分子檢測(cè)PCR豬病診斷

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-10-23

PCR技術(shù)是從DNA水平對(duì)病原進(jìn)行檢測(cè),將病原DNA進(jìn)行大量的擴(kuò)增,在通過(guò)多種途徑對(duì)擴(kuò)增后的產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè),膠體金檢測(cè)方法雖然快速、便捷的,但是該種方法是從蛋白水平對(duì)病原進(jìn)行檢測(cè),故存在一定的交叉反應(yīng)和動(dòng)物自身抗體干擾,導(dǎo)致臨床應(yīng)用的過(guò)程中出現(xiàn)假陽(yáng)性和假陰性的結(jié)果,巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)采用的PCR技術(shù)從根本上避免了檢測(cè)呈現(xiàn)假陽(yáng)性或弱陽(yáng)性的結(jié)果,極大提高了檢測(cè)的靈敏性和特異性。此外,利用PCR引物的高度特異性,可以排除其他所有非致病原體的干擾,實(shí)現(xiàn)精確的診斷,與其他檢測(cè)方法相比具有不可比擬的優(yōu)勢(shì)。PCR技術(shù),全稱為“聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”(polymerase chain reaction,PCR)。分子檢測(cè)PCR豬病診斷

分子檢測(cè)PCR豬病診斷,PCR

PCR在傳染病診斷中有靈敏度高的優(yōu)勢(shì),可以做到早期診斷,實(shí)現(xiàn)及時(shí)診療,減少患病動(dòng)物痛苦,獲得更好的療效。預(yù)后評(píng)估,監(jiān)控診療效果。且適用范圍廣不同傳染病的檢測(cè)效果相同。不存在諸如免疫學(xué)方法中出現(xiàn)的貓類檢測(cè)試紙卡效果不佳的情況。PCR是目前大多數(shù)犬貓傳染病的診斷方法。也是寵物醫(yī)院必備的儀器之一,但市面上大多數(shù)都是PCR擴(kuò)增儀,即需要人工進(jìn)行核酸提取和純化。而巧亦捷核酸一體機(jī)則囊括了核酸提取和PCR擴(kuò)增部分,儀器自動(dòng)操作,極大減少了寵物醫(yī)院的儀器預(yù)算,真正做到全自動(dòng)一體化檢測(cè)。核酸PCR儀器在準(zhǔn)確的前提下,高效顯得尤為重要。

分子檢測(cè)PCR豬病診斷,PCR

每個(gè)生物體(包括病原微生物)都含有自己的基因,通過(guò)對(duì)某種生物的基因信息進(jìn)行分析可以用來(lái)識(shí)別和區(qū)分不同的物種,甚至可以用來(lái)區(qū)分不同的個(gè)體(比如我們?cè)诜缸锎笃锝?jīng)常見(jiàn)到的通過(guò)DNA分析來(lái)抓兇手,再比如親子鑒定)。傳染病診斷也類似于刑偵,就是在患者的樣本中查找引起癥狀的元兇——病原微生物。那么同樣可以通過(guò)分析樣本中是否含有某種病原微生物的基因來(lái)實(shí)現(xiàn)診斷。PCR就是通過(guò)樣本中的基因信息進(jìn)行分析,某一種病原體的診斷試劑只會(huì)去捕捉該病原體的基因,并對(duì)其進(jìn)行大量擴(kuò)增。如果擴(kuò)增可以發(fā)生,則結(jié)果呈陽(yáng)性,也就是有這種病原微生物存在。

巧亦捷核酸一體機(jī)采用的探針?lè)晒釶CR與常規(guī)PCR的不同之處在于:在上、下游引物外還加入了具有序列特異性的探針(探針本身具有熒光標(biāo)記),該探針根據(jù)需要擴(kuò)增的靶序列設(shè)計(jì)因此只能與待檢測(cè)序列結(jié)合,與染料法相比提高了實(shí)驗(yàn)的特異性。目前市場(chǎng)上的探針主要種類有:TaqMan、MolecularBeacon、Scorpions、Hybirdization等,其中以TaqMan探針應(yīng)用寬泛。TaqMan探針的結(jié)構(gòu):長(zhǎng)度與普通PCR引物類似,大約20bp左右。在5’與3’端各標(biāo)記有一個(gè)熒光基團(tuán),5’的熒光基團(tuán)稱為報(bào)告基團(tuán)(Report),3’的熒光基團(tuán)稱為淬滅基團(tuán)(Quencher)。TaqMan探針的性能:在探針結(jié)構(gòu)完整的情況下用特定的波長(zhǎng)激發(fā)報(bào)告基團(tuán),由于報(bào)告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)的空間位置很近,因此報(bào)告基團(tuán)能夠通過(guò)FRET(FluorescenceResonanceEnergyTransfer)將接受的能量轉(zhuǎn)移到淬滅基團(tuán),使后者以發(fā)射熒光或熱量的方式釋放能量,而報(bào)告基團(tuán)并不發(fā)射特定波長(zhǎng)的熒光信號(hào)。準(zhǔn)確、高效是巧亦捷核酸檢測(cè)一體機(jī)從產(chǎn)品設(shè)計(jì)上就天生自帶的屬性,因此一經(jīng)推出就體現(xiàn)出強(qiáng)大的后發(fā)優(yōu)勢(shì)。

分子檢測(cè)PCR豬病診斷,PCR

使用平常的抗原試紙做動(dòng)物診斷常會(huì)出現(xiàn)誤診的情況,如用抗原試紙條對(duì)剛買的小狗帶到做檢測(cè),犬瘟試紙條檢測(cè)是陰性,但回家養(yǎng)幾天后小狗開(kāi)始出現(xiàn)打噴嚏、咳嗽等癥狀,此時(shí)再去做檢查,犬瘟檢測(cè)則變成陽(yáng)性,這種情況在寵物臨床上并不少見(jiàn)。很有可能這只小狗在第、一次檢查的時(shí)候已經(jīng)傳染并且向外排毒了,但是由于抗原滴度低排毒量比較小,試紙條檢測(cè)不出來(lái),錯(cuò)失了及早診療的機(jī)會(huì)。另一方面,抗體檢測(cè)試紙并不能及時(shí)準(zhǔn)確知道機(jī)體是否傳染這個(gè)病原,就比如現(xiàn)在常見(jiàn)的貓咪弓形蟲(chóng)檢測(cè),只有貓咪接觸病原一段時(shí)間后,才能產(chǎn)生足量的抗體,抗體試紙才出現(xiàn)陽(yáng)性結(jié)果。當(dāng)這些情況發(fā)生,結(jié)果都是令人很難過(guò)的。因?yàn)檫@不僅*意味著后期要花更多的Money用于診療,還會(huì)出現(xiàn)診療困難,毛孩子們受罪,甚至?xí)霈F(xiàn)我們都不愿意接受的死亡。所以我們更建議使用PCR技術(shù)進(jìn)行臨床診斷。傳統(tǒng)的免疫學(xué)檢測(cè)(如:熒光和膠體金)存在靈敏性和特異性的局限性。結(jié)核PCR分析儀

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