常見的肝細(xì)胞系有HepG2，Hepa1-6等，HepG2是來源于一個(gè)15歲白人的肝組織；Hepa1-6來源于小鼠肝，兩者都屬于永生細(xì)胞系，當(dāng)然也有永生細(xì)胞系具有的通性缺點(diǎn)，如與正常肝臟細(xì)胞相比遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，生物學(xué)特性會(huì)隨著細(xì)胞分裂次數(shù)的增加而發(fā)生遷移等。原代細(xì)胞是指從機(jī)體獲取組織細(xì)胞后的培養(yǎng)。由于離體時(shí)間短，因此其能夠保持在體內(nèi)的生物學(xué)特性，與細(xì)胞系相比，是更接近體內(nèi)環(huán)境的研究模型。肝臟是作為機(jī)體“”的代謝，其組成是極其復(fù)雜的，除了肝細(xì)胞，還包含眾多內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞等組分，各類細(xì)胞功能各異并相互交流，共同決定肝臟的代謝表型。因此，當(dāng)我們要研究某一表型究竟是由于肝細(xì)胞自身的變化引起的，還是由其他細(xì)胞類型所介導(dǎo)的時(shí)，使用小鼠肝臟組織是無法說清問題的，使用原代肝細(xì)胞能夠避免其他細(xì)胞的影響，從而得到更加準(zhǔn)確地結(jié)論。原代細(xì)胞相對(duì)于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，更加可控，可給予的實(shí)驗(yàn)干預(yù)也更多。 上海中喬新舟 原代肝細(xì)胞值得推薦。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！云南膠質(zhì)原代肝細(xì)胞
注意事項(xiàng)1.取材要求新鮮，無菌，解剖小鼠時(shí)，注意不要損傷脾臟及其周圍的臟器，尤其是腸道等，防止污染脾臟。2.沖洗脾臟時(shí)要盡量洗凈血污，去除無用組織，并要防止組織干燥。3.碾磨后及時(shí)用清水沖洗篩網(wǎng)，防止組織、細(xì)胞阻塞網(wǎng)孔。4.計(jì)數(shù)前，注意吸盡平皿里的細(xì)胞，充分混勻，使細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞。5.實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在操作臺(tái)無菌區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，勿在邊緣非無菌區(qū)域操作。6.金屬器械不能在火焰中燒的時(shí)間過長，燒過的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織，以免造成組織損傷。7.另外膠塞過火焰時(shí)也不能時(shí)間長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞。8.吸取過營養(yǎng)液后的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管頭中營養(yǎng)液能燒焦形成炭膜，再用時(shí)會(huì)把有害物帶入營養(yǎng)液中。 云南膠質(zhì)原代肝細(xì)胞原代肝細(xì)胞的市場(chǎng)應(yīng)用分析。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！
在原代肝細(xì)胞分離培養(yǎng)過程中有以下幾個(gè)關(guān)鍵操作要點(diǎn)：(1)灌流的溫度。實(shí)驗(yàn)開始前需預(yù)熱PBS緩沖液(含EDTA)及IV型膠原酶，使其溫度保持在37℃，灌流開始時(shí)從水浴鍋中取出。(2)灌流的方向。由于小鼠門靜脈較細(xì)，插管操作較困難，因此采用逆向灌流法，即在較粗的下腔靜脈插管，剪斷門靜脈，使灌流液與血液呈逆向灌流，提高了灌流的成功率及細(xì)胞獲取率[17]。(3)灌流的速度。灌流過程應(yīng)保持勻速、低速，灌流全程時(shí)間比較好控制在15min以內(nèi)。先灌流無鈣無鎂的PBS緩沖液(含EDTA)，灌流速度應(yīng)保持在7～8mL/min。再灌流IV型膠原酶進(jìn)行原位消化，灌注膠原酶時(shí)，采用間斷法，即用鑷子夾閉門靜脈，快速灌注酶至肝臟略膨起后，停頓30s，待液體排出肝臟回縮后，再次進(jìn)行推注，反復(fù)多次，灌注時(shí)間約為5min。(4)膠原酶的濃度。IV型膠原酶濃度為，采用間斷法灌流進(jìn)行原位消化時(shí)，每只小鼠肝臟只需10mL的IV型膠原酶，既提高了灌流效率又可避免膠原酶的浪費(fèi)。(5)鼠尾膠原蛋白I型的濃度。對(duì)于原代肝細(xì)胞體外難以培養(yǎng)的問題，不同實(shí)驗(yàn)室建立了多種培養(yǎng)方法來維持其生物學(xué)活性，大多采用雙層膠原夾層培養(yǎng)法(膠原三明治培養(yǎng)法)[15]，本實(shí)驗(yàn)采用單層膠原培養(yǎng)法，六孔板中預(yù)鋪鼠尾膠原蛋白I型的濃度為。
Autotaxin(ATX)是一種分泌型溶血磷脂酶D，可催化溶血磷脂酰膽堿(LPC)水解為溶血磷脂酸(LPA)，這是一種多效性生長因子樣磷脂。LPA通過其G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs;LPAR1-6)在幾乎所有細(xì)胞類型中具有多種作用，表現(xiàn)出重疊的特異性和普遍分布。目前，在各種慢性炎癥性疾病和不同類型的病癥中已檢測(cè)到上調(diào)的ATX表達(dá)。ATX被證明在肺纖維化的發(fā)展中起決定性作用；然而，對(duì)其在其他纖維增生性疾病中的作用和作用方式知之甚少。擴(kuò)展和補(bǔ)充先前的研究，我們已經(jīng)顯示不同病因的CLD中血清ATX水平升高，這與CLD和HCC患者的存活率降低以及肝臟ATXmRNA表達(dá)增加相關(guān)。因此，在實(shí)驗(yàn)性中毒性肝炎和HCC的動(dòng)物模型中顯示肝細(xì)胞ATX和肝LPA水平升高。體內(nèi)遺傳和藥理學(xué)干預(yù)以及離體研究表明，ATX會(huì)擾亂脂質(zhì)穩(wěn)態(tài)并促進(jìn)纖維化和病癥的發(fā)展。 上海中喬新舟的 原代肝細(xì)胞教學(xué)質(zhì)量可靠嗎？歡迎來電咨詢上海中喬新舟！
細(xì)胞培養(yǎng)是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究常用的手段之一，可分為原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)兩種。原代培養(yǎng)是直接從生物體獲取組織或的一部分進(jìn)行培養(yǎng)，也稱初代培養(yǎng)。嚴(yán)格地說即從體內(nèi)取出組織接種培養(yǎng)到次傳代階段，但實(shí)際上，通常把代至第十代以內(nèi)的培養(yǎng)細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。一般持續(xù)1-4周。此期細(xì)胞呈活躍的移動(dòng)，可見細(xì)胞分裂，但不旺盛。原代培養(yǎng)細(xì)胞與體內(nèi)原組織在形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上相似性大。由于培養(yǎng)的細(xì)胞剛剛從組織分離出來，故更接近于生物體內(nèi)的生活狀態(tài)。這一方法可為研究生物體細(xì)胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段。同時(shí)也為以后傳代培養(yǎng)創(chuàng)造條件。原代培養(yǎng)的過程指動(dòng)物的組織或從機(jī)體取出后，經(jīng)機(jī)械法或各種酶類（常用胰蛋白酶）和鰲合劑（常用EDTA）處理，使之分散成單個(gè)細(xì)胞，加入適量培養(yǎng)基，置于合適的培養(yǎng)容器中，在無菌、適當(dāng)溫度和一定條件下，使之生存、生長和繁殖的過程。 原代肝細(xì)胞服務(wù)哪家好？上海中喬新舟告訴您。歡迎來電咨詢上海中喬新舟！江西臍帶原代肝細(xì)胞培養(yǎng)步驟
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高活力原代小鼠肝細(xì)胞的分離與純化，目的建立一種穩(wěn)定的能獲得高活力和高純度原代小鼠肝細(xì)胞的分離和純化方法.方法對(duì)傳統(tǒng)的兩步原位膠原酶灌注法進(jìn)行4個(gè)方面的優(yōu)化,主要包括選擇逆向灌流,將持續(xù)灌注法改為間斷灌注后夾閉門靜脈法,嚴(yán)格控制膠原酶消化時(shí)間和將分離的肝細(xì)胞懸液進(jìn)行低速Percoll單密度離心純化.分離后的肝細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng).肝細(xì)胞活力和得率用臺(tái)盼藍(lán)染色法檢測(cè).結(jié)果新鮮分離的小鼠原代肝細(xì)胞活力能穩(wěn)定達(dá)到87%±3%,平均活細(xì)胞總數(shù)為8×10^5每克小鼠體重,絕大部分細(xì)胞在體外培養(yǎng)2h后貼壁生長.結(jié)論優(yōu)化后的肝細(xì)胞分離方法更為穩(wěn)定,有效,分離到的肝細(xì)胞具有高活力的優(yōu)點(diǎn). 云南膠質(zhì)原代肝細(xì)胞
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1、原代細(xì)胞：ScienCell（中國區(qū)正規(guī)一級(jí)代理）人源和動(dòng)物源各種原代細(xì)胞。
2、培養(yǎng)基：原代細(xì)胞**低血清、無血清、無異源蛋白無動(dòng)物成分培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞培養(yǎng)試劑：胎牛血清、原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞生長因子、ELISA試劑盒、定量PCR芯片試劑盒、DNA/RNA及細(xì)胞裂解物等。
4、細(xì)胞系（株）：種類豐富（1000余種），已通過STR鑒定；提供細(xì)胞株完全培養(yǎng)基。
5、自研產(chǎn)品：支原體檢測(cè)/qing除試劑盒、端粒酶檢測(cè)試劑盒、人源/動(dòng)物源ELISA試劑盒等系列產(chǎn)品。
6、技術(shù)服務(wù)：綠/紅色熒光蛋白標(biāo)記、熒光素酶標(biāo)記、慢bing毒介導(dǎo)基因沉默或過表達(dá)及穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建，細(xì)菌基因敲除、細(xì)胞基因敲除、小鼠基因敲除、血管生成功能學(xué)實(shí)驗(yàn)。