南京Co IP免疫沉淀磁珠哪個公司好用

來源： 發(fā)布時間：2024-06-01

RIP實驗步驟通常包括：
1. 細胞收集與交聯(lián)：培養(yǎng)細胞至適當密度。使用交聯(lián)劑（如甲醛）進行交聯(lián)，以固定蛋白質(zhì)-RNA復合物。
2. 細胞裂解：收集細胞并進行裂解，釋放RNA-蛋白質(zhì)復合物。在裂解過程中添加蛋白酶抑制劑以防止蛋白質(zhì)降解。
3. 超聲處理：使用超聲波破壞細胞，獲得更小的染色質(zhì)片段，這有助于后續(xù)步驟中抗體的接觸。
4. 除去細胞碎片：通過離心去除細胞碎片和未裂解的細胞，收集含RNA-蛋白質(zhì)復合物的上清液。
5. 免疫沉淀：將針對特定RNA結合蛋白（RBP）的抗體加入到上清液中。孵育一段時間，使抗體與目標蛋白充分結合。
6. 捕獲免疫復合物：添加蛋白A或蛋白G結合的磁珠或瓊脂糖珠。孵育使抗體-蛋白質(zhì)-RNA復合物與珠子結合。
7. 洗滌：多次洗滌珠子以去除未特異性結合的蛋白質(zhì)和RNA。
8. 洗脫與逆轉交聯(lián)：使用適當?shù)木彌_液洗脫免疫復合物。使用蛋白酶K處理樣品以逆轉交聯(lián)，釋放RNA。
9. RNA提取與純化：從免疫沉淀樣品中提取RNA，并進行純化。
10. RNA分析：使用qPCR、Northern blot、RNA-Seq等方法分析沉淀的RNA，以確定與目標蛋白相互作用的RNA種類。
免疫沉淀技術IP的實驗設計。南京Co IP免疫沉淀磁珠哪個公司好用

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免疫沉淀純化所得抗原量低有多種原因，
A. 純化所得抗原量低
1. 抗原結合水平低
IP 應用中出現(xiàn)低抗原結合水平的可能原因有很多，結合反應所使用的溶液是重要原因之一。必須使用適合的緩沖液，有特定的pH和鹽濃度，可能還需要添加互作所需的輔助因子。IP 或Co-IP 中用于純化的抗體是影響得率的另一個重要因素。如果抗體本身易失活或與抗原結合微弱，則可能很難找到足夠溫和的條件，即能產(chǎn)生結合，又能保證在孵育和洗滌過程中結合可以穩(wěn)定保持。
2. 抗原洗脫水平低
在某些情況下，抗原與抗體或結合蛋白結合之間可能會發(fā)生極強的相互作用，傳統(tǒng)的洗脫緩沖液無法將其破壞。如果需要使用溫和洗脫緩沖液收集功能性抗原，則上述矛盾尤為突出。

南京anti Flag免疫沉淀磁珠原理免疫沉淀技術的實驗方法。

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Co-IP（免疫共沉淀）技術主要用于研究蛋白質(zhì)之間的相互作用，其應用場景如下：
1. 蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡的鑒定：Co-IP可用于構建蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡，發(fā)現(xiàn)目標蛋白的結合伙伴。
2. 信號傳導途徑的研究：通過Co-IP技術，科學家們發(fā)現(xiàn)了許多關鍵的細胞信號通路，如MAPK和PI3K/Akt通路等，為深入理解這些通路的功能和調(diào)控機制提供了重要線索。
3. 藥物靶點篩選：利用Co-IP技術，研究人員可以篩選潛在的藥物靶點。
疾病機制研究：通過分析疾病相關蛋白質(zhì)的相互作用，Co-IP有助于揭示疾病的分子機制。
4. 抗體藥物開發(fā)：Co-IP可用于研究抗體藥物與其靶標蛋白的結合特性，評估抗體藥物的親和力和特異性。
5. 轉錄因子研究：Co-IP技術可以用于研究轉錄因子與蛋白質(zhì)的相互作用，進而揭示基因調(diào)控網(wǎng)絡。

染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatinimmunoprecipitation，ChIP）技術是目前公認的研究此相互作用的選擇，是真核生物基因表達機制研究中不可或缺的技術之一。
它的基本原理是在活細胞狀態(tài)下，固定蛋白質(zhì)-DNA（染色質(zhì)）復合物，并將其切斷為一定長度范圍內(nèi)的染色質(zhì)小片段，然后通過免疫學方法（抗體親和）沉淀此復合體，特異性地富集目的蛋白結合的 DNA，通過對目的片段的純化與后期檢測，從而獲得蛋白質(zhì)與 DNA 相互作用的信息。
這項技術通過蛋白質(zhì)與DNA互作來分析目標基因活性以及已知蛋白質(zhì)的靶基因，被廣泛應用于體內(nèi)轉錄調(diào)控因子與靶基因啟動子上特異核苷酸序列結合方面的研究。該技術常與DNA芯片和分子克隆技術相結合。
免疫沉淀技術IP是什么？

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免疫沉淀實驗步驟：
1. 樣品制備
a. 懸浮細胞樣品處理：離心收集細胞（4℃, 1000g, 5 min），用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液（裂解液應在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑Cocktail，使蛋白酶抑制劑Cocktail的終濃度為1×）?；靹蚝笾糜诒咸幚?0 min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。
b. 貼壁細胞樣品處理：移去培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞兩遍；用細胞刮棒刮脫細胞，收集至1.5mL EP管內(nèi)，按照6孔板每孔加入150-250 μL裂解液的比例加入含蛋白酶抑制劑的裂解液（裂解液應在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入蛋白酶抑制劑Cocktail，使蛋白酶抑制劑Cocktail的終濃度為1×）。吹打數(shù)下，使裂解液和細胞充分接觸?；靹蚝笾糜诒咸幚?0 min；離心收集上清液（4℃, 14000g, 10 min），置于冰上備用（或置于-20℃長期保存）。
4. 后續(xù)：磁珠預處理——抗體吸附——抗原結合反應——抗體洗脫
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免疫沉淀Co-IP抗體的選擇？南京Co IP免疫沉淀磁珠哪個公司好用

RNA免疫沉淀技術（RIP）是一種研究RNA與蛋白質(zhì)相互作用的重要方法，其應用領域主要包括：
1. 轉錄后調(diào)控研究：RIP技術可以幫助研究者了解RNA在轉錄后水平如何被調(diào)控。
2. 表觀遺傳調(diào)控：RIP技術用于研究RNA結合蛋白（RBPs）在表觀遺傳調(diào)控中的作用。
3. 非編碼RNA功能研究：RIP技術可以用來研究長非編碼RNA（lncRNA）、miRNA和其他小RNA的種類，以及它們?nèi)绾闻c蛋白質(zhì)相互作用來調(diào)控基因表達。
4. RNA病毒研究：RIP技術也可用于研究RNA病毒與其宿主細胞內(nèi)蛋白質(zhì)的相互作用，進而了解病毒復制和致病機制。
5. RNA修飾和甲基化研究：RIP技術結合其他技術如m5C-RIP-seq，可用于研究RNA甲基化修飾及其在病理過程中的作用。
6. RNA定位和穩(wěn)定性：通過RIP技術，研究者可以探索特定RNA在細胞內(nèi)的定位以及它們?nèi)绾伪环€(wěn)定或降解。
7. RNA-蛋白質(zhì)復合物的鑒定：RIP技術可以用來鑒定與特定RNA結合的蛋白質(zhì)，從而揭示RNA-蛋白質(zhì)復合物的組成。
8. 疾病相關RNA研究：RIP技術在疾病相關RNA的研究中也有應用。
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