞貼壁后所占總面積達到培養(yǎng)皿面積的70-90%)。根據(jù)細胞貼壁情況于含5%CO2的37℃溫箱中孵育8-24h,當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前換入2mL預熱的無血清培養(yǎng)基。2.制備PEI-DNA混合物:以60mm組織培養(yǎng)皿用420μL反應總體積為例。準備兩支1.5mL離心管,一管將質粒DNA(總量2-8μg為佳)加入240μLHBS中,混勻。另一管中則用HBS將100μM的PEI儲存液稀釋成10μM,充分混合。然后取180μL10μMPEI溶液加入含有DNA的HBS中,充分混勻后室溫靜置20-30min。將這420μL的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中,輕輕搖動平皿混勻,置于含5%~7%CO2的37℃溫箱孵育。注:每次用100μM的PEI儲存液前都需要先將其充分混勻,保證所取的濃度一致。3.培養(yǎng)6-10h后更換為37℃預熱的含有血清的培養(yǎng)基,繼續(xù)培養(yǎng),16h左右可以觀測到報告基因的表達。


PEI轉染試劑的穩(wěn)定性如何?

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穩(wěn)定轉染方法1.接種細胞:轉染前一晚,用膠原酶(WORTHINGTONG公司LS004196)消化細胞并計數(shù)(不建議用胰酶)。調整細胞濃度,將細胞鋪入細胞培養(yǎng)的器皿,每個孔置入的細胞量應能使轉染時細胞匯合度達到70~80%。2.準備DNA-PEI復合物:DNA、PEI試劑和稀釋劑在進行以下步驟前需先使其升至室溫。依據(jù)表1所示,用Opti-MEMITM(Invitrogen)或其他適合的無蛋白培養(yǎng)基稀釋適量DNA。用同樣的培養(yǎng)基稀釋PEI試劑。每1μgDNA需用1.5-5μL線性PEI轉染試劑(這個需要客戶自行摸索配比,每一批轉染試劑和每一批DNA比例可能會稍有不同)。一邊輕輕渦旋裝有DNA溶液的試管,一邊將稀釋的線性PEI轉染試劑滴加至試管中(注意:請勿顛倒添加順序)。充分混勻后,室溫靜置10~25min以形成DNA-PEI復合物。當溶液體積較大時,請用圓底聚丙烯管,例如NEST5mL/14mL離心管。更多關于Polysciences PEI相關內容歡迎咨詢上海曼博生物!PEI轉染試劑的工作原理是什么?即用型PEI轉染試劑配置方法

Polysciences的PEI轉染試劑品質如何?CHO細胞PEI轉染試劑價格

在政策促進下,未來3—5年內,我國將在醫(yī)藥健康短缺地區(qū)建設一批高水平臨床醫(yī)治中心、高層次的人才 培養(yǎng)基地和高水平的科研創(chuàng)新與轉化平臺,培育一批品牌優(yōu)勢明顯、跨區(qū)域提供高水平服務的集團。在《2019年本》鼓勵類條目中增加了“血小板裂解液,WB自動孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍牙無線標簽機的開發(fā)和生產”。在中藥產業(yè)領域,增加了“中藥飲片炮制技術傳承與創(chuàng)新,中藥經典名方的開發(fā)與生產,中藥創(chuàng)新的研發(fā)與生產”等內容。根據(jù)血小板裂解液,WB自動孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍牙無線標簽機相關領域極新技術發(fā)展趨勢,《2019年本》在鼓勵類條目中新增了新型技術開發(fā)和應用的有關內容。例如,在化學原料藥領域增加了“連續(xù)反應”等技術,在技術領域增加了“基因醫(yī)治”和“抗體偶聯(lián)”等技術,在藥用包裝材料領域增加了“中性硼硅藥用玻璃”等新型材料與技術的開發(fā)應用,在醫(yī)藥領域增加了“人工智能輔助醫(yī)藥設備”等新技術內容。新增內容體現(xiàn)了我國醫(yī)藥產業(yè)技術升級的方向,有助于引導企業(yè)緊跟國際前沿技術,加快開發(fā)具有國際競爭力的新產品,提高產業(yè)化水平。既是血小板裂解液,WB自動孵育系統(tǒng),微流控器官芯片,藍牙無線標簽機當前發(fā)展的重要方向,也是我國重視中醫(yī)藥傳承與創(chuàng)新發(fā)展的重要體現(xiàn)。CHO細胞PEI轉染試劑價格

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