開(kāi)封正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)

鼠尾膠原蛋白提取、分離、純化方法的建立及鑒定：通過(guò)對(duì)鼠尾進(jìn)行剝離獲得鼠尾腱,用Tris-HCl緩沖液、胃蛋白酶處理獲得鼠尾膠原蛋白原液、反復(fù)使用氯化鈉溶液進(jìn)行分級(jí)鹽析、醋酸溶液復(fù)溶進(jìn)行鼠尾膠原蛋白的純化.超純水透析除去無(wú)機(jī)鹽類(lèi)獲得純化的鼠尾膠原蛋白。通過(guò)SDS-PAGE蛋白質(zhì)電泳、氨基酸含量分析等技術(shù)手段鑒定.結(jié)果 本研究建立的方法可以獲得高純度的鼠尾膠原蛋白,純度達(dá)到電泳純.與國(guó)外進(jìn)口的商業(yè)化鼠尾膠原蛋白產(chǎn)品相比無(wú)差異。研究了提取、分離、純化參數(shù)對(duì)得率、純度的影響,建立了較優(yōu)的鼠尾膠原蛋白提取條件，胃蛋白酶用量:1∶500,酶解時(shí)間:72 h,鹽析濃度:2 mol/L,提取所用酸溶液:0.05 mol/L醋酸溶液.結(jié)論 為鼠尾膠原蛋白的擴(kuò)大化生產(chǎn)提供了合適的工藝參數(shù),為大量獲得鼠尾膠原蛋白并進(jìn)行更深層次的功效方面研究提供了理論支持和實(shí)踐基礎(chǔ)。I型膠原蛋白分布非常普遍，是主纖維束的主要成分。開(kāi)封正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)

膠原的立體結(jié)構(gòu)與一般的球狀蛋白質(zhì)完全不同，每一條亞基形成一股左手旋轉(zhuǎn)的螺旋，其中每 3個(gè)氨基酸殘基形成一圈螺旋。3 條左手螺旋再扭在一起形成一個(gè)右手大螺旋。這樣的螺旋稱(chēng)為 3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內(nèi)部。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃，這些棒狀分子首尾相連，并側(cè)向排列形成膠原微絲（其直徑可從50埃至數(shù)千埃）。膠原分子在兩端及沿軸向每隔 680埃的距離存在極性區(qū)，這些極性區(qū)能和重金屬離子結(jié)合，使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結(jié)構(gòu)。上海鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨可以在無(wú)菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過(guò)夜消毒。在接種細(xì)胞前用無(wú)菌的水漂洗。

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：將培養(yǎng)器皿在室溫(25 度左右)下 放置 20 分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是 10PBS， 使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。 B．含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制 200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH 加到膠原溶液中，會(huì)由于 NaOH 不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即 混勻。再加入 23ul 10PBS 10培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH 左右，如果 PBS 或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要用 pH 試紙測(cè)試)。加入 760ul 的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放 20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 注意事項(xiàng)：在室溫下pH 中性時(shí)可迅速成膠，在操作過(guò)程中要 盡量保持低溫。

鼠尾膠原簡(jiǎn)介：鼠尾I型膠原蛋白（Collagenfromrattail,TypeI）系采用Birkedal-Hansen方法在無(wú)菌下制備，純度達(dá)到95%以上，可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被，特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)；也可用于制備三維膠原凝膠，使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長(zhǎng)。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：1、SDS-PAGE分析純度大于95%。2、無(wú)菌檢驗(yàn)結(jié)果為陰性。3、本品2μg/cm2包被細(xì)胞培養(yǎng)皿后培養(yǎng)PC-12細(xì)胞，貼壁及生長(zhǎng)正常。4、本品濃度1mg/mL，pH7.0時(shí)形成具有一定強(qiáng)度的三維膠原凝膠，NIH-3T3細(xì)胞在三維凝膠內(nèi)生長(zhǎng)正常、PC-12細(xì)胞在三維凝膠表面生長(zhǎng)正常。在操作過(guò)程中要盡量保持低溫。保存條件4℃保存，切勿凍存，有效期一年。

鼠尾膠原使用方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例，用無(wú)菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中，確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開(kāi)蓋在超凈臺(tái)上過(guò)夜晾干，也可以在室溫放置1小時(shí)后，用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個(gè)月以上的時(shí)間。三維膠原凝膠的制備：A、無(wú)細(xì)胞三維膠原凝膠的制備（以配制1mg/mL三維膠1mL為例）將200μL本品加到置于冰浴的離心管中，加入690μL雙蒸水，然后加到12μL0.1mol/LNaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中（混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要測(cè)定pH值）。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。一種生物醫(yī)用鼠尾膠原蛋白的提取方法，采用酸法與酶法相結(jié)合的工藝。上海鼠尾膠原廠家現(xiàn)貨

加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。開(kāi)封正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說(shuō)明：不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12ul 0.1mol/L NaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100ul 10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。開(kāi)封正規(guī)鼠尾膠原進(jìn)貨價(jià)