細(xì)胞培養(yǎng)方法：1、細(xì)胞傳代：細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次；②加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿，蓋好放入培養(yǎng)箱消化；③1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；若細(xì)胞還是貼壁，放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止；④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清；⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中，T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基；⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集，細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。 上海中喬新舟 原代肝細(xì)胞服務(wù)質(zhì)量。歡迎來(lái)電咨詢上海中喬新舟！四川哥廷根小型豬原代肝細(xì)胞種類
細(xì)胞傳代常用的儀器和試劑傳代細(xì)胞時(shí)，使用無(wú)菌技術(shù)和合適的試劑及設(shè)備尤為重要。針對(duì)您的細(xì)胞系選擇合適的培養(yǎng)液來(lái)得到比較好的生長(zhǎng)和擴(kuò)增很關(guān)鍵。每一個(gè)細(xì)胞系都有特定的生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)組分配方，但是大多數(shù)細(xì)胞系起碼需要的添加物有以下這些：血清，如胎牛血清，需熱處理滅活其胎牛成分，它為細(xì)胞生長(zhǎng)提供重要的生長(zhǎng)因子。，如青霉素和鏈霉素用于防止細(xì)胞污染。其他的生長(zhǎng)因子，如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，有助于延長(zhǎng)細(xì)胞系的生長(zhǎng)和擴(kuò)增。不使用時(shí)，要將這些添加物或者“完全”細(xì)胞培養(yǎng)液保存于4攝氏度。首先要注意細(xì)胞培養(yǎng)液的顏色，富含營(yíng)養(yǎng)的新鮮培養(yǎng)液由于添加了pH指示劑酚紅故為透明橙色。當(dāng)細(xì)胞耗盡培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)成分時(shí)，開(kāi)始在培養(yǎng)物中積累廢物和酸性物質(zhì)，降低pH值。因此，許多細(xì)胞培養(yǎng)液含有酚紅，當(dāng)培養(yǎng)物呈酸性時(shí)會(huì)將培養(yǎng)液顏色由橙色變?yōu)辄S色。培養(yǎng)液需在變黃之前更換。當(dāng)酚紅變?yōu)榉奂t色時(shí)，說(shuō)明培養(yǎng)基pH偏堿，不利于細(xì)胞健康生長(zhǎng)。這時(shí)可能需要改變二氧化碳濃度并更換培養(yǎng)液。 四川哥廷根小型豬原代肝細(xì)胞種類原代肝細(xì)胞廠家直供優(yōu)勢(shì)。歡迎來(lái)電咨詢上海中喬新舟！
傳代培養(yǎng)：1.倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定細(xì)胞是否需要傳代。2.培養(yǎng)液瓶打開(kāi)后，過(guò)酒精燈火焰，置酒精燈火焰周圍。3.拿出直頭滴管，套上橡皮吸頭，過(guò)火，放入培養(yǎng)液瓶中。4.打開(kāi)培養(yǎng)瓶，瓶口過(guò)火，將培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)液輕輕倒入廢液缸，用2-3mLPBS洗去殘留的舊培養(yǎng)基。5.培養(yǎng)瓶加入，用量以薄薄蓋滿一層為宜，37℃消化，倒置顯微鏡下觀察到細(xì)胞收回突起變圓時(shí)立即翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使細(xì)胞脫離胰酶，然后將胰酶倒掉，加入少量的含血清的新鮮培養(yǎng)基。6.取彎頭滴管反復(fù)吹打細(xì)胞使其脫壁并分散，再根據(jù)分傳瓶數(shù)補(bǔ)加一定量的含血清的新鮮培養(yǎng)基，制成細(xì)胞懸液，然后分裝到新培養(yǎng)瓶中。蓋上瓶蓋，適度擰緊后再稍回轉(zhuǎn)，以利于CO2氣體的進(jìn)入，將培養(yǎng)瓶放回CO2培養(yǎng)箱。7.對(duì)半貼壁培養(yǎng)細(xì)胞，不需胰酶，直接吹打，加入新鮮培養(yǎng)基，然后分裝到各瓶中。
隨著各型肝炎、肝硬化、肝等慢性肝病的發(fā)病率日益升高，體外培養(yǎng)的肝細(xì)胞也被普遍地用千肝病基礎(chǔ)研究中。盡管細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)不斷改進(jìn)和成熟，國(guó)內(nèi)外也先后建立了多株人肝細(xì)胞系，但體外分離和培養(yǎng)人正常肝細(xì)胞仍是非常有價(jià)值的研究材料。一材料與設(shè)備1.設(shè)備與器材超凈工作臺(tái)、離心機(jī)、CO2培養(yǎng)箱、－70℃冰箱、－20℃冰箱。2.無(wú)菌材料大培養(yǎng)皿、青霉素小瓶、50ml離心管、刻度吸管、彎頭吸管、T25培養(yǎng)瓶、手術(shù)剪、刀、鏤、細(xì)胞篩（100目）、消毒用乙醇棉球、流產(chǎn)胚胎、高糖DMEM培養(yǎng)液、胎牛血清、青／鏈霉素、D-Hanks溶液、0.25％胰蛋白酶/0.03%EDTA消化液。原代肝細(xì)胞哪個(gè)性價(jià)比高？上海中喬新舟告訴您。
目前，NAFLD動(dòng)物模型和細(xì)胞模型仍然是研究NAFLD發(fā)病機(jī)制及藥物防治的重要手段。動(dòng)物模型雖然能很好地模擬體內(nèi)環(huán)境，但是存在造模周期長(zhǎng)、個(gè)體差異大、實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以控制等問(wèn)題，而細(xì)胞模型個(gè)體差異小、影響因素較少、實(shí)驗(yàn)條件可控性強(qiáng)[8-11]。鑒于細(xì)胞模型能較好地克服動(dòng)物模型的不利因素，因此，建立NAFLD體外細(xì)胞模型對(duì)于研究其發(fā)病機(jī)制，為進(jìn)一步防治NAFLD具有重要的理論意義與普遍的實(shí)用價(jià)值。肝脂肪變性細(xì)胞模型是公認(rèn)的研究NAFLD有效的細(xì)胞模型，目前多采用肝細(xì)胞株HepG2，通過(guò)給予不同比例與濃度的游離脂肪酸(freefattyacids,FFA)混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)，誘導(dǎo)造模[12-13]，但因HepG2細(xì)胞株來(lái)源于腫瘤細(xì)胞，與正常生理?xiàng)l件下的肝細(xì)胞仍存在著差異[14]。因此采用健康C57BL/6J小鼠的原代肝細(xì)胞建立脂肪變性細(xì)胞模型，旨在建立一種更接近于臨床的肝細(xì)胞脂肪變性模型，為NAFLD的研究奠定基礎(chǔ)。 原代肝細(xì)胞的應(yīng)用范圍十分廣闊。歡迎來(lái)電咨詢上海中喬新舟！四川哥廷根小型豬原代肝細(xì)胞種類
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在原代肝細(xì)胞分離培養(yǎng)過(guò)程中有以下幾個(gè)關(guān)鍵操作要點(diǎn)：(1)灌流的溫度。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前需預(yù)熱PBS緩沖液(含EDTA)及IV型膠原酶，使其溫度保持在37℃，灌流開(kāi)始時(shí)從水浴鍋中取出。(2)灌流的方向。由于小鼠門(mén)靜脈較細(xì)，插管操作較困難，因此采用逆向灌流法，即在較粗的下腔靜脈插管，剪斷門(mén)靜脈，使灌流液與血液呈逆向灌流，提高了灌流的成功率及細(xì)胞獲取率[17]。(3)灌流的速度。灌流過(guò)程應(yīng)保持勻速、低速，灌流全程時(shí)間比較好控制在15min以內(nèi)。先灌流無(wú)鈣無(wú)鎂的PBS緩沖液(含EDTA)，灌流速度應(yīng)保持在7～8mL/min。再灌流IV型膠原酶進(jìn)行原位消化，灌注膠原酶時(shí)，采用間斷法，即用鑷子夾閉門(mén)靜脈，快速灌注酶至肝臟略膨起后，停頓30s，待液體排出肝臟回縮后，再次進(jìn)行推注，反復(fù)多次，灌注時(shí)間約為5min。(4)膠原酶的濃度。IV型膠原酶濃度為，采用間斷法灌流進(jìn)行原位消化時(shí)，每只小鼠肝臟只需10mL的IV型膠原酶，既提高了灌流效率又可避免膠原酶的浪費(fèi)。(5)鼠尾膠原蛋白I型的濃度。對(duì)于原代肝細(xì)胞體外難以培養(yǎng)的問(wèn)題，不同實(shí)驗(yàn)室建立了多種培養(yǎng)方法來(lái)維持其生物學(xué)活性，大多采用雙層膠原夾層培養(yǎng)法(膠原三明治培養(yǎng)法)[15]，本實(shí)驗(yàn)采用單層膠原培養(yǎng)法，六孔板中預(yù)鋪鼠尾膠原蛋白I型的濃度為。 四川哥廷根小型豬原代肝細(xì)胞種類
上海中喬新舟生物科技有限公司公司是一家專門(mén)從事原代細(xì)胞及細(xì)胞株，細(xì)胞培養(yǎng)基，細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)服務(wù)，實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備產(chǎn)品的生產(chǎn)和銷售，是一家生產(chǎn)型企業(yè)，公司成立于2011-11-07，位于高逸路112-118號(hào)3幢A3077室。多年來(lái)為國(guó)內(nèi)各行業(yè)用戶提供各種產(chǎn)品支持。美國(guó)sciencell目前推出了原代細(xì)胞及細(xì)胞株，細(xì)胞培養(yǎng)基，細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)服務(wù)，實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備等多款產(chǎn)品，已經(jīng)和行業(yè)內(nèi)多家企業(yè)建立合作伙伴關(guān)系，目前產(chǎn)品已經(jīng)應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域。我們堅(jiān)持技術(shù)創(chuàng)新，把握市場(chǎng)關(guān)鍵需求，以重心技術(shù)能力，助力醫(yī)藥健康發(fā)展。上海中喬新舟生物科技有限公司每年將部分收入投入到原代細(xì)胞及細(xì)胞株，細(xì)胞培養(yǎng)基，細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)服務(wù)，實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備產(chǎn)品開(kāi)發(fā)工作中，也為公司的技術(shù)創(chuàng)新和人材培養(yǎng)起到了很好的推動(dòng)作用。公司在長(zhǎng)期的生產(chǎn)運(yùn)營(yíng)中形成了一套完善的科技激勵(lì)政策，以激勵(lì)在技術(shù)研發(fā)、產(chǎn)品改進(jìn)等。上海中喬新舟生物科技有限公司注重以人為本、團(tuán)隊(duì)合作的企業(yè)文化，通過(guò)保證原代細(xì)胞及細(xì)胞株，細(xì)胞培養(yǎng)基，細(xì)胞生物學(xué)技術(shù)服務(wù)，實(shí)驗(yàn)室儀器設(shè)備產(chǎn)品質(zhì)量合格，以誠(chéng)信經(jīng)營(yíng)、用戶至上、價(jià)格合理來(lái)服務(wù)客戶。建立一切以客戶需求為前提的工作目標(biāo)，真誠(chéng)歡迎新老客戶前來(lái)洽談業(yè)務(wù)。