血清的保存應(yīng)該注意：熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已完全解凍的血清。加熱過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻，此熱處理的目的是使血清中的補(bǔ)體成分(complement)滅活，除非必須，一般不建議作此熱處理，因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成血清沉淀物明顯增多，而且還會(huì)影響血清的質(zhì)量，補(bǔ)體參與反...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的試驗(yàn)污染：陽(yáng)性對(duì)照：在建立PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)室及一般的檢驗(yàn)單位都應(yīng)設(shè)有PCR陽(yáng)性對(duì)照，它是PCR反應(yīng)是否成功、產(chǎn)物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個(gè)重要的參考標(biāo)志。陽(yáng)性對(duì)照要選擇擴(kuò)增度中等、重復(fù)性好，經(jīng)各種鑒定是該產(chǎn)物的標(biāo)本，如以重組質(zhì)粒為陽(yáng)性對(duì)...

聚合酶鏈反應(yīng)：流聚合酶鏈反應(yīng):一種偽等溫PCR方法。將溶液置于熱梯度下，而不是反復(fù)加熱和冷卻聚合酶鏈反應(yīng)混合物。由此產(chǎn)生的熱不穩(wěn)定性驅(qū)動(dòng)對(duì)流流動(dòng)自動(dòng)將聚合酶鏈反應(yīng)試劑從熱區(qū)域和冷區(qū)域打亂，從而反復(fù)啟動(dòng)聚合酶鏈反應(yīng)。通過(guò)利用混沌流場(chǎng)的出現(xiàn)，可以?xún)?yōu)化熱邊界條件和P...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的特點(diǎn)：靈敏度高：PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的，能將皮克(pg=10-12）量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克（μg=-6）水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞；在病毒的檢測(cè)中，PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位）；在細(xì)菌學(xué)中很小檢...

胎牛血清和新生牛血清的區(qū)別是什么？取血年齡不同：牛血清按照牛取血時(shí)間或牛齡可進(jìn)行區(qū)分。胎牛血清指的是取自未出生，母牛剖腹得來(lái)的胎牛。國(guó)產(chǎn)胎牛血清（并無(wú)明確定義，但通常以此稱(chēng)）的指的是出生4-6小時(shí)，且未進(jìn)行哺乳進(jìn)食的牛，有時(shí)還稱(chēng)作國(guó)產(chǎn)新生牛。 新生牛血清指的是...

聚合酶鏈反應(yīng)：流聚合酶鏈反應(yīng):一種偽等溫PCR方法。將溶液置于熱梯度下，而不是反復(fù)加熱和冷卻聚合酶鏈反應(yīng)混合物。由此產(chǎn)生的熱不穩(wěn)定性驅(qū)動(dòng)對(duì)流流動(dòng)自動(dòng)將聚合酶鏈反應(yīng)試劑從熱區(qū)域和冷區(qū)域打亂，從而反復(fù)啟動(dòng)聚合酶鏈反應(yīng)。通過(guò)利用混沌流場(chǎng)的出現(xiàn)，可以?xún)?yōu)化熱邊界條件和P...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：三步：變性：模板DNA加熱變性；復(fù)性，引物與它的靶序列發(fā)生退火，引物DNA量多，使引物和模板在局部形成雜交鏈；延伸，4種dNTP 與 Mg2+ 存在的條件下，DNA合成酶催化以引物為起始點(diǎn)，按5'-3'方向進(jìn)行延伸。上面三步為一個(gè)循環(huán)，可使拷貝...

血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應(yīng)被，血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周?chē)龀鲋S色透明液體即為血清，也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過(guò)程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無(wú)纖維蛋白原，這一點(diǎn)...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的常見(jiàn)問(wèn)題：靶序列或擴(kuò)增產(chǎn)物的交叉污染：這種污染有兩種原因：一是整個(gè)基因組或大片段的交叉污染，導(dǎo)致假陽(yáng)性。這種假陽(yáng)性可用以下方法解決：操作時(shí)應(yīng)小心輕柔，防止將靶序列吸入加樣內(nèi)或?yàn)R出離心管外。除酶及不能耐高溫的物質(zhì)外，所有試劑或器材均應(yīng)高壓消毒。所...

聚合酶鏈反應(yīng)同時(shí)擴(kuò)增單個(gè)精子中幾個(gè)基因座的能力]增強(qiáng)了極大地增強(qiáng)了通過(guò)研究減數(shù)分裂后染色體交叉來(lái)進(jìn)行基因定位的傳統(tǒng)任務(wù)。通過(guò)分析數(shù)千個(gè)單個(gè)精子，已經(jīng)直接觀察到非常緊密基因座之間罕見(jiàn)的交叉事件。類(lèi)似地，可以分析異常的缺失、插入、易位或倒位，所有這些都無(wú)需等待(或...

未經(jīng)檢疫的胎牛血清可能攜帶傳染性物質(zhì)，一旦流入境內(nèi)，將會(huì)對(duì)人民**的生命健康造成重大威脅，如可能帶有瘋牛病病毒、牛病毒性腹瀉病毒、牛細(xì)小病毒、狂犬病毒或其他傳染性物質(zhì)，具有極高的檢疫風(fēng)險(xiǎn)。此外，不合格的血清對(duì)實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性、穩(wěn)定性和真實(shí)性也會(huì)造成嚴(yán)重影響。無(wú)合格...

聚合酶鏈反應(yīng)：嵌套聚合酶鏈反應(yīng):通過(guò)減少DNA非特異性擴(kuò)增的背景，提高DNA擴(kuò)增的特異性。兩組引物用于兩個(gè)連續(xù)的PCR。在個(gè)反應(yīng)中，一對(duì)引物用于產(chǎn)生DNA產(chǎn)物，除了預(yù)期的靶之外，該產(chǎn)物可能仍然由非特異性擴(kuò)增的DN段組成。然后用一組引物將產(chǎn)物用于第二次聚合酶鏈反...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于放大擴(kuò)增特定的DN段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制，PCR的很大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加?；蚬こ蹋荷锊牧稀猰RNA，將mRNA反轉(zhuǎn)錄后成為cDNA（互補(bǔ)DNA），通過(guò)PCR擴(kuò)增。這里不是信使R...

國(guó)際上流行的【血清融化三步法】可較為大限度地保存血清中因子的活性，不會(huì)產(chǎn)生沉淀，同時(shí)能縮短血清融化時(shí)間。關(guān)于胎牛血清的滅活：真正的胎牛血清因?yàn)樘ヅ](méi)有形成有效補(bǔ)體，如果針對(duì)補(bǔ)體滅活的話(huà)，就不需要。其他情況根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)來(lái)決定。胎牛血清的濃度：胎牛血清通常是以2%...

如何解凍血清？血清解凍需采用逐步解凍法：將血清從-20℃冰箱放入4℃冰箱中溶解，然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過(guò)程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡），減少沉淀生成。切勿直接將血清從-20℃轉(zhuǎn)入37℃解凍，這樣因溫差較大易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)并出現(xiàn)沉淀。...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)又稱(chēng)多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)利用DNA雙鏈復(fù)制的原理，在生物體外復(fù)制特定DN段的核酸合成技術(shù)。透過(guò)這項(xiàng)技術(shù)，可在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因，而不必依賴(lài)大腸桿菌或酵母菌等生物體。聚合酶鏈反應(yīng)是是一種簡(jiǎn)單，廉價(jià)和可靠的方法復(fù)制DN段，這個(gè)概念適用于現(xiàn)物學(xué)...

血清，指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原及某些凝血因子后分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白原已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、提供和各種生長(zhǎng)因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和生長(zhǎng)因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。血清指血漿...

聚合酶鏈反應(yīng)的常見(jiàn)問(wèn)題分析與解決方法：反應(yīng)緩沖液未完全融化或未充分混勻。確保反應(yīng)緩沖液融化完全并徹底混勻。引物特異性差。利用BLAST檢查引物特異性或重新設(shè)計(jì)引物。引物量過(guò)多。減少反應(yīng)體系中引物的用量。模板量過(guò)多。質(zhì)粒DNA的用量應(yīng)

胎牛血清與其它牛血清有何區(qū)別？根據(jù)牛出生時(shí)間和血清采集分離方法分為：胎牛血清：胎牛血清是指懷孕3-8個(gè)月的母牛被屠宰后，發(fā)育未完全的胎牛心臟密閉穿刺后，通過(guò)一系列工藝處理較為終獲得。此時(shí)胎牛血中含有特殊的生長(zhǎng)發(fā)育因子，一旦胚胎發(fā)育完全這些因子會(huì)自動(dòng)消失。新生牛...

那么如何保障胎牛血清的品質(zhì)呢：內(nèi)有毒的，內(nèi)有毒的含量越低的血清，胎牛血清級(jí)別就越高：內(nèi)有毒的≤10EU/ml時(shí)，此血清為特級(jí)胎牛血清；10EU/ml＜內(nèi)有毒的≤ 25EU/ml時(shí)，此血清為優(yōu)級(jí)胎牛血清；內(nèi)有毒的≥ 25EU/ml時(shí)，此血清為標(biāo)準(zhǔn)級(jí)胎牛血清；應(yīng)選...

血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)...

血清的主要作用：提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類(lèi)物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。提供和各種生長(zhǎng)因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)（氫化可的松、）、類(lèi)固醇（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等。提供結(jié)...

添加胎牛血清的時(shí)候要注意避免把沉淀加入培養(yǎng)液，因?yàn)槿绻囵B(yǎng)液有沉淀的存在，會(huì)使得其中培養(yǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生大量的黑點(diǎn)，除此之外，細(xì)胞的表面還很可能會(huì)覆蓋一層油狀物質(zhì)，總之出現(xiàn)這樣的情況會(huì)極其不利于細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。那么為了較為大程度減少血清的損失，可以把所有有沉淀的血清...

聚合酶鏈反應(yīng)同時(shí)擴(kuò)增單個(gè)精子中幾個(gè)基因座的能力]增強(qiáng)了極大地增強(qiáng)了通過(guò)研究減數(shù)分裂后染色體交叉來(lái)進(jìn)行基因定位的傳統(tǒng)任務(wù)。通過(guò)分析數(shù)千個(gè)單個(gè)精子，已經(jīng)直接觀察到非常緊密基因座之間罕見(jiàn)的交叉事件。類(lèi)似地，可以分析異常的缺失、插入、易位或倒位，所有這些都無(wú)需等待(或...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)準(zhǔn)備：引物內(nèi)部不應(yīng)出現(xiàn)互補(bǔ)序列。兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其是避免3 ′端的互補(bǔ)重疊。引物與非特異擴(kuò)增區(qū)的序列的同源性不要超過(guò)70%，引物3′末端連續(xù)8個(gè)堿基在待擴(kuò)增區(qū)以外不能有完全互補(bǔ)序列，否則易導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增。引物3‘端的堿基，特別是...

血清的保存應(yīng)該注意：血清中的沉淀物、絮狀物：主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會(huì)影響血清本身的質(zhì)量，可用離心3000rpm，5分鐘去除，也可不用處理，顯微鏡下"小黑點(diǎn)"。經(jīng)過(guò)熱處理過(guò)的血清，沉淀物的形成會(huì)明顯增多。有些沉淀物在顯微...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)的常見(jiàn)問(wèn)題：出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增帶：PCR擴(kuò)增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計(jì)的大小不一致，或大或小，或者同時(shí)出現(xiàn)特異性擴(kuò)增帶 與非特異性擴(kuò)增帶。非特異性條帶的出現(xiàn)，其原因：一是引物與靶序列不完全互補(bǔ)、或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+離子濃度過(guò)高、退火溫度過(guò)低，...

聚合酶鏈反應(yīng)的常見(jiàn)問(wèn)題分析與解決方法：無(wú)擴(kuò)增條帶：酶失活或在反應(yīng)體系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或運(yùn)輸不當(dāng)而失活，往往通過(guò)更換新酶或用另一來(lái)源的酶以獲得滿(mǎn)意的結(jié)果。模板含有雜質(zhì)。特別是對(duì)甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成DNA脫嘌呤而影響PCR的...

如何挑選適合細(xì)胞生長(zhǎng)的血清？原代或是正常細(xì)胞株建議使用BI特級(jí)胎牛血清，對(duì)生長(zhǎng)條件要求高的細(xì)胞和干細(xì)胞可選用所用特級(jí)胎牛血清，或胚胎干細(xì)胞所用胎牛血清。由于血清有批間差異，細(xì)胞種類(lèi)不同，我們建議客戶(hù)購(gòu)買(mǎi)前可先申請(qǐng)?jiān)囉脴悠?，通過(guò)篩選得到滿(mǎn)意的血清批號(hào)，之后根據(jù)項(xiàng)...

膜片鉗技術(shù)——打開(kāi)細(xì)胞電生理之門(mén)：定義：膜片鉗技術(shù)被稱(chēng)為研究離子通道的“金標(biāo)準(zhǔn)”，是一種基于電工學(xué)和電化學(xué)原理的分析手段，可以通過(guò)檢測(cè)細(xì)胞的電信號(hào)(電生理性質(zhì))來(lái)研究化學(xué)物質(zhì)、電、機(jī)械力等刺激因素對(duì)細(xì)胞功能的影響，從而幫助揭示細(xì)胞在生命活動(dòng)中的化學(xué)和生物學(xué)機(jī)制...