珠海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家便宜

細胞轉(zhuǎn)染之PEI轉(zhuǎn)染法：1.細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當(dāng)?shù)耐耆囵B(yǎng)基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于35mm培養(yǎng)皿上（根據(jù)實驗需要選擇培養(yǎng)皿，使細胞貼壁后所占面積達到培養(yǎng)皿總面積的70－90％）。將細胞置于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h，當(dāng)細胞貼壁完全后即可開始轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染前2h換液（用1.5ml無血清培養(yǎng)基置換舊的培養(yǎng)基）。注：PEI轉(zhuǎn)染法對細胞生長有克制作用，在換液前細胞幾乎不生長，所以需要密度比較大時做轉(zhuǎn)染。2.制備PEI-DNA混合物以35mm組織培養(yǎng)皿用240μl反應(yīng)總體積為例。先在無菌EP管中加入120μl1×HBS,再加入質(zhì)粒DNA（總量1-3μg為佳），混勻后加入等體積PEI工作液，充分混勻后室溫靜置20-30min，較后將這240μl的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養(yǎng)基中，輕輕搖動平皿混勻后置于含5％CO2的37℃溫箱孵育。是目前實驗室較方便的轉(zhuǎn)染方法之一，其轉(zhuǎn)染率較高，優(yōu)于磷酸鈣法。珠海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家便宜

細胞轉(zhuǎn)染：(1)轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備A.將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。B.震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩，。(2)選擇合適的混合比例(1：1-1：2/脂質(zhì)體體積：DNA質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。(3)將混合液在室溫放置10—15分鐘。(4)吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基，用PBS或者無血清培養(yǎng)基清洗一次。(5)加入混合液，將細胞放回培養(yǎng)箱中培養(yǎng)一個小時。(6)到時后，根據(jù)細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)24-48小時。貴陽正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑報價轉(zhuǎn)染試劑與細胞不匹配細胞轉(zhuǎn)染較適合的不是原代細胞。

如何有效提高細胞轉(zhuǎn)染實驗效率：1.選擇高效的轉(zhuǎn)染方法不同轉(zhuǎn)染試劑有不同的轉(zhuǎn)染方法，但大多大同小異。轉(zhuǎn)染時應(yīng)跟據(jù)具體轉(zhuǎn)染試劑推薦的方法，但也要注意，因不同實驗室培養(yǎng)的細胞性質(zhì)不同，質(zhì)粒定量差異，操作手法上的差異等，其轉(zhuǎn)染效果可能不同，應(yīng)根據(jù)實驗室的具體條件來確定較佳轉(zhuǎn)染條件。2.確保所構(gòu)建載體的質(zhì)量。轉(zhuǎn)染載體的構(gòu)建（細菌載體，質(zhì)粒DNA，RNA，PCR產(chǎn)物，寡核苷酸等）也影響轉(zhuǎn)染結(jié)果。細菌載體對特定宿主細胞傳染效率較高，但不同細菌載體有其特定的宿主，有的還要求特定的細胞周期，如逆轉(zhuǎn)錄細菌需侵染分裂期的宿主細胞，此外還需考慮一些安全問題（如基因污染）。除載體構(gòu)建外，載體的形態(tài)及大小對轉(zhuǎn)染效率也有不同的影響，如前面提到的超螺旋及線性DNA對瞬時和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的影響。如果基因產(chǎn)物對細胞有毒性作用，轉(zhuǎn)染也很難進行，因此選擇組成或可調(diào)控，強度合適的啟動子也很重要，同時做空載體及其它基因的相同載體構(gòu)建的轉(zhuǎn)染正對照可排除毒性影響的干擾。

細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：血清A、DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物形成時不能含血清，因為血清會影響復(fù)合物的形成。B、一般細胞對無血清培養(yǎng)可以耐受幾個小時沒問題，轉(zhuǎn)染用的培養(yǎng)液可以含血清也可以不加，但血清一度曾被認為會降低轉(zhuǎn)染效率，轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清需要對條件進行優(yōu)化。C、對于對血清缺乏比較敏感的細胞，可以使用營養(yǎng)豐富的無血清培養(yǎng)基，或者在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中使用血清。對血清缺乏比較敏感的貼壁細胞，建議使用**轉(zhuǎn)染試劑。有條件的話，可以用無血清培養(yǎng)基代替PBS洗細胞兩遍，注意洗的時候要輕，靠邊緣緩緩加入液體，然后不要吹吸細胞而是轉(zhuǎn)動培養(yǎng)板讓液體滾動在細胞表面。如果洗的太厲害，細胞又損失一部分，加了脂質(zhì)體后，細胞受影響就更大了，死亡細胞會增多當(dāng)復(fù)合物接近細胞膜時，通過內(nèi)吞作用形成內(nèi)體進入細胞。

細胞轉(zhuǎn)染的注意事項：物品(PS)物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。所以，在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中不能使用物品，甚至在準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣，在轉(zhuǎn)染前也不必潤洗細胞。對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，不要在選擇性培養(yǎng)基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外，為了保證無血清培養(yǎng)基中細胞的健康生長，使用比含血清培養(yǎng)基更少的物品量~通過實驗優(yōu)化合適的轉(zhuǎn)染條件對于轉(zhuǎn)染效率的提高很重要。武漢正規(guī)細胞高效轉(zhuǎn)染試劑

震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。珠海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家便宜

細胞轉(zhuǎn)染方法：1.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法陽離子脂質(zhì)體表面帶正電荷，能與核酸的磷酸根通過靜電作用，將DNA分子包裹入內(nèi)，形成DNA脂復(fù)合物，也能被表面帶負電的細胞膜吸附，再通過融合或細胞內(nèi)吞進入細胞。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染適用于把DNA轉(zhuǎn)染入懸浮或貼壁培養(yǎng)細胞中，是目前實驗室較方便的轉(zhuǎn)染方法之一，其轉(zhuǎn)染率較高，優(yōu)于磷酸鈣法。由于脂質(zhì)體對細胞有一定的毒性，所以轉(zhuǎn)染時間一般不超過24小時。常用細胞類型：cos-7、BHK、NIH3T3、Hela等2.電穿孔轉(zhuǎn)染法電流能夠可逆地擊穿細胞膜形成瞬時的水通路或膜上小孔促使DNA分子進入胞內(nèi)，這種方法就是電穿孔。當(dāng)遇到某些脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率很低或幾乎無法轉(zhuǎn)入時建議用電穿孔法轉(zhuǎn)染。一般情況下，高電場強度會殺死50%-70%的細胞。現(xiàn)在針對細胞死亡開發(fā)出了一種電轉(zhuǎn)保護劑，可以較大的降低細胞的死亡率，同時提高電穿孔轉(zhuǎn)染效率珠海細胞高效轉(zhuǎn)染試劑哪家便宜