胎牛血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用：1.提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長的Hormone，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等，能結(jié)合或調(diào)節(jié)它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。3.有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有...

Real-time PCR原理：基于探針的化學(xué)法，Real-time PCR應(yīng)用一個(gè)或多個(gè)熒光標(biāo)記的寡核苷酸探針檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；依賴熒光能量共振傳遞（FRET）檢測(cè)特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，單單檢測(cè)特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，DNA及RNA定量；基因表達(dá)驗(yàn)證；等位基因鑒別；SN...

胎牛血清：胎牛血清是通過母牛剖腹產(chǎn)胎牛心臟密閉穿刺采的血獲得的新鮮胎牛全血，經(jīng)自然層析、離心后收集得到去除血細(xì)胞、纖維蛋白等成分的淡黃色透明上清液體，后經(jīng)生產(chǎn)使用多級(jí)高置流膜過濾技術(shù)和三級(jí)0.1μm終端微濾方法處理后，常用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)...

Real-time PCR原理：基于探針的化學(xué)法，Real-time PCR應(yīng)用一個(gè)或多個(gè)熒光標(biāo)記的寡核苷酸探針檢測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；依賴熒光能量共振傳遞（FRET）檢測(cè)特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，單單檢測(cè)特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，DNA及RNA定量；基因表達(dá)驗(yàn)證；等位基因鑒別；SN...

胎牛血清的處理方法主要有以下幾種：1.活性炭處理，活性炭可以與親脂性分子結(jié)合，因此已用于從FBS中去除Hormone，例如雄雌二醇、孕酮、皮質(zhì)醇、睪酮、三碘甲狀腺原氨酸(T3)和甲狀腺素(T4)。這些血清脂質(zhì)Hormone傾向于干擾免疫測(cè)定系統(tǒng)和胰島素測(cè)定方法...

實(shí)時(shí)熒光定量PCR：實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：Ct...

為了便于對(duì)所檢測(cè)樣本進(jìn)行比較，在real-timeQ-PCR反應(yīng)的指數(shù)期，首先需設(shè)定一定熒光信號(hào)的域值，一般這個(gè)域值（threshold）是以PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為熒光本底信號(hào)（baseline），熒光域值的缺省設(shè)置是3～15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的...

胎牛血清有必要做熱滅活嗎?實(shí)驗(yàn)證明，經(jīng)過正確處理的熱滅活胎牛血清，對(duì)于大多數(shù)的細(xì)胞而言都是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或完全沒有任何作用，甚至可能因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，從而造成細(xì)胞生長速率的降低。經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成...

Real-time PCR：實(shí)時(shí)熒光定量PCR是目前確定樣品中DNA(或cDNA)拷貝數(shù)較敏感、較準(zhǔn)確的方法。如果用于RNA檢測(cè)，這被稱為逆轉(zhuǎn)錄實(shí)時(shí)PCR即（Real-timeRT-PCR）是實(shí)時(shí)PCR法，它是指對(duì)DNA或經(jīng)過反轉(zhuǎn)入（RT-PCR）的RNA通過...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)又稱多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，是一項(xiàng)利用DNA雙鏈復(fù)制的原理，在生物體外復(fù)制特定DN段的核酸合成技術(shù)。透過這項(xiàng)技術(shù)，可在短時(shí)間內(nèi)大量擴(kuò)增目的基因，而不必依賴大腸桿菌或酵母菌等生物體。聚合酶鏈反應(yīng)是是一種簡單，廉價(jià)和可靠的方法復(fù)制DN段，這個(gè)概念適用于現(xiàn)物學(xué)...

如何儲(chǔ)存和解凍血清才不會(huì)使產(chǎn)品質(zhì)量受損?未拆封的血清，一般情況下應(yīng)存放于-10℃至-20℃，在產(chǎn)品規(guī)定的效期內(nèi)均可使用，若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清至合適大小的無菌離心管內(nèi)，再放回冷凍。將血清從冷凍冰箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：因?yàn)镻CR擴(kuò)增了目的DNA區(qū)域，所以PCR可以用于分析極少量的樣品。這對(duì)于法醫(yī)檢定法，當(dāng)時(shí)只有微量的DNA可作為證據(jù)。聚合酶鏈反應(yīng)也可用于分析古代DNA那已經(jīng)有數(shù)萬年的歷史了。這些基于聚合酶鏈反應(yīng)的技術(shù)已經(jīng)成功地應(yīng)用于動(dòng)物身上，例如四萬年前猛犸...

胎牛血清制備：用止血鉗夾住血管，切開1厘米左右的切口進(jìn)行插管，插好管后打開血管的止血鉗，讓牛血順采的血管流入另一個(gè)潔凈房間內(nèi)的瓶中。采的血瓶采的血前經(jīng)干烤滅菌（180℃2小時(shí)）后，按無菌操作注入10毫升左右經(jīng)高壓滅菌的生理鹽水后加塞封口，于采的血前半小時(shí)放入3...

選購FBS應(yīng)考慮哪些標(biāo)準(zhǔn)？產(chǎn)品檢測(cè)，每款FBS在生產(chǎn)上市之前，必須經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)。質(zhì)控環(huán)節(jié)必不可少，以確保上市的血清符合規(guī)定合乎規(guī)格，而血清產(chǎn)品分析證書（COA）就是FBS質(zhì)控的重要體現(xiàn)。在COA中，常規(guī)的檢測(cè)指標(biāo)包括內(nèi)的毒性、總蛋白、細(xì)菌、病毒等，另外總...

所謂real-timeQ-PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，之后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。在real-time技術(shù)的發(fā)展過程中，兩個(gè)重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用：（1）TaqDNA多聚酶的5′核...

Real-time PCR：1.DNA或RNA的定量分析：Real-time PCR包括病原微生物或病毒含量的檢測(cè),轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物轉(zhuǎn)基因拷貝數(shù)的檢測(cè)，RNAi基因失活率的檢測(cè)等；2.基因表達(dá)差異分析：例如比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異(如藥物處理、物...

Real-time PCR：對(duì)擴(kuò)增技術(shù)的修飾可以從完全未知的基因組中提取片段，或者可以產(chǎn)生感興趣區(qū)域的單鏈。聚合酶鏈反應(yīng)有許多應(yīng)用于傳統(tǒng)的DNA克隆。它可以從更大的基因組中提取片段以插入載體，這可能只有少量可用。使用一組“載體引物”，它還可以分析或提取已經(jīng)插入...

胎牛血清(FBS)是來自胎牛的凝結(jié)血液的液體部分，不含細(xì)胞、纖維蛋白和凝血因子，但含有大量對(duì)細(xì)胞生長至關(guān)重要的營養(yǎng)和大分子因子。牛血清白蛋白是FBS的主要成分。FBS中的生長因子對(duì)于培養(yǎng)細(xì)胞的維持和生長至關(guān)重要。FBS還含有多種小分子，如氨基酸、糖、脂質(zhì)和Ho...

Real-time PCR雙熒光標(biāo)記探針設(shè)計(jì)原則：具體的其他要求可以具體聯(lián)系設(shè)計(jì)公司，拿到合成好的引物，需要先確認(rèn)引物的性能?？梢杂眠@對(duì)引物先擴(kuò)增梯度稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品（標(biāo)準(zhǔn)品介紹見后續(xù)內(nèi)容）。由不同梯度標(biāo)準(zhǔn)品的加量和其對(duì)應(yīng)的Ct值，描繪出一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。這里要注意...

胎牛血清是血液凝固后的液體部分，不含血細(xì)胞、纖維蛋白及凝集因子等，含有多種對(duì)細(xì)胞生長必需的營養(yǎng)因子及大分子物質(zhì)。血清白蛋白是胎牛血清的主要成分。此外，重要的是，胎牛血清中含有大量對(duì)細(xì)胞生長必需的生長因子。胎牛血清也含有一些小分子物質(zhì)，如氨基酸、糖類、脂類及Ho...

胎牛血清融化方法：只要2.5個(gè)小時(shí)，溫和有效地加快了水融化的速度，另一方面，融化過程中可以間斷輕輕搖擺瓶子，讓蛋白在瓶中混勻。此方法不但節(jié)約了時(shí)間，而且較大限度減少了血清沉淀出現(xiàn)的幾率。血清融化過程中，蛋白質(zhì)會(huì)比水先融化。冰塊底部亮亮的細(xì)絲就是融化中的蛋白，血...

Real-time PCR相對(duì)定量中的標(biāo)準(zhǔn)曲線法如何進(jìn)行：主要是相對(duì)定量標(biāo)準(zhǔn)品的制作，一般有三種方法：1、比較復(fù)雜的方法：質(zhì)粒，采用Biotnt提供內(nèi)參基因的特異性Real-time PCRmRNA引物，對(duì)目的基因進(jìn)行Real-time PCR實(shí)驗(yàn)，得到PCR...

胎牛血清有必要做熱滅活嗎?實(shí)驗(yàn)證明，經(jīng)過正確處理的熱滅活胎牛血清，對(duì)于大多數(shù)的細(xì)胞而言都是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對(duì)細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn)，或完全沒有任何作用，甚至可能因?yàn)楦邷靥幚碛绊懥搜宓馁|(zhì)量，從而造成細(xì)胞生長速率的降低。經(jīng)過熱處理的血清，沉淀物的形成...

胎牛血清的作用：胎牛血清提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長的Hormone，胎牛血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。胎牛血清提供結(jié)合蛋白，能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等，胎牛血清能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。有些情況下結(jié)合蛋白...

胎牛血清：胎牛血清是通過母牛剖腹產(chǎn)胎牛心臟密閉穿刺采的血獲得的新鮮胎牛全血，經(jīng)自然層析、離心后收集得到去除血細(xì)胞、纖維蛋白等成分的淡黃色透明上清液體，后經(jīng)生產(chǎn)使用多級(jí)高置流膜過濾技術(shù)和三級(jí)0.1μm終端微濾方法處理后，常用于細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)實(shí)驗(yàn)。胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)...

Real-time PCR操作流程：1、收集樣品。2相關(guān)試劑總RNA提取試劑TREzolReagent(RNA提取試劑),M-MLV（cDNA逆轉(zhuǎn)錄酶）,RNA純化試劑,RealqPCRMasterMix（螢光定量PCR預(yù)混試劑）。3實(shí)驗(yàn)儀器螢光定量PCR儀;...

胎牛血清的處理方法有：熱滅活，F(xiàn)BS的常見處理方法是熱滅活，其中將FBS在56°C的水浴中加熱30分鐘，偶爾搖晃。目的是滅活FBS中存在的補(bǔ)體系統(tǒng)的任何成分，以及其他潛在的未知細(xì)胞生長抑制劑。以前熱滅活也是為了去除支原體污染，這不再是一個(gè)問題，因?yàn)楝F(xiàn)在所有的血...

聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)：因?yàn)镻CR擴(kuò)增了目的DNA區(qū)域，所以PCR可以用于分析極少量的樣品。這對(duì)于法醫(yī)檢定法，當(dāng)時(shí)只有微量的DNA可作為證據(jù)。聚合酶鏈反應(yīng)也可用于分析古代DNA那已經(jīng)有數(shù)萬年的歷史了。這些基于聚合酶鏈反應(yīng)的技術(shù)已經(jīng)成功地應(yīng)用于動(dòng)物身上，例如四萬年前猛犸...

胎牛血清：胎牛血清(FBS)，胎牛血清是一種性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛；新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。1、性狀、外觀淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。2、蛋白質(zhì)含量...

Real-time PCR螢光染料摻入法:在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR螢光染料，SYBR螢光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射螢光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何螢光信號(hào)，從而保證螢光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。此方法適用于：...