杭州細(xì)胞支原體檢測(cè)方法LAMP法

來(lái)源： 發(fā)布時(shí)間：2024-06-20

支原體的預(yù)防可通過(guò)以下方式：
1. 控制污染源：通過(guò)定期檢測(cè)和去除細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體污染，確保細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)無(wú)支原體存在，從而獲得準(zhǔn)確有效的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
2. 改善無(wú)菌操作技術(shù)：通過(guò)提高實(shí)驗(yàn)人員的操作技術(shù)和意識(shí)，避免在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中引入支原體污染。
3. 使用無(wú)菌設(shè)備和耗材：使用無(wú)菌的細(xì)胞培養(yǎng)設(shè)備和耗材，如無(wú)菌培養(yǎng)基、血清等，減少支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。
4. 定期消毒和清潔：對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行定期的消毒和清潔，包括工作臺(tái)、培養(yǎng)箱等，以減少支原體的潛在污染。
5. 使用預(yù)防性試劑：使用專(zhuān)門(mén)針對(duì)支原體的預(yù)防性試劑，如加入細(xì)胞培養(yǎng)基中的預(yù)防劑、超凈臺(tái)噴霧、水浴鍋預(yù)防和細(xì)胞培養(yǎng)箱水盤(pán)預(yù)防等，以預(yù)防支原體污染。
6. 提高實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)支原體污染的認(rèn)識(shí)：通過(guò)科普教育和培訓(xùn)，提高實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)支原體污染的認(rèn)識(shí)和預(yù)防意識(shí)。
7. 建立嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程：制定并執(zhí)行嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)程，包括樣本處理、廢物處理、設(shè)備維護(hù)等，以降低支原體污染的風(fēng)險(xiǎn)。
支原體污染的來(lái)源有哪些？杭州細(xì)胞支原體檢測(cè)方法LAMP法

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支原體去除的實(shí)驗(yàn)步驟通常包括以下幾個(gè)階段：

1. 支原體檢測(cè)：在進(jìn)行去除之前，首先要確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)物是否受到支原體污染。這可以通過(guò)多種方法實(shí)現(xiàn)，如PCR法、LAMP法或支原體培養(yǎng)法。
2. 選擇合適的去除試劑：一旦確認(rèn)存在支原體污染，需要選擇一種有效的去除試劑。
3. 去除試劑的添加：根據(jù)去除試劑的說(shuō)明書(shū)，將試劑添加到受污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中。通常，這涉及到將一定比例的去除試劑加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中。
4. 孵育：添加去除試劑后，將細(xì)胞培養(yǎng)物放回培養(yǎng)箱中孵育。孵育時(shí)間和條件（如溫度、CO2濃度）應(yīng)根據(jù)試劑的推薦進(jìn)行調(diào)整。
5. 監(jiān)測(cè)去除效果：在孵育過(guò)程中，定期監(jiān)測(cè)細(xì)胞的狀態(tài)和去除效果。這可能包括觀察細(xì)胞形態(tài)、生長(zhǎng)速率的變化，以及通過(guò)顯微鏡檢查是否有支原體存在的跡象。
6. 后續(xù)檢測(cè)：去除過(guò)程完成后，再次使用支原體檢測(cè)方法確認(rèn)污染是否已被成功。
杭州細(xì)胞支原體檢測(cè)方法LAMP法支原體去除之后對(duì)細(xì)胞檢測(cè)有無(wú)影響？

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支原體污染和黑膠蟲(chóng)污染是兩種不同類(lèi)型的細(xì)胞培養(yǎng)污染，它們具有各自的特點(diǎn)和區(qū)別：
支原體污染：在相差顯微鏡下，支原體呈暗色微小顆粒位于細(xì)胞表面和細(xì)胞之間。
黑膠蟲(chóng)污染：在高倍鏡下，被黑膠蟲(chóng)污染的細(xì)胞膜會(huì)變得模糊不清，邊界不清晰，有粗糙感。

污染的影響：
支原體污染：可能導(dǎo)致細(xì)胞增殖緩慢，甚至從培養(yǎng)器皿脫落，影響細(xì)胞的DNA、RNA及蛋白表達(dá)。
黑膠蟲(chóng)污染：與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)，開(kāi)始時(shí)對(duì)細(xì)胞沒(méi)有什么影響，但當(dāng)數(shù)量多時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)會(huì)受到影響直至死亡。

污染的來(lái)源：
支原體污染：可能來(lái)源于工作環(huán)境的污染、操作者本身、培養(yǎng)基的污染、交叉污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染以及用來(lái)制備細(xì)胞的原始組織或部位的污染。
黑膠蟲(chóng)污染：可能來(lái)源于細(xì)胞本身的污染或從動(dòng)物取材時(shí)的污染，也可能通過(guò)培養(yǎng)箱空氣進(jìn)行污染。

細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中如果發(fā)現(xiàn)支原體污染，可以采取以下一些方法嘗試去除污染：

1. 抗*素治*：使用針對(duì)支原體有效的抗*素，如四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)、氟喹諾酮類(lèi)等。根據(jù)搜索結(jié)果，可以加入高濃度抗*素進(jìn)行沖擊治*，例如慶大霉素 200ug/ml，四環(huán)素10ug/ml，卡那霉素50ug/ml，并維持24-48小時(shí)后再換入常規(guī)培養(yǎng)液。
2. 加溫處理：支原體不耐熱，可以將細(xì)胞置于41°C中處理5-10小時(shí)以殺滅支原體。但需注意，高溫也可能對(duì)細(xì)胞造成傷害，因此需要預(yù)先確定對(duì)細(xì)胞影響較小的處理時(shí)間。
3. 使用支原體清除劑：市場(chǎng)上有專(zhuān)門(mén)的支原體清除劑，按照產(chǎn)品說(shuō)明使用。
4. 使用支原體清*培養(yǎng)基：如Procell支原體清*培養(yǎng)基，這類(lèi)產(chǎn)品含有清*支原體的特殊成分，可以抑制支原體生長(zhǎng)并挽救珍貴細(xì)胞。
5. 物理方法：一些實(shí)驗(yàn)室采用過(guò)濾的方法，使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過(guò)濾培養(yǎng)基和試劑，以阻止支原體的侵入。
6. 細(xì)胞傳代：在一些情況下，通過(guò)細(xì)胞傳代可能有助于減少支原體的污染程度。
支原體去除試劑會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)嘛？

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細(xì)胞培養(yǎng)中建議使用支原體檢測(cè)的原因主要有以下幾點(diǎn)：
1. 支原體污染率高：常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染率保守估計(jì)在15-35%之間。
2. 影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果：支原體污染會(huì)嚴(yán)重干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度，影響培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)和生理特征。
3. 難以用光學(xué)顯微鏡檢測(cè)：支原體是極小的細(xì)菌，其細(xì)胞膜周?chē)鷽](méi)有細(xì)胞壁，無(wú)法用光學(xué)顯微鏡檢測(cè)到。
4. 難以消滅：支原體能夠迅速滲透整個(gè)實(shí)驗(yàn)室，一旦污染很難徹底消滅。
5. 影響產(chǎn)品質(zhì)量：支原體污染會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量，監(jiān)管機(jī)構(gòu)推薦檢測(cè)所有細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物中是否存在支原體。
6. 保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性：定期進(jìn)行支原體檢測(cè)和去除，確保無(wú)支原體存在細(xì)胞培養(yǎng)體系內(nèi)，才能獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
支原體去除的實(shí)驗(yàn)步驟？細(xì)胞支原體去除貨期

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支原體去除試劑使用后，對(duì)支原體的檢測(cè)可能會(huì)有影響。一些支原體去除試劑通過(guò)特異性地與支原體膜結(jié)合、改變支原體膜的通透性來(lái)殺死支原體，而對(duì)真核細(xì)胞幾乎沒(méi)有影響。然而，某些情況下，去除試劑可能會(huì)對(duì)細(xì)胞的活力和形態(tài)產(chǎn)生一定的影響，尤其是在去除劑作用期間。此外，如果去除劑的效果不徹底，可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞再次被支原體污染。

需要注意的是，某些支原體去除試劑可能會(huì)在去除支原體的過(guò)程中導(dǎo)致支原體膜溶解，從而釋放出支原體的DNA，這可能會(huì)在隨后的支原體核酸檢測(cè)中引起假陽(yáng)性結(jié)果。因此，在去除支原體后，建議在繼續(xù)正常傳代培養(yǎng)幾代細(xì)胞后再進(jìn)行支原體檢測(cè)，以確保檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
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標(biāo)簽： 支原體 免疫沉淀