廣州anti Flag免疫沉淀磁珠貨期

來源： 發(fā)布時間：2024-07-12

Co-IP的實驗步驟：
1. 細胞裂解：首先，細胞或組織被裂解，釋放其中的蛋白質。
2. 抗體結合：然后，將特異性抗體（針對已知蛋白質之一的抗體）加入到裂解物中。這些抗體會特異性地結合到目標蛋白（誘餌蛋白）上。
3. 免疫復合物形成：抗體與目標蛋白結合后，形成免疫復合物。
4. 沉淀：接著，使用蛋白A或蛋白G結合的珠子（如瓊脂糖或磁性珠子）來捕獲免疫復合物。蛋白A或蛋白G能夠與抗體的Fc部分結合，從而拉下抗體以及與之結合的目標蛋白和任何相關的相互作用蛋白。
5. 洗滌：捕獲的免疫復合物被洗滌以去除未特異性結合的蛋白質。
6. 洗脫和分析：免疫復合物被洗脫并進行進一步的分析，如Western blot（WB）或質譜分析，以鑒定相互作用的蛋白質。
免疫沉淀抗體的選擇？廣州anti Flag免疫沉淀磁珠貨期

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Co-IP（免疫共沉淀）技術主要用于研究蛋白質之間的相互作用，其應用場景如下：
1. 蛋白質相互作用網(wǎng)絡的鑒定：Co-IP可用于構建蛋白質相互作用網(wǎng)絡，發(fā)現(xiàn)目標蛋白的結合伙伴。
2. 信號傳導途徑的研究：通過Co-IP技術，科學家們發(fā)現(xiàn)了許多關鍵的細胞信號通路，如MAPK和PI3K/Akt通路等，為深入理解這些通路的功能和調控機制提供了重要線索。
3. 藥物靶點篩選：利用Co-IP技術，研究人員可以篩選潛在的藥物靶點。
疾病機制研究：通過分析疾病相關蛋白質的相互作用，Co-IP有助于揭示疾病的分子機制。
4. 抗體藥物開發(fā)：Co-IP可用于研究抗體藥物與其靶標蛋白的結合特性，評估抗體藥物的親和力和特異性。
5. 轉錄因子研究：Co-IP技術可以用于研究轉錄因子與蛋白質的相互作用，進而揭示基因調控網(wǎng)絡。
廣州anti Flag免疫沉淀磁珠貨期免疫沉淀技術ChIP的原理是什么？

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Co-IP（免疫共沉淀）技術主要用于研究蛋白質之間的相互作用，其實驗設計如下：
1. 樣品準備：Co-IP實驗通常有兩種，一種是內源性蛋白相互作用驗證，一種是非內源性蛋白相互作用驗證。內源性相互作用通過質粒共轉染的方式將兩種蛋白轉染至同一細胞內表達；非內源性相互作用則是將含有靶蛋白的組織進行預處理及細胞裂解獲得細胞裂解液。
2. 沉淀誘餌蛋白：利用磁珠偶聯(lián)抗體沉淀誘餌蛋白。在樣品中加入磁珠偶聯(lián)抗體，抗體會與誘餌蛋白結合，利用磁鐵將磁珠拉下，同時誘餌蛋白會一起被沉淀出來。
3. SDS-PAGE及WB檢測：得到沉淀后，需要驗證沉淀中是否存在相互作用蛋白。先利用SDS-PAGE將蛋白復合物分離，隨后利用WB檢測是否存在靶蛋白。
4. 實驗對照設置：為了避免“假陽性”，需要設置正確的對照，包括陰性對照和陽性對照（Input組）。Input組為直接利用抗體對細胞裂解液進行WB檢測，驗證細胞裂解液中存在蛋白。
5. 結果真實性：確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白。使用單克隆抗體有助于避免污染的發(fā)生。

免疫沉淀Co-IP實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結構  (直徑 50-150 μm)  可以結合抗體  (繼而結合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設備。瓊脂糖珠呈多孔結構，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質相互接觸，具有更高的結合載量。
與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結合表面積滿足高容量的抗體結合。
簡而言之，瓊脂糖珠的結合能力較強，而磁珠在得率，可重復性以及自動化方面有明顯的優(yōu)勢。
免疫沉淀技術IP實驗步驟。

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    免疫沉淀（immunoprecipitation）是指利用抗體可與抗原特異性結合的特性，將抗原（常為靶蛋白）從混合體系沉淀下來，初步分離靶蛋白的一種方法。免疫共沉淀（coimmunoprecipitation）是一種在體外探測兩個蛋白分子間是否存在特異性相互作用的一種方法。其原理非常簡單，如果兩個蛋白在體外體系能夠發(fā)生特異性相互作用的話，那么當用一種蛋白的抗體進行免疫沉淀時，另一個蛋白也會被同時沉淀下來。與酵母雙雜交技術不同，免疫共沉淀技術所利用的是抗原和抗體間的免疫反應，是一種基于體外非細胞的環(huán)境中研究蛋白質與蛋白質的相互作用的方法。 免疫沉淀技術ChIP實驗步驟。杭州蛋白免疫沉淀技術服務

免疫沉淀ChIP抗體的選擇？廣州anti Flag免疫沉淀磁珠貨期

免疫沉淀IP實驗中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實驗情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結構  (直徑 50-150 μm)  可以結合抗體  (繼而結合靶蛋白) ，它能夠直接高效、快速結合抗體，而不需借助特殊的專業(yè)設備。瓊脂糖珠呈多孔結構，這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質相互接觸，具有更高的結合載量。
與瓊脂糖珠不同，磁珠是固體，抗體的結合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ，盡管磁珠沒有多孔中心增加結合能力，但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多，使磁珠擁有足夠的抗體結合表面積滿足高容量的抗體結合。
簡而言之，瓊脂糖珠的結合能力較強，而磁珠在得率，可重復性以及自動化方面有明顯的優(yōu)勢。
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