其他熒光物質(zhì)：酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)某些化合物本身無(wú)熒光效應(yīng)，一旦經(jīng)酶作用便形成具有強(qiáng)熒光的物質(zhì)。例如4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮，后者可發(fā)出熒光，激發(fā)光波長(zhǎng)為360nm，發(fā)射光波長(zhǎng)為450nm。其他如堿性酸酶的底物4-甲基傘酮磷酸鹽和辣根過(guò)氧化物酶的底物對(duì)羥基乙酸等。鑭系螯合物某些3價(jià)稀土鑭系元素如銪（Eu3）、鋱（Tb3）、鈰（Ce3）等的螯合物經(jīng)激發(fā)后也可發(fā)射特征性的熒光，其中以Eu3應(yīng)用較廣。Eu3螯合物的激發(fā)光波長(zhǎng)范圍寬，發(fā)射光波長(zhǎng)范圍窄，熒光衰變時(shí)間長(zhǎng)，較適合用于分辨熒光免疫測(cè)定。熒光抗體法和熒光抗原法都屬于免疫熒光技術(shù)的范疇。CD86免疫熒...

免疫熒光在病理學(xué)中有著獨(dú)特的價(jià)值，為疾病的診斷和研究增添了新的維度。在腎臟病理學(xué)中，對(duì)于腎小球疾病的診斷，免疫熒光是一種重要的檢測(cè)手段。例如，在IgA腎病中，免疫熒光可以顯示IgA在腎小球系膜區(qū)的沉積情況。這種沉積模式是IgA腎病的重要病理特征，通過(guò)免疫熒光的精確檢測(cè)，可以準(zhǔn)確診斷IgA腎病，并與其他腎小球疾病進(jìn)行區(qū)分。在皮膚病理學(xué)方面，對(duì)于自身免疫性皮膚病，如天皰瘡的診斷，免疫熒光可以檢測(cè)皮膚組織中自身抗體與表皮細(xì)胞間物質(zhì)的結(jié)合情況。通過(guò)觀察熒光標(biāo)記的分布，可以判斷疾病的類型和嚴(yán)重程度，為制定治療方案提供依據(jù)。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)用于顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的抗原或半抗原物質(zhì)。Glucagon...

免疫熒光在**研究中扮演著得力助手的角色。它可以揭示腫瘤細(xì)胞的多種特性，為**的診斷和***提供重要信息。在**診斷中，免疫熒光能夠區(qū)分腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞。腫瘤細(xì)胞往往具有一些特異性的標(biāo)志物，利用標(biāo)記這些標(biāo)志物的熒光抗體，在顯微鏡下腫瘤細(xì)胞會(huì)顯示出獨(dú)特的熒光信號(hào)。例如，在乳腺*研究中，通過(guò)免疫熒光標(biāo)記雌***受體，就可以判斷腫瘤細(xì)胞是否表達(dá)該受體，這對(duì)于乳腺*的分型和***方案的選擇至關(guān)重要。在**轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究中，免疫熒光可以用來(lái)追蹤腫瘤細(xì)胞的遷移路徑。標(biāo)記腫瘤細(xì)胞表面的某些蛋白，觀察這些標(biāo)記蛋白在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化，了解腫瘤細(xì)胞是如何從原發(fā)部位侵入周圍組織，進(jìn)而進(jìn)入血管或淋巴管發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的，...

在***的研究中，血管壁的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞成分的改變是疾病發(fā)展的關(guān)鍵因素。多重免疫組化可以同時(shí)標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF），平滑肌細(xì)胞的標(biāo)志物，如 α - 平滑肌肌動(dòng)蛋白（α - SMA），以及炎癥細(xì)胞的標(biāo)志物，如單核細(xì)胞趨化蛋白 - 1（MCP - 1）和白細(xì)胞介素 - 8（IL - 8）。通過(guò)觀察這些標(biāo)志物在***斑塊中的分布，可以了解血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能狀態(tài)、平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移情況，以及炎癥細(xì)胞是如何被趨化到病變部位并參與斑塊形成的。例如，MCP - 1 可以吸引單核細(xì)胞進(jìn)入血管壁，在斑塊內(nèi)分化為巨噬細(xì)胞，IL - 8 則進(jìn)一步促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)展。免疫熒光技術(shù)...

免疫熒光在神經(jīng)退行性疾病研究中具有廣泛的應(yīng)用，為解開(kāi)這些疾病的謎團(tuán)提供了重要手段。在阿爾茨海默病的研究中，免疫熒光可用于標(biāo)記β-淀粉樣蛋白（Aβ）和tau蛋白。Aβ的沉積和tau蛋白的過(guò)度磷酸化是阿爾茨海默病的主要病理特征。通過(guò)免疫熒光，可以觀察到Aβ斑塊和tau蛋白纏結(jié)在大腦組織中的分布情況。這有助于研究人員深入了解阿爾茨海默病的發(fā)病機(jī)制，探索疾病的早期診斷方法，以及評(píng)估潛在***藥物對(duì)這些病理特征的影響。在帕金森病的研究中，免疫熒光可以標(biāo)記α-突觸**白。α-突觸**白的聚集形成路易小體是帕金森病的重要病理標(biāo)志。通過(guò)免疫熒光觀察α-突觸**白在神經(jīng)元中的聚集情況，能夠研究帕金森病的神經(jīng)元損...

免疫熒光在病理學(xué)中有著獨(dú)特的價(jià)值，為疾病的診斷和研究增添了新的維度。在腎臟病理學(xué)中，對(duì)于腎小球疾病的診斷，免疫熒光是一種重要的檢測(cè)手段。例如，在IgA腎病中，免疫熒光可以顯示IgA在腎小球系膜區(qū)的沉積情況。這種沉積模式是IgA腎病的重要病理特征，通過(guò)免疫熒光的精確檢測(cè)，可以準(zhǔn)確診斷IgA腎病，并與其他腎小球疾病進(jìn)行區(qū)分。在皮膚病理學(xué)方面，對(duì)于自身免疫性皮膚病，如天皰瘡的診斷，免疫熒光可以檢測(cè)皮膚組織中自身抗體與表皮細(xì)胞間物質(zhì)的結(jié)合情況。通過(guò)觀察熒光標(biāo)記的分布，可以判斷疾病的類型和嚴(yán)重程度，為制定治療方案提供依據(jù)。免疫熒光技術(shù)可以用于研究免疫系統(tǒng)的功能和異常。Glut1免疫檢測(cè)在自身免疫性甲狀腺...

在***的研究中，血管壁的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞成分的改變是疾病發(fā)展的關(guān)鍵因素。多重免疫組化可以同時(shí)標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF），平滑肌細(xì)胞的標(biāo)志物，如 α - 平滑肌肌動(dòng)蛋白（α - SMA），以及炎癥細(xì)胞的標(biāo)志物，如單核細(xì)胞趨化蛋白 - 1（MCP - 1）和白細(xì)胞介素 - 8（IL - 8）。通過(guò)觀察這些標(biāo)志物在***斑塊中的分布，可以了解血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能狀態(tài)、平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移情況，以及炎癥細(xì)胞是如何被趨化到病變部位并參與斑塊形成的。例如，MCP - 1 可以吸引單核細(xì)胞進(jìn)入血管壁，在斑塊內(nèi)分化為巨噬細(xì)胞，IL - 8 則進(jìn)一步促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)展。免疫熒光技術(shù)...

在***的研究中，血管壁的炎癥反應(yīng)和細(xì)胞成分的改變是疾病發(fā)展的關(guān)鍵因素。多重免疫組化可以同時(shí)標(biāo)記血管內(nèi)皮細(xì)胞的標(biāo)志物，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF），平滑肌細(xì)胞的標(biāo)志物，如 α - 平滑肌肌動(dòng)蛋白（α - SMA），以及炎癥細(xì)胞的標(biāo)志物，如單核細(xì)胞趨化蛋白 - 1（MCP - 1）和白細(xì)胞介素 - 8（IL - 8）。通過(guò)觀察這些標(biāo)志物在***斑塊中的分布，可以了解血管內(nèi)皮細(xì)胞的功能狀態(tài)、平滑肌細(xì)胞的增殖和遷移情況，以及炎癥細(xì)胞是如何被趨化到病變部位并參與斑塊形成的。例如，MCP - 1 可以吸引單核細(xì)胞進(jìn)入血管壁，在斑塊內(nèi)分化為巨噬細(xì)胞，IL - 8 則進(jìn)一步促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)展。免疫熒光技術(shù)...

在病毒性肝炎的研究中，多重免疫組化可以同時(shí)標(biāo)記肝炎病毒的抗原，如乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒**抗原（HBcAg），以及肝臟內(nèi)的免疫細(xì)胞標(biāo)志物，如 CD8 + T 細(xì)胞、巨噬細(xì)胞標(biāo)志物 CD68 和細(xì)胞因子如干擾素 - γ（IFN - γ）。HBsAg 和 HBcAg 在肝細(xì)胞中的分布反映了乙肝病毒的***狀態(tài)，而免疫細(xì)胞和細(xì)胞因子則與機(jī)體對(duì)病毒的免疫反應(yīng)密切相關(guān)。通過(guò)觀察這些標(biāo)志物的關(guān)系，可以深入了解乙肝病毒在肝臟內(nèi)的復(fù)制、傳播過(guò)程，以及機(jī)體免疫系統(tǒng)是如何對(duì)病毒***作出反應(yīng)的。例如，如果發(fā)現(xiàn) HBcAg 主要位于肝細(xì)胞的細(xì)胞核內(nèi)，且周圍有大量 CD8 + T 細(xì)胞浸潤(rùn)，這可能表...

免疫熒光檢測(cè)對(duì)比于酶檢測(cè)存在著諸多明顯的優(yōu)勢(shì)。其中就包括定量熒光信號(hào)的優(yōu)異能力（這與采用基于酶的方法所進(jìn)行的定性測(cè)定是截然相反的），其能夠以極高的精度對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行量化分析，這種能力使得我們可以更加深入、細(xì)致且準(zhǔn)確地了解和把握相關(guān)信息。還有復(fù)用能力，也就是說(shuō)能夠?qū)⒕哂懈鳟惏l(fā)射光譜的熒光染料巧妙地結(jié)合起來(lái)，以此來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)多種不同蛋白質(zhì)的同步檢測(cè)，這極大地拓展了檢測(cè)的廣度和深度，提升了檢測(cè)的效率和全面性。此外，熒光染料還具備極其出色的光穩(wěn)定性，這為檢測(cè)過(guò)程的順利進(jìn)行以及結(jié)果的可靠性提供了有力的保障。免疫熒光技術(shù)可以用于研究病毒傳播和免疫應(yīng)答。CD20免疫熒光試驗(yàn)熒光素標(biāo)記抗體的方法：方法及步驟：①抗...

免疫熒光的原理和類型：免疫熒光利用熒光分子或熒光團(tuán)在一定波長(zhǎng)（分子的吸收光譜）下吸收光子的特性，經(jīng)過(guò)短暫的間隔（發(fā)射光譜）后以較高的波長(zhǎng)發(fā)射光子，并伴隨能量損失。發(fā)射的熒光可通過(guò)顯微鏡觀察到。熒光團(tuán)可以通過(guò)可見(jiàn)光或紫外光激發(fā)。具有高光穩(wěn)定性和熒光量子產(chǎn)率的熒光染料可在市場(chǎng)上購(gòu)買，其激發(fā)較大值跨越從400到>700nm的波長(zhǎng)范圍。它們不會(huì)損傷活細(xì)胞，可安全用于生物制劑。在進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)時(shí)，首先對(duì)細(xì)胞或組織進(jìn)行固定和透化處理。進(jìn)行免疫染色時(shí)，熒光團(tuán)與目標(biāo)抗原的抗體結(jié)合，然后使用成像顯微鏡觀察熒光信號(hào)。根據(jù)使用的抗體和所需的信號(hào)擴(kuò)增，免疫熒光可分為直接和間接兩種類型。免疫熒光技術(shù)可以用于研究病毒傳...

免疫熒光在傳染病發(fā)病機(jī)制研究中發(fā)揮著重要的作用，為深入了解傳染病的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程提供了重要依據(jù)。在細(xì)菌傳染病研究中，以結(jié)核桿菌***為例。免疫熒光可以標(biāo)記結(jié)核桿菌在宿主細(xì)胞內(nèi)的定位，以及結(jié)核桿菌***引起的宿主細(xì)胞免疫反應(yīng)相關(guān)分子。通過(guò)觀察結(jié)核桿菌在巨噬細(xì)胞等細(xì)胞內(nèi)的生存狀態(tài)，如是否被吞噬體包裹、是否能夠逃逸溶酶體的殺傷等，以及宿主細(xì)胞內(nèi)免疫分子如細(xì)胞因子、***肽等的表達(dá)和分布情況，可以深入研究結(jié)核桿菌的致病機(jī)制。這有助于開(kāi)發(fā)新的抗結(jié)核藥物和疫苗。在病毒傳染病研究中，如**病毒（HIV）***。免疫熒光可用于標(biāo)記HIV病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制過(guò)程，包括病毒基因組的整合、病毒蛋白的合成等。同時(shí)，...

在神經(jīng)系統(tǒng)疾病的研究和診斷中，免疫組化發(fā)揮著獨(dú)特的作用。神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，細(xì)胞種類繁多，許多神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)病機(jī)制尚不明確。免疫組化技術(shù)為我們提供了一個(gè)探索神經(jīng)系統(tǒng)微觀世界的有力工具。以阿爾茨海默病為例，其主要病理特征是大腦中β-淀粉樣蛋白（Aβ）的沉積和神經(jīng)纖維纏結(jié)（NFTs）。免疫組化可以特異性地標(biāo)記Aβ和NFTs中的tau蛋白，讓病理學(xué)家清晰地觀察到這些病理改變?cè)诖竽X中的分布情況。這有助于我們深入理解阿爾茨海默病的發(fā)病過(guò)程，從細(xì)胞和分子水平探索疾病的起源。在神經(jīng)系統(tǒng)**的診斷方面，免疫組化也有著重要意義。例如，通過(guò)檢測(cè)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）可以確定**是否來(lái)源于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，這對(duì)于...

免疫熒光在生物醫(yī)學(xué)研究中是不可或缺的助力工具，廣泛應(yīng)用于各個(gè)領(lǐng)域。在藥物研發(fā)方面，免疫熒光可以用來(lái)檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞的作用靶點(diǎn)。例如，在研發(fā)***藥物時(shí)，通過(guò)免疫熒光標(biāo)記腫瘤細(xì)胞表面的藥物靶點(diǎn)蛋白，觀察藥物與靶點(diǎn)的結(jié)合情況以及對(duì)靶點(diǎn)功能的影響。這有助于評(píng)估藥物的有效性和特異性，為藥物的篩選和優(yōu)化提供依據(jù)。在干細(xì)胞研究中，免疫熒光可用于鑒定干細(xì)胞的特性。干細(xì)胞具有自我更新和分化的能力，通過(guò)標(biāo)記干細(xì)胞特異性的標(biāo)志物，如Oct-4、Nanog等，可以確定干細(xì)胞的純度和分化狀態(tài)。這對(duì)于干細(xì)胞***的研究和應(yīng)用具有重要意義。免疫熒光技術(shù)利用熒光染料標(biāo)記的抗體與目標(biāo)分子結(jié)合，從而實(shí)現(xiàn)可視化檢測(cè)。Glut1免疫...

免疫熒光的制作：樣品準(zhǔn)備（貼壁細(xì)胞、懸浮細(xì)胞以及組織等）：對(duì)于貼壁細(xì)胞：先將潔凈的蓋玻片在70%乙醇中進(jìn)行浸泡處理，然后用干凈無(wú)菌的鑷子放置到培養(yǎng)皿中，用無(wú)菌PBS洗去殘留的乙醇。待細(xì)胞接近長(zhǎng)成單層后取出蓋玻片，操作小心，防止細(xì)胞脫片。對(duì)于懸浮細(xì)胞：有2種方法，①先在懸浮液中進(jìn)行固定步驟，然后把細(xì)胞滴加在載玻片上，干燥后細(xì)胞會(huì)緊貼在載玻片上。②先在懸浮液中進(jìn)行固定和染色步驟，離心洗脫，然后用移液管移至盒式玻片進(jìn)行后續(xù)染色步驟。對(duì)于冷凍切片：切片放置在載玻片上后，可以直接進(jìn)行固定等后續(xù)操作。對(duì)于石蠟切片：免疫熒光中石蠟切片較少，要先進(jìn)行脫蠟和抗原修復(fù)處理。免疫熒光技術(shù)可以用于研究食品安全和生物安...

免疫熒光應(yīng)用范圍：其應(yīng)用范圍極其普遍，可以測(cè)定內(nèi)分泌、蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子、細(xì)胞表面抗原、多肽、核酸、受體、神經(jīng)遞質(zhì)、肉瘤標(biāo)志物、血藥濃度等各種生物活性物質(zhì)。根據(jù)診斷類別，又可分為傳染性疾病、內(nèi)分泌、藥物檢測(cè)、免疫學(xué)、血型鑒定等。免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟：洗滌：PBS洗滌5min*3次。封閉：使用封閉液對(duì)樣本進(jìn)行封閉，一般1h。加一抗：使用合適濃度的一抗與樣本4℃過(guò)夜。洗滌：PBS或PBST洗滌5min*3次。加二抗：使用間接法時(shí)需要加二抗處理，根據(jù)說(shuō)明書(shū)使用合適的濃度，避光處理1h（后面步驟均需避光）。洗滌：PBS或PBST洗滌5min*3次。封片：滴一滴防淬滅劑，封片?？闪⒓从^察后暫存4℃盡快觀察。免...

免疫熒光技術(shù)具有一系列明顯的特點(diǎn)。首先，其特異性非常強(qiáng)，能夠精細(xì)地識(shí)別和結(jié)合特定的目標(biāo)物質(zhì)，確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性和針對(duì)性。其次，敏感性極高，能夠敏銳地捕捉到極其微量的目標(biāo)物，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)微變化的有效檢測(cè)。再者，速度相當(dāng)快，能夠在較短的時(shí)間內(nèi)得出檢測(cè)結(jié)果，提高了工作效率。然而，免疫熒光技術(shù)也存在一些主要的缺點(diǎn)。一方面，非特異性染色這一問(wèn)題到目前為止尚未能得到完全徹底的解決，這在一定程度上可能會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果產(chǎn)生干擾。另一方面，結(jié)果判定的客觀性有所欠缺，容易受到主觀因素的影響。此外，其技術(shù)程序也相對(duì)較為復(fù)雜，對(duì)操作人員的技術(shù)水平和經(jīng)驗(yàn)有一定要求。免疫熒光技術(shù)可以用于研究細(xì)胞內(nèi)分子的相互作用。JNK免疫熒光...

細(xì)胞的固定及免疫熒光：吸去一抗，使用PBS浸洗 3 次，每次 5 min。向孔內(nèi)滴加足夠量適宜濃度的二抗，37℃，室溫避光孵育1小時(shí)。注意二抗帶有熒光素標(biāo)記，因此操作過(guò)程盡量在暗處進(jìn)行。吸去二抗，使用PBS浸洗 3 次，每次 5 min。向玻片上滴加DAPI，或者Hoechst復(fù)染細(xì)胞核，一般為藍(lán)色熒光；避光孵育5-10min。使用PBS輕洗細(xì)胞3 次，每次 5 min，洗去多余的DAPI。取爬片時(shí)由于爬片與培養(yǎng)皿底結(jié)合較緊，張力較大，可將注射器針頭針尖向背面做個(gè)小鉤，這樣將爬片輕輕勾起，用小鑷子取出即可。用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，注意將爬片反過(guò)來(lái)貼于多聚賴氨酸載...

免疫熒光通過(guò)抗體與示蹤物質(zhì)結(jié)合，利用抗原-抗體結(jié)合反應(yīng)，進(jìn)而對(duì)抗原所在的細(xì)胞或組織進(jìn)行定性或定量。由于熒光素所發(fā)的熒光可在熒光顯微鏡下檢出，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光，可以看見(jiàn)熒光所在的細(xì)胞或組織，利用定量技術(shù)測(cè)定含量，從而可對(duì)抗原進(jìn)行細(xì)胞定性和定位分析。細(xì)胞免疫熒光用途：快速直觀顯示所檢測(cè)蛋白的細(xì)胞定位。材料與儀器：樣品：貼壁細(xì)胞；試劑：4% 組織固定液，PBS，Triton X-100，BSA，熒光二抗，免疫熒光染色二抗稀釋液，抗熒光猝滅封片液，0.25% 胰酶；器材：6/12/24 孔板，細(xì)胞爬片（蓋玻片），載玻片，15 ml 離心管。免疫熒光技術(shù)可以用于研究疾病的發(fā)生機(jī)制和醫(yī)...

免疫熒光法是將免疫學(xué)方法(抗原抗體特異結(jié)合)與熒光標(biāo)記技術(shù)結(jié)合起來(lái)研究特異蛋白抗原在細(xì)胞內(nèi)分布的方法。由于熒光素所發(fā)的熒光可在熒光顯微鏡下檢出，從而可對(duì)抗原進(jìn)行細(xì)胞定位。用免疫熒光技術(shù)顯示和檢查細(xì)胞或組織內(nèi)抗原或半抗原物質(zhì)等方法稱為免疫熒光細(xì)胞(或組織)化學(xué)技術(shù)。免疫熒光細(xì)胞化學(xué)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理，先將已知的抗原或抗體標(biāo)記上熒光素制成熒光標(biāo)記物，再用這種熒光抗體(或抗原)作為分子探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。在細(xì)胞或組織中形成的抗原抗體復(fù)合物上含有熒光素，利用熒光顯微鏡觀察標(biāo)本，熒光素受激發(fā)光的照射而發(fā)出明亮的熒光(黃綠色或桔紅色)，可以看見(jiàn)熒光所在的細(xì)胞或組織，從而確定抗原...

免疫熒光注意事項(xiàng)：對(duì)照實(shí)驗(yàn)的設(shè)置：1、內(nèi)源性組織背景對(duì)照：某些細(xì)胞和組織可能有固有的生物學(xué)性質(zhì)，會(huì)產(chǎn)生背景熒光，對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響，例如色素脂褐質(zhì)。因此在孵育一抗前，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行觀察，確保抗原本身沒(méi)有信號(hào)。2、陽(yáng)性對(duì)照：用確認(rèn)含有待測(cè)抗原的組織或細(xì)胞，與待測(cè)標(biāo)本進(jìn)行統(tǒng)一處理，結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性，可證明待測(cè)抗原有一定活性并且實(shí)驗(yàn)過(guò)程中用的試劑及方法均可靠。3、陰性對(duì)照：與陽(yáng)性對(duì)照相反，用明確不含有待測(cè)抗原的細(xì)胞或組織切片染色，結(jié)果若為陰性，可排除染色過(guò)程中由于非特異性染色造成的假陽(yáng)性結(jié)果。免疫熒光在醫(yī)學(xué)診斷中起著重要作用，可以用于檢測(cè)病原體、肉瘤標(biāo)志物等。osteocalcin(ocn)免疫熒光染色其他熒...

檢測(cè)復(fù)雜的生物學(xué)結(jié)構(gòu)需要較高清晰度的熒光信號(hào)，并將熒光信號(hào)從背景噪聲中分離開(kāi)來(lái)。標(biāo)準(zhǔn)的免疫熒光標(biāo)記很少能夠獲得較佳信噪比的成像效果。獲得良好圖片和較佳的可供發(fā)表的高質(zhì)量圖像之間的差異就在于：需要精細(xì)調(diào)整樣品信號(hào)達(dá)到峰值特異性、高清晰度和較佳放大倍數(shù)。雖然熒光基團(tuán)是進(jìn)行高質(zhì)量細(xì)胞成像的較佳選擇，但不可避免地也極易發(fā)生光漂白，即熒光信號(hào)的光化學(xué)降解或衰退。任何光敏感度的下降都可能導(dǎo)致數(shù)據(jù)出現(xiàn)偏差，產(chǎn)生假性結(jié)果。抗淬滅封片劑可以保護(hù)熒光標(biāo)記蛋白的穩(wěn)定性，維持?jǐn)?shù)周乃至數(shù)月的圖像信號(hào)完整度。免疫熒光技術(shù)中，以熒光物質(zhì)標(biāo)記抗體來(lái)定位抗原物質(zhì)的方法被稱為熒光抗體技術(shù)。TLR4免疫檢測(cè)免疫熒光應(yīng)用范圍：其應(yīng)用...

免疫熒光的原理和類型：免疫熒光利用熒光分子或熒光團(tuán)在一定波長(zhǎng)（分子的吸收光譜）下吸收光子的特性，經(jīng)過(guò)短暫的間隔（發(fā)射光譜）后以較高的波長(zhǎng)發(fā)射光子，并伴隨能量損失。發(fā)射的熒光可通過(guò)顯微鏡觀察到。熒光團(tuán)可以通過(guò)可見(jiàn)光或紫外光激發(fā)。具有高光穩(wěn)定性和熒光量子產(chǎn)率的熒光染料可在市場(chǎng)上購(gòu)買，其激發(fā)較大值跨越從400到>700nm的波長(zhǎng)范圍。它們不會(huì)損傷活細(xì)胞，可安全用于生物制劑。在進(jìn)行免疫熒光檢測(cè)時(shí)，首先對(duì)細(xì)胞或組織進(jìn)行固定和透化處理。進(jìn)行免疫染色時(shí)，熒光團(tuán)與目標(biāo)抗原的抗體結(jié)合，然后使用成像顯微鏡觀察熒光信號(hào)。根據(jù)使用的抗體和所需的信號(hào)擴(kuò)增，免疫熒光可分為直接和間接兩種類型。使用已知熒光抗原標(biāo)記物質(zhì)來(lái)檢查...

基于熒光成像的技術(shù)對(duì)于查詢細(xì)胞和組織的結(jié)構(gòu)和功能方面非常有用。當(dāng)與免疫化學(xué)結(jié)合時(shí)，熒光成像技術(shù)的分析能力增加，增強(qiáng)了這種技術(shù)在普遍的研究和臨床應(yīng)用中的實(shí)用性，使其成為寶貴的工具。免疫熒光顯微鏡通過(guò)使活細(xì)胞成像能夠可視化整個(gè)細(xì)胞器，徹底改變了細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域。免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)是結(jié)合抗原抗體結(jié)合能力進(jìn)行細(xì)胞分析的常用熒光成像技術(shù)。免疫熒光（IF）是一種強(qiáng)大的免疫染色技術(shù)，利用顯微鏡觀察與靶蛋白和其他目標(biāo)分子結(jié)合的熒光素標(biāo)記抗體。免疫熒光用于鑒定細(xì)胞中的細(xì)胞和組織特異性抗原；可視化蛋白質(zhì)的存在與否、細(xì)胞定位和活化狀態(tài)；并分析免疫反應(yīng)。免疫熒光技術(shù)是一種以熒光素標(biāo)記抗體來(lái)定位抗原物質(zhì)的高度發(fā)達(dá)...

熒光素標(biāo)記抗體的方法：方法及步驟：①抗體的準(zhǔn)備：取適量已知球蛋白濃度之溶液，置入三角燒瓶中，加入生理鹽水及碳酸鹽緩沖液，使然后蛋白濃度為20mg/ml，緩沖液容量為總量的1/10，混勻，將三角燒瓶置冰槽中，電磁攪拌（速度適當(dāng)以不起泡沫為宜）5～10min。②熒光素的準(zhǔn)備：根據(jù)欲標(biāo)記的蛋白質(zhì)總量，按每毫克蛋白加0.01mg熒光素，用分析天平準(zhǔn)確稱所取所需的異硫氰酸熒光素粉末。③結(jié)合（或稱標(biāo)記）：邊攪拌邊將稱取的熒光色素漸漸加入球蛋白溶液中，避免將熒光素粘于三角燒瓶壁或攪拌玻棒上（大約5～10min內(nèi)加完），加畢后，繼續(xù)攪拌12～18h。結(jié)合期間應(yīng)保持蛋白溶液于4℃左右，故須及時(shí)添冰去水；亦可將結(jié)...

其他熒光物質(zhì)：酶作用后產(chǎn)生熒光的物質(zhì)某些化合物本身無(wú)熒光效應(yīng)，一旦經(jīng)酶作用便形成具有強(qiáng)熒光的物質(zhì)。例如4-甲基傘酮-β-D半乳糖苷受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基傘酮，后者可發(fā)出熒光，激發(fā)光波長(zhǎng)為360nm，發(fā)射光波長(zhǎng)為450nm。其他如堿性酸酶的底物4-甲基傘酮磷酸鹽和辣根過(guò)氧化物酶的底物對(duì)羥基乙酸等。鑭系螯合物某些3價(jià)稀土鑭系元素如銪（Eu3）、鋱（Tb3）、鈰（Ce3）等的螯合物經(jīng)激發(fā)后也可發(fā)射特征性的熒光，其中以Eu3應(yīng)用較廣。Eu3螯合物的激發(fā)光波長(zhǎng)范圍寬，發(fā)射光波長(zhǎng)范圍窄，熒光衰變時(shí)間長(zhǎng)，較適合用于分辨熒光免疫測(cè)定。免疫熒光技術(shù)可以用于研究食品安全和生物安全。CTNT免疫熒光分...

細(xì)胞的固定及免疫熒光：1)吸除培養(yǎng)基，一般先加入PBS浸洗細(xì)胞 3 次，每次 5 min。2)向孔內(nèi)加入4%多聚甲醛1ml，進(jìn)行細(xì)胞固定，室溫固定20分鐘。3)吸去多聚甲醛，使用PBS浸洗 3 次，每次 5 min。4)向孔內(nèi)加入0.5%Triton X-100(PBS配制)室溫通透20min，目的是使細(xì)胞通透。5) 除去Triton X-100，使用PBS浸洗 3 次，每次 5 min。6)用10%的與二抗同源的山羊血清(PBS配制)或者5%BSA封閉2小時(shí)（選擇的封閉液與后面操作過(guò)程中抗體稀釋液一致）。封閉后不需要用PBS清洗。7)吸去封閉液，向每孔滴加足夠量適宜濃度的一抗（一次使用抗體可...

免疫熒光應(yīng)用范圍：其應(yīng)用范圍極其普遍，可以測(cè)定內(nèi)分泌、蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子、細(xì)胞表面抗原、多肽、核酸、受體、神經(jīng)遞質(zhì)、肉瘤標(biāo)志物、血藥濃度等各種生物活性物質(zhì)。根據(jù)診斷類別，又可分為傳染性疾病、內(nèi)分泌、藥物檢測(cè)、免疫學(xué)、血型鑒定等。免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟：洗滌：PBS洗滌5min*3次。封閉：使用封閉液對(duì)樣本進(jìn)行封閉，一般1h。加一抗：使用合適濃度的一抗與樣本4℃過(guò)夜。洗滌：PBS或PBST洗滌5min*3次。加二抗：使用間接法時(shí)需要加二抗處理，根據(jù)說(shuō)明書(shū)使用合適的濃度，避光處理1h（后面步驟均需避光）。洗滌：PBS或PBST洗滌5min*3次。封片：滴一滴防淬滅劑，封片。可立即觀察后暫存4℃盡快觀察。免...

細(xì)胞免疫熒光可以觀察蛋白在細(xì)胞中的定位，以及一些特殊信號(hào)分子蛋白的出核/入核的定位變化。在進(jìn)行細(xì)胞免疫熒光過(guò)程中，需要用到細(xì)胞爬片，通過(guò)將爬片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，細(xì)胞在爬片上生長(zhǎng)，進(jìn)而進(jìn)行細(xì)胞的免疫熒光。實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：1.胰酶;2.DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基;3.細(xì)胞培養(yǎng)12孔板或者6孔板;4.爬片。間接免疫熒光的優(yōu)點(diǎn)：通過(guò)增加能夠與一抗結(jié)合的二抗數(shù)量進(jìn)行信號(hào)放大；與直接免疫熒光相比，通過(guò)信號(hào)放大提高檢測(cè)靈敏度。免疫熒光技術(shù)是一種以熒光素標(biāo)記抗體來(lái)定位抗原物質(zhì)的高度發(fā)達(dá)的標(biāo)記免疫技術(shù)。免疫熒光技術(shù)可以通過(guò)熒光顯微鏡觀察樣品中的熒光信號(hào)，從而確定目標(biāo)分子的存在和位置。C-FOS免疫熒光檢查免疫熒光-實(shí)驗(yàn)步驟...

熒光的產(chǎn)生：一此化學(xué)物質(zhì)能從外界吸收并儲(chǔ)存能量（如光能、化學(xué)能等）而進(jìn)入激發(fā)態(tài)，當(dāng)其從激發(fā)態(tài)再回復(fù)到基態(tài)時(shí)，過(guò)剩的能量可以電磁輻射的形式放射（即發(fā)光）。熒光發(fā)射的特點(diǎn)是：可產(chǎn)生熒光的分子或原子在接受能量后即刻引起發(fā)光；而一旦停止供能，發(fā)光（熒光）現(xiàn)象也隨之在瞬間內(nèi)消失?？梢砸鸢l(fā)熒光的能量種類很多，由光激發(fā)所引起的熒光稱為致熒光。由化學(xué)應(yīng)所引起的稱為化學(xué)熒光，由X線或陰極射線引起的分別稱為X線熒光或陰極射線熒光。熒光免疫技術(shù)一般應(yīng)用致熒光物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)記。免疫熒光技術(shù)在免疫學(xué)研究中發(fā)揮重要作用，幫助揭示細(xì)胞和分子的功能和相互關(guān)系。CY3免疫檢測(cè)免疫熒光間接法：如檢查未知抗原，先用已知未標(biāo)記的特異抗...