膜片鉗技術是用于紀錄全細胞或個別細胞膜上離子信道電生理特性的研究方法，目的在于提供基礎研究知識與新藥開發(fā)時研究細胞電特性或小分子藥物對細胞膜上離子信道特性的影響，替開發(fā)標靶藥物提供一個測試平臺。傳統(tǒng)的細胞培養(yǎng)膜片鉗系統(tǒng)由人工操作，實驗人員在取得元代細胞(例如心...

膜片鉗技術是一種記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜上離子通道分子活動的技術。是用來研究單個離體的活細胞、組織切片或細胞膜片離子流的電生理實驗技術。這項技術在可興奮細胞如神經(jīng)元、心肌細胞、肌纖維和胰腺細胞的研究中起至關重要的作用，也可用于研究特殊制備的巨型球...

膜片鉗只適用于藥物的初篩和二次篩選，且對樣本有很高的選擇性，而傳統(tǒng)的膜片鉗技術可適用于各種樣本，應用范圍廣，能夠分析檢測所有的離子通道類型，同時能夠分析離子通道的動力學特征。因此目前，傳統(tǒng)膜片鉗技術仍然是不可替代的。在進行膜片鉗實驗時，玻璃電極給負壓并吸住細胞...

在體光纖成像記錄對于成像結果的處理，需要依賴專業(yè)的圖像分析軟件，分割出目的信號和背景噪聲，獲得準確的熒光強度值。光學成像方法可分為基于熒光的方法和基于生物發(fā)光的方法。光學相對于設備小且較便宜?；畹奈矬w顯微成像的缺點是它的有創(chuàng)性，因為需要通過手術創(chuàng)造一個窗口來觀...

在體光纖成像記錄熒光素酶的每個催化反應只產(chǎn)生一個光 子 , 通常肉眼無法直接觀察到, 而且光子在強散射性的生物組織中傳輸時, 將會發(fā)生吸收、 散射、 反射、 透射等大量光學行為 。 因此，必須采用高 靈敏度的光學檢測儀器（ 如CCD camera）采集并定量檢...

聚合酶鏈式反應是一種體外迅速擴增DN段的技術，它能以極少量的DNA為模版，在幾小時內(nèi)復制出上百萬份的DNA拷貝。DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據(jù)堿基互補配對原則復制...

傳統(tǒng)成像大多依賴于肉眼可見的身體、生理和代謝過程在疾病狀態(tài)下的變化，而不是了解疾病的特異性分子事件；在體光纖成像記錄則是利用在體光纖成像記錄目標并成像。這種從非特異性成像到特異性成像的變化，為疾病生物學、疾病早期檢測、定性、評估和療于帶來了重大的影響。分子成像...

膜片鉗技術在通道研究中的重要作用：應用膜片鉗技術可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程、區(qū)分離子通道的離子選擇性、同時可發(fā)現(xiàn)新的離子通道及亞型，并能在記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎上進一步計算出細胞膜上的通道數(shù)和開放概率，還可以用以研究某些胞內(nèi)或胞外物...

小動物在體光纖成像記錄可根據(jù)實驗需要通過尾靜脈注射、皮下移植、原位移植等方法接種已標記的細胞或組織。在建模時應認真考慮實驗目的和選擇熒光標記，如標記熒光波長短，則穿透效率不高，建模時不宜接種深部臟器和觀察體內(nèi)轉(zhuǎn)移，但可以觀察皮下瘤和解剖后臟器直接成像。深部臟器...

胎牛血清：八月齡胎牛心臟穿刺取血；新生牛血清：出生12-24小時新生牛靜脈;又可細分為：a.高級新生牛血清：后靜置自然析出的血清;b.標準新生牛血清：c.經(jīng)離心分離的血清;d.普通新生牛血清：融血或微融血的血清；小牛血清：出生三月齡小牛動脈分離血清；血清是血漿...

光纖成像技術具有損耗低、成本低等優(yōu)勢，因此，光纖成像技術較多應用于生物醫(yī)學、激光技術等領域。早期的光纖成像系統(tǒng)采用多根單模光纖組成的光纖束收集圖像，每一根單模光纖用于收集一個像素點的圖像。包含較多的單模光纖，導致光纖束的直徑較大，因此，為了提高光纖成像系統(tǒng)的微...

膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：1.內(nèi)面向外式膜片細胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控,既能較容易地改變細胞內(nèi)的離子或物質(zhì)濃度,又能把酶等直接加于膜的內(nèi)側(cè)面,適宜研究胞內(nèi)物質(zhì)對通道活動的影響。但實驗中難以改變膜外側(cè)物質(zhì),且需浸于低鈣液中。常用于研究依賴細胞內(nèi)鈣的離子通道,如鈣...

聚合酶鏈式反應的試驗污染：實驗室中克隆質(zhì)粒的污染：在分子生物學實驗室及某些用克隆質(zhì)粒做陽性對照的檢驗室，這個問題也比較常見。因為克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)含量相當高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細胞內(nèi)的質(zhì)粒，由于活細胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的...

不同產(chǎn)地的胎牛血清，品質(zhì)也是相差甚遠。值得注意的是，胎牛血清是動物源生物制品，我國對于動物源制品的進口一直有很嚴格的規(guī)定，目前我國批準進口的胎牛血清來源是澳大利亞、新西蘭和烏拉圭，合法正規(guī)途徑進口的胎牛血清必須在產(chǎn)品包裝上標注血源地。這意味著，其他血源地的胎牛...

膜片鉗技術的基本原理和方法：膜片鉗使用的基本方法是，把經(jīng)過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下，與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接，導致電極內(nèi)膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來，由于電性能隔離與微電極的相對低電阻（1～5MΩ）只要對微電極施以電壓就能...

胎牛血清參與細胞培養(yǎng)實驗為細胞生長提供必要的營養(yǎng)成分，對于研究細胞的科學人士來說，血清都不會陌生，其中胎牛血清是實驗操作的常客。一般而言，胎牛血清是指懷孕5-8個月的母牛被屠宰后，發(fā)育未完全的胎牛心臟穿刺后，通過一系列工藝處理獲得。此時胎牛血中含有特殊的生長發(fā)...

血清的保存應該注意：熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已完全解凍的血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻，此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活，除非必須，一般不建議作此熱處理，因為熱處理會造成血清沉淀物明顯增多，而且還會影響血清的質(zhì)量，補體參與反...

在體光纖成像記錄的目的是實時檢測細胞的活性變化。基于鈣離子濃度變化的熒光成像技術被較多用來記錄神經(jīng)元活性。在體光纖記錄方法與傳統(tǒng)的在體電生理記錄方法有著不同的特點，光纖記錄因其穩(wěn)定、方便、易上手而應用較多。首先，將熒光蛋白表達在特定類型的神經(jīng)元中，光纖記錄可以...

聚合酶鏈式反應的試驗污染：實驗室中克隆質(zhì)粒的污染：在分子生物學實驗室及某些用克隆質(zhì)粒做陽性對照的檢驗室，這個問題也比較常見。因為克隆質(zhì)粒在單位容積內(nèi)含量相當高，另外在純化過程中需用較多的用具及試劑，而且在活細胞內(nèi)的質(zhì)粒，由于活細胞的生長繁殖的簡便性及具有很強的...

在體光纖成像記錄對于成像結果的處理，需要依賴專業(yè)的圖像分析軟件，分割出目的信號和背景噪聲，獲得準確的熒光強度值。光學成像方法可分為基于熒光的方法和基于生物發(fā)光的方法。光學相對于設備小且較便宜?；畹奈矬w顯微成像的缺點是它的有創(chuàng)性，因為需要通過手術創(chuàng)造一個窗口來觀...

膜片鉗技術與其他生物檢測技術的結合應用：1.膜片鉗與光學顯微成像技術結合應用：利用激光掃描共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、熒光顯微鏡等技術可以對細胞進行實時成像研究，將膜片鉗技術與光學顯微成像技術結合使用不但可以檢測細胞的電流變化情況，而且還可以對細胞的電信號傳遞...

膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理：穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規(guī)全細胞模式的胞質(zhì)滲漏問題,有學者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經(jīng)微電極灌流到含有類甾醇的細胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導電性孔道,借此對全細胞膜電流進...

膜片鉗技術的基本原理和方法：膜片鉗技術是在電壓鉗技術基礎上發(fā)展起來的，電壓鉗是利用負反饋技術將膜電位在空間和時間上固定于某一測定值，以研究動作電位產(chǎn)生過程中膜的離子通透性與膜電位之間的依從關系。但電壓鉗只能研究一個細胞上眾多通道的綜合活動規(guī)律，而無法反映單個通...

在體光纖成像記錄可見光成像體內(nèi)可見光成像包括生物發(fā)光與熒光兩種技術。生物發(fā)光是用熒光素酶基因標記DNA，利用其產(chǎn)生的蛋白酶與相應底物發(fā)生生化反應產(chǎn)生生物體內(nèi)的光信號；而熒光技術則采用熒光報告基因（GFP、RFP）或熒光染料（包括熒光量子點）等新型納米標記材料進...

在體光纖成像記錄，指的是利用光學的探測手段結合光學探測分子對細胞或者組織甚至生物體進行成像，來獲得其中的生物學信息的方法。傳統(tǒng)的動物實驗方法需要在不同的時間點處死實驗動物，以獲得多個時間點的實驗數(shù)據(jù)。而在體光纖成像記錄則可以對同一觀察目標進行連續(xù)的查看并記錄其...

聚合酶鏈反應的常見問題分析與解決方法：PCR產(chǎn)物量過少：退火溫度不合適。以2度為梯度設計梯度PCR反應優(yōu)化退火溫度。DNA模板量太少。增加DNA模板量。PCR循環(huán)數(shù)不足。增加反應循環(huán)數(shù)。引物量不足。增加體系中引物含量。延伸時間太短。以1 kb/min的原則設置...

一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法：為了測量在不同藥物對細胞中的離子通道的影響，通常需要在膜片鉗實驗中實施灌流。例如，需要檢驗某種是否對某種離子通道的影響，則需要在細胞封接后記錄電流數(shù)據(jù)，然后通過在細胞周圍快速給藥再次記錄電流數(shù)據(jù)即可對比數(shù)據(jù)判斷該對離子通道的...

聚合酶鏈式反應PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR由變性-退火-延伸三個基本反應步驟構成：模板DNA的變性：模板DNA經(jīng)加熱至93℃左右一定時間后，使模板DNA雙鏈或經(jīng)PCR擴增形成的雙鏈DNA解...

很好的胎牛血清：微生物，包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原毒等。隨著國內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高，細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制，支原體經(jīng)過0.1μm過濾，大多也能消除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴重的，主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入，又無法...

在體光纖成像記錄成像原理熒光物質(zhì)被激發(fā)后所發(fā)射的熒光信號的強度在一定的范圍內(nèi)與熒光素的量成線性關系。熒光信號激發(fā)系統(tǒng)（激發(fā)光源、光路傳輸組件）、熒光信號收集組件、信號檢測以及放大系統(tǒng)。發(fā)射的熒光信號的波長范圍一般在可見到紅外區(qū)域的居多。因為光的波長越長對組織的...