溫州Protein AG免疫沉淀外包公司

來源： 發(fā)布時間：2024-07-25

免疫沉淀技術（Immunoprecipitation, IP）是一種用于研究蛋白質相互作用、蛋白質復合物組成以及特定蛋白質的表達和純化的實驗技術。
基本原理
免疫沉淀技術基于抗體與特定蛋白質（抗原）之間的特異性相互作用。通過使用針對目標蛋白質的特異性抗體，可以從含有多種蛋白質的復雜樣本中捕獲并富集目標蛋白質。
免疫沉淀技術有多種類型，包括：
1. 個別免疫沉淀法（Individual IP）
2. 免疫共沉淀法（Co-IP）
3. 染色質免疫沉淀法（ChIP）
4. RNA免疫沉淀法（RIP）
近年來，免疫沉淀技術在固相支持物的選擇上有了很大進步。磁性微珠因其操作簡便、快速和自動化程度高而逐漸取代了傳統(tǒng)的瓊脂糖樹脂。
免疫沉淀技術Co-IP的原理是什么？溫州Protein AG免疫沉淀外包公司

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ChIP（染色質免疫沉淀）實驗是一種用于研究蛋白質與DNA相互作用的技術。以下是ChIP實驗的實驗設計概述：
1. 目標蛋白的選擇：確定您想要研究的目標蛋白，例如特定的轉錄因子或組蛋白修飾。
2. 樣本的準備：根據(jù)研究的需要選擇合適的細胞或組織樣本。
3. 抗體的選擇：選擇具有高特異性和親和力的抗體，這對于實驗的成功至關重要。
4. 交聯(lián)：使用甲醛等交聯(lián)劑將蛋白質與DNA在體內(nèi)共價結合，形成穩(wěn)定的蛋白質-DNA復合物。
5. 細胞裂解：裂解細胞以釋放染色質，同時保持蛋白質-DNA復合物的完整性。
6. 染色質的剪切：通過超聲或酶消化將染色質剪切成適當大小的片段，通常在200-1000 bp之間。
7. 免疫沉淀：使用特定抗體與目標蛋白結合，然后利用蛋白A/G磁珠沉淀復合物。
8. 洗滌和洗脫：洗滌沉淀物以去除未特異性結合的蛋白質和DNA，然后洗脫目標蛋白-DNA復合物。
9. 逆轉交聯(lián)：使用蛋白酶K處理樣品以逆轉交聯(lián)，釋放DNA。
10. DNA的純化和分析：純化DNA并使用qPCR、芯片或測序技術（如ChIP-seq）進行分析。
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Co-IP的實驗步驟：
1. 細胞裂解：首先，細胞或組織被裂解，釋放其中的蛋白質。
2. 抗體結合：然后，將特異性抗體（針對已知蛋白質之一的抗體）加入到裂解物中。這些抗體會特異性地結合到目標蛋白（誘餌蛋白）上。
3. 免疫復合物形成：抗體與目標蛋白結合后，形成免疫復合物。
4. 沉淀：接著，使用蛋白A或蛋白G結合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）來捕獲免疫復合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結合，從而拉下抗體以及與之結合的目標蛋白和任何相關的相互作用蛋白。
5. 洗滌：捕獲的免疫復合物被洗滌以去除未特異性結合的蛋白質。
6. 洗脫和分析：免疫復合物被洗脫并進行進一步的分析，如Western blot（WB）或質譜分析，以鑒定相互作用的蛋白質。

免疫沉淀技術（Immunoprecipitation, IP）是一種利用抗體與特定蛋白質結合的特性，從復雜樣本中分離和純化目標蛋白質的實驗方法。這項技術在生物醫(yī)學研究中有著廣泛的應用場景，以下是一些主要的應用領域：
1. 蛋白質相互作用分析：通過免疫沉淀技術，研究人員可以研究蛋白質之間的相互作用，揭示蛋白質復合物的組成以及它們在細胞內(nèi)的功能和調控機制。
2. 抗體藥物開發(fā)：免疫沉淀技術可以用于研究抗體藥物與其靶標蛋白的結合特性，評估抗體藥物的親和力和特異性，指導抗體藥物的設計和優(yōu)化。
3. 蛋白質表達水平分析：通過比較不同條件下的免疫沉淀結果，可以評估目標蛋白的相對量，進而研究蛋白質的表達調控。
4. 染色質免疫沉淀（ChIP）：這是一種特殊的免疫沉淀技術，用于研究蛋白質與DNA的相互作用，如轉錄因子或組蛋白修飾與基因組特定區(qū)域的結合情況。
5. RNA免疫沉淀（RIP）：類似于ChIP，RIP用于研究RNA結合蛋白與RNA分子之間的相互作用。
免疫沉淀技術RIP是什么？

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免疫沉淀實驗步驟：
1. 樣品制備
a. 懸浮細胞樣品處理：離心收集細胞（4℃, 1000g, 5 min），用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液（裂解液應在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑Cocktail，使蛋白酶抑制劑Cocktail的終濃度為1×）?；靹蚝笾糜诒咸幚?0 min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。
b. 貼壁細胞樣品處理：移去培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞兩遍；用細胞刮棒刮脫細胞，收集至1.5mL EP管內(nèi)，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液（裂解液應在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑Cocktail，使蛋白酶抑制劑Cocktail的終濃度為1×）。吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸。混勻后置于冰上處理10 min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。
4. 后續(xù)：磁珠預處理——抗體吸附——抗原結合反應——抗體洗脫
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免疫沉淀技術的優(yōu)缺點？溫州Protein AG免疫沉淀外包公司

免疫沉淀技術RIP（RNA Immunoprecipitation，RNA免疫沉淀）的實驗方法基于以下幾個關鍵步驟：
1. 細胞裂解：首先，細胞或組織樣本被裂解，以釋放細胞內(nèi)的蛋白質和RNA復合物。
2.抗體特異性結合：裂解后的樣本中加入針對特定RNA結合蛋白的抗體。這些抗體能夠特異性地識別并結合到目標蛋白。
3. 免疫復合物形成：抗體與目標蛋白結合后，形成抗體-蛋白質-RNA復合物。
4. 親和介質捕獲：使用蛋白A或蛋白G結合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）來捕獲這些抗體-蛋白質-RNA復合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結合，從而拉下與之結合的復合物。
5. 洗滌：捕獲的復合物被洗滌以去除未特異性結合的蛋白質和RNA。
6. RNA分離和分析：從珠子上洗脫或消化復合物，分離出RNA，并進行進一步的分析，如qPCR、Northern blot或高通量測序（RNA-Seq）。
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