細(xì)菌保存培養(yǎng)基(半固體)

培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動(dòng)物（或組織）生長(zhǎng)繁殖的，由不同營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)組合配制而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。一般都含有碳水化合物、含氮物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽（包括微量元素）、維生素和水等幾大類物質(zhì)。培養(yǎng)基既是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促使細(xì)胞增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，也是細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖的生存環(huán)境。培養(yǎng)基種類很多，根據(jù)配制原料的來(lái)源可分為自然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基；根據(jù)物理狀態(tài)可分為固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基；根據(jù)培養(yǎng)功能可分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、加富培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基等；根據(jù)使用范圍可分為細(xì)菌培養(yǎng)基、放線菌培養(yǎng)基、酵母菌培養(yǎng)基等。培養(yǎng)基配成后一般需測(cè)試并調(diào)節(jié)pH，還須進(jìn)行滅菌，通常有高溫滅菌和過(guò)濾滅菌。培養(yǎng)基由于富含營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，易被污染或變質(zhì)。配好后不宜久置，現(xiàn)配現(xiàn)用。無(wú)血清培養(yǎng)基是在常規(guī)培養(yǎng)基中添加多種蛋白質(zhì)、生長(zhǎng)因子等等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)來(lái)代替動(dòng)物血清。細(xì)菌保存培養(yǎng)基(半固體)

培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度合適時(shí)微生物才能生長(zhǎng)良好，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度過(guò)低時(shí)不能滿足微生物正常生長(zhǎng)所需，濃度過(guò)高時(shí)則可能對(duì)微生物生長(zhǎng)起抑制作用，例如高濃度糖類物質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽、重金屬離子等不僅不能維持和促進(jìn)微生物的生長(zhǎng)，反而起到抑菌或殺菌作用。另外，培養(yǎng)基中各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)之間的濃度配比也直接影響微生物的生長(zhǎng)繁殖和（或）代謝產(chǎn)物的形成和積累，其中碳氮比（C/N）的影響較大。嚴(yán)格地講，碳氮比指培養(yǎng)基中碳元素與氮元素的物質(zhì)的量比值，有時(shí)也指培養(yǎng)基中還原糖與粗蛋白之比。例如，在利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)谷氨酸的過(guò)程中，培養(yǎng)基碳氮比為4/1時(shí)，菌體大量繁殖，谷氨酸積累少；當(dāng)培養(yǎng)基碳氮比為3/1時(shí)，菌體繁殖受到抑制，谷氨酸產(chǎn)量則大量增加。 YPD肉湯有些細(xì)胞需要在低溫下培養(yǎng)，這時(shí)需要特殊的培養(yǎng)基。

選擇性培養(yǎng)基是指根據(jù)某種微生物的特殊營(yíng)養(yǎng)要求或其對(duì)某化學(xué)、物理因素的抗性而設(shè)計(jì)的培養(yǎng)基。其功能是使混合菌樣中的劣勢(shì)菌變成優(yōu)勢(shì)菌，從而提高該菌的篩選效率。酵母菌富集培養(yǎng)基：葡萄糖5%，尿素0.1%，硫化銨0.1%，磷酸二氫鉀0.25%，磷酸氫二鈉0.05%，七水合硫酸鎂0.1%，七水合硫酸鐵0.01%，酵母膏0.05%，孟加拉紅0.003%，pH4.5。富集好氧自生固氮菌：甘露醇1%，磷酸二氫鉀0.02%，七水合硫酸鎂0.02%，氯化鈉0.02%，二水合硫酸鈣0.01%，碳酸鈣0.5%

鑒別培養(yǎng)基(differential media) 在培養(yǎng)基中加入某一反應(yīng)底物和指示劑，以區(qū)別某些微生物的特性從而鑒別之。又分一般鑒別培養(yǎng)基和選擇性鑒別培養(yǎng)基。只用于區(qū)別不同微生物種類的培養(yǎng)基稱為-般鑒別培養(yǎng)基，此類培養(yǎng)基中一般不加抑菌劑而只含指示劑，如克氏雙糖鐵培養(yǎng)基，含有葡萄糖及乳糖，以酚紅作為指示劑，觀察培養(yǎng)基底層與斜面的顏色變化判定細(xì)菌對(duì)葡萄糖和乳糖的發(fā)酵能力，加人檸檬酸鐵銨，培養(yǎng)后觀察是否產(chǎn)生黑色沉著以判定細(xì)菌是否分解蛋白胨中的含硫氨基酸而產(chǎn)生硫化氫；又如伊紅-美藍(lán)瓊脂，含有乳糖(反應(yīng)底物)、伊紅-美藍(lán)(指示劑)用以鑒別大腸埃希菌、腸道病原菌和其他雜菌。一般鑒別培養(yǎng)基的特點(diǎn)是在配方中都含有指示劑，并可用于區(qū)別不同種類的微生物，有些鑒別培養(yǎng)基也可同時(shí)作為細(xì)菌的特殊需要用來(lái)分離培養(yǎng)某些細(xì)菌，如胰酪胨大豆瓊脂和巧克力色血瓊脂。孟德?tīng)?韋伯利法可以計(jì)算培養(yǎng)基的可利用能量。

選擇性培養(yǎng)基(selective media) 選擇性培養(yǎng)基含有營(yíng)養(yǎng)物(增菌劑)和抑菌劑(選擇劑)，標(biāo)本接種于此類培養(yǎng)基后，由于抑菌劑的選擇性抑制作用，使非目的菌受到不同程度的抑制，更有利于目的菌的增殖或分離。利用選擇性培養(yǎng)基經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的增菌培養(yǎng)，再接種于選擇性鑒別培養(yǎng)基，可以提高目的菌的陽(yáng)性檢出率。抑菌劑的種類很多，常用的有孔雀綠、燦爛綠、亞硒酸鈉、去氧膽酸鈉、膽鹽、四硫磺酸鈉等。抑菌劑的加入量要適宜、準(zhǔn)確，有的劇毒，有的不耐高熱，配制時(shí)須特別注意。生長(zhǎng)細(xì)胞需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)包括碳源、氮源、微量元素和維生素等。頂層培養(yǎng)基(Ames試驗(yàn))

培養(yǎng)基應(yīng)適合不同類型細(xì)菌的生長(zhǎng)，包括需氧菌和厭氧菌。細(xì)菌保存培養(yǎng)基(半固體)

還有一些鑒別性培養(yǎng)基，是利用細(xì)菌特有的各種酶系統(tǒng)，能分解利用各種特定的糖、醇、氨基酸或其他基質(zhì)而產(chǎn)酸、產(chǎn)氣、產(chǎn)堿或產(chǎn)生其他可見(jiàn)物質(zhì)，依此進(jìn)行細(xì)菌的鑒別，例如常用的生化培養(yǎng)基。用于細(xì)菌生化特性試驗(yàn)的培養(yǎng)基特點(diǎn)是在無(wú)糖的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加人某種特定的基質(zhì)，并加人指示劑，細(xì)菌在此類培養(yǎng)基中的一系列生化反應(yīng)結(jié)果，均通過(guò)指示劑顯示出來(lái)。此類培養(yǎng)基為生化反應(yīng)鑒別培養(yǎng)基。根據(jù)用量又可分為常量生化培養(yǎng)基和微量生化培養(yǎng)基。值得注意的是生化試驗(yàn)培養(yǎng)基的某些成分受高溫、pH等諸多因素的影響，在配制和使用時(shí)，應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況嚴(yán)格掌握，防止有效成分被破壞，以保障其使用效果。細(xì)菌保存培養(yǎng)基(半固體)

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