動(dòng)物疾病PCR擴(kuò)增

經(jīng)過(guò)多年的科研，PCR技術(shù)應(yīng)用于動(dòng)物疫病的檢測(cè)和診斷中，具有特異性高和便于操作等特點(diǎn)，得到了寬泛的臨床應(yīng)用。該技術(shù)能夠在比較短的時(shí)間內(nèi)使基因進(jìn)行快速的擴(kuò)增，從而使微量的基因檢測(cè)在臨床中得到應(yīng)用實(shí)踐。在PCR技術(shù)實(shí)際應(yīng)用的過(guò)程中，其優(yōu)點(diǎn)主要包括以下幾方面。首先，操作性較強(qiáng)，技術(shù)能夠簡(jiǎn)單的應(yīng)用于實(shí)際的工作中。其次，高效的擴(kuò)增結(jié)果，能夠?qū)崿F(xiàn)成果的轉(zhuǎn)化。***，特異性較高，技術(shù)性較強(qiáng)?，F(xiàn)階段，該技術(shù)能夠在很短的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)快速擴(kuò)張的形勢(shì)使微量基因得到快速的檢測(cè)。巧亦捷全自動(dòng)核酸一體機(jī)無(wú)需專業(yè)檢測(cè)人員，儀器上樣簡(jiǎn)便，軟件操作易于掌握。動(dòng)物疾病PCR擴(kuò)增

巧亦捷（ingeNova）是翊新診斷技術(shù)（蘇州）有限公司旗下專注于動(dòng)物體外診斷檢測(cè)的產(chǎn)品品牌，以翊新診斷全資子公司——蘇州翊創(chuàng)生物科技有限公司為主體。巧亦捷系列產(chǎn)品覆蓋了貓呼吸道疫病檢測(cè)、貓消化道疫病檢測(cè)、犬消化道疫病檢測(cè)、寄生蟲(chóng)等寵物核酸檢測(cè)，非洲豬瘟、藍(lán)耳等豬病核酸檢測(cè)，牛逼支、牛腹瀉等牛羊類食品動(dòng)物的核酸檢測(cè)，人畜共患病核酸檢測(cè)，以及魚(yú)蝦等水生動(dòng)物的核酸檢測(cè)。全自動(dòng)薄膜微流控核酸檢測(cè)一體機(jī)是巧亦捷系列產(chǎn)品的主打檢測(cè)平臺(tái)，巧亦捷基于此平臺(tái)技術(shù)致力于為客戶提供快速、精確的動(dòng)物疫病診斷整體解決方案。翊新診斷技術(shù)（蘇州）有限公司由微流控技術(shù)領(lǐng)域國(guó)際**周朋博士創(chuàng)立。公司依托先進(jìn)的薄膜微流控技術(shù)開(kāi)發(fā)一體化、智能化的快速、便捷的POCT體外分子診斷解決方案。針對(duì)動(dòng)物疫病的早期診斷，公司以市場(chǎng)需求為出發(fā)點(diǎn)，開(kāi)發(fā)出了低成本、無(wú)污染、能夠?qū)崿F(xiàn)真正意義上“全自動(dòng)，全封閉，樣本進(jìn)，結(jié)果出”的薄膜微流控芯片技術(shù)和可以用于動(dòng)物疫病現(xiàn)場(chǎng)快速診斷的分子檢測(cè)系統(tǒng)，從而為動(dòng)物疫病的現(xiàn)場(chǎng)診斷提供更加便利的檢測(cè)手段。目前已開(kāi)發(fā)非洲豬瘟檢測(cè)、寵物呼吸道多聯(lián)檢測(cè)、寵物消化道多聯(lián)檢測(cè)等多種試劑及檢測(cè)方案。江蘇便攜式PCR分析儀巧亦捷采用的薄膜微流控技術(shù)與核酸檢測(cè)技術(shù)相結(jié)合，特別適用于基因表達(dá)和病原體檢測(cè)等領(lǐng)域。

巧亦捷核酸一體機(jī)采用的探針?lè)晒釶CR與常規(guī)PCR的不同之處在于：在上、下游引物外還加入了具有序列特異性的探針（探針本身具有熒光標(biāo)記），該探針根據(jù)需要擴(kuò)增的靶序列設(shè)計(jì)因此只能與待檢測(cè)序列結(jié)合，與染料法相比提高了實(shí)驗(yàn)的特異性。目前市場(chǎng)上的探針主要種類有：TaqMan、MolecularBeacon、Scorpions、Hybirdization等，其中以TaqMan探針應(yīng)用寬泛。TaqMan探針的結(jié)構(gòu)：長(zhǎng)度與普通PCR引物類似，大約20bp左右。在5’與3’端各標(biāo)記有一個(gè)熒光基團(tuán)，5’的熒光基團(tuán)稱為報(bào)告基團(tuán)（Report），3’的熒光基團(tuán)稱為淬滅基團(tuán)（Quencher）。TaqMan探針的性能：在探針結(jié)構(gòu)完整的情況下用特定的波長(zhǎng)激發(fā)報(bào)告基團(tuán)，由于報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)的空間位置很近，因此報(bào)告基團(tuán)能夠通過(guò)FRET（FluorescenceResonanceEnergyTransfer）將接受的能量轉(zhuǎn)移到淬滅基團(tuán)，使后者以發(fā)射熒光或熱量的方式釋放能量，而報(bào)告基團(tuán)并不發(fā)射特定波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。

現(xiàn)如今，大多數(shù)寵物醫(yī)院還是使用膠體金方法對(duì)寵物疾病病原體進(jìn)行檢測(cè)，而此種檢測(cè)方法準(zhǔn)確性低，靈敏度不高，通常出現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確而導(dǎo)致寵物誤診。如果是誤診，寵物則無(wú)法得到很好的診療，甚至?xí)劳?。巧亦捷在寵物病原體核酸檢測(cè)試劑系列中應(yīng)用了PCR-熒光探針?lè)?，在PCR反應(yīng)體系中加入特異的熒光探針，在實(shí)驗(yàn)條件下對(duì)寵物病原體特異性基因片段進(jìn)行擴(kuò)增，根據(jù)熒光強(qiáng)度的變化進(jìn)行檢測(cè)，并針對(duì)各種樣品進(jìn)行了反應(yīng)體系的優(yōu)化，靈敏度可達(dá)1000個(gè)拷貝，具防污染功能，特別適合在寵物醫(yī)院使用。本產(chǎn)品操作簡(jiǎn)便，簡(jiǎn)單培訓(xùn)即可掌握操作方法。巧亦捷全自動(dòng)核酸檢測(cè)一體已實(shí)現(xiàn)覆蓋貓、犬腸道類、呼吸道類、血液類、人畜共患類等多種病原體的診斷。

樣本處理、核酸提取、PCR擴(kuò)增和數(shù)據(jù)處理是PCR的四個(gè)步驟。其中核酸提取可以幫助研究人員準(zhǔn)確地快速地分離細(xì)胞或分子材料中的有效核酸，并獲得足夠的樣本為后續(xù)實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。無(wú)論是病毒、細(xì)菌還是體細(xì)胞，遺傳物質(zhì)都不是裸露在細(xì)胞外，都是在細(xì)胞內(nèi)。需要有一個(gè)核酸提取試劑將遺傳物質(zhì)釋放到外界，保證PCR反應(yīng)效率。將核酸釋放出來(lái)后，提取與純化過(guò)程中同樣需要將樣本中的一些PCR抑制物去除掉，獲得純度比較高的核酸，比較大限度的保證PCR反應(yīng)中抑制物的濃度降低，提高核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性。因此核酸提取與純化這一步，也是保證PCR反應(yīng)結(jié)果的關(guān)鍵一步。巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)采用磁珠法提取，效率高且可確保結(jié)果更準(zhǔn)確。傳染病是由某些具有致病性的微生物，如細(xì)菌、病毒等引起的，能夠在某種動(dòng)物或多種動(dòng)物之間傳播的一些疾病。動(dòng)物疾病PCR擴(kuò)增

巧亦捷核酸檢測(cè)解決方案包括全自動(dòng)便攜式核酸檢測(cè)一體機(jī)、免核酸提取檢測(cè)試劑盒。動(dòng)物疾病PCR擴(kuò)增

PCR的工作原理：在TaqDNA聚合酶（熱穩(wěn)定DNA聚合酶）的作用下，由一對(duì)特異性引物經(jīng)熱變性-退火-延伸反應(yīng)，三個(gè)不同溫度的循環(huán)處理使得DNA由少量擴(kuò)增到多量的一種體外DNA擴(kuò)增技術(shù)。在反應(yīng)體系內(nèi)，以一對(duì)人工合成的寡核苷酸作為擴(kuò)增引物，第一步，模板DNA變性，以構(gòu)成脫氧核糖核酸的四種脫氧核苷酸為底物，目的基因作為模板，在DNA聚合酶的作用下模板DNA經(jīng)過(guò)80-90℃高溫變性，使模板DNA雙鏈經(jīng)PCR擴(kuò)增形成的雙鏈解離成單鏈。第二步，模板DNA與引物退火（復(fù)性），模板DNA解離成單鏈后溫度降至50-60℃，引物與模板DNA單鏈互補(bǔ)配對(duì)。第三步，引物的延伸，DNA模板-引物結(jié)合物在DNA聚合酶作用下，70-75℃以dNTP為反應(yīng)原料半保留復(fù)制合成一條新的模板DNA鏈。這三個(gè)步驟為一個(gè)循環(huán)，2-4分鐘即可完成一個(gè)循環(huán)，2-3小時(shí)就能使極微量的DNA、片段、甚至單拷貝基因復(fù)制到幾百萬(wàn)倍，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)靶DNA的放大。由于擴(kuò)增堿基序列按照靶DNA復(fù)制，因此PCR反應(yīng)具有高度特異性。動(dòng)物疾病PCR擴(kuò)增