細胞復(fù)蘇注意事項1、整個復(fù)蘇過程要盡量快，溶解時間太長可能影響復(fù)蘇效果；2、已溶解的凍存細胞盡量短時間的在常溫存放，盡快稀釋或者離心去除DMSO；3、由于“化冰”這一步里凍存管與水溫差太大，尤其是液氮里拿出來的凍存管，放到水里可能會造成翻江倒海的既視感，所以可以用鑷子夾住凍存管往水里摁，這樣即使有炸裂的情況也會有水做緩沖；4、取凍存管時要謹防，尤其是夏天，盡管熱也比較好穿長袖白大褂；5、離心這一步也可以在凍存管里的冰融化后直接進行，也就是直接把凍存管離心，離心后棄去原來的凍存液，然后直接加完全培養(yǎng)基重懸細胞，接著把細胞轉(zhuǎn)到培養(yǎng)皿/瓶里培養(yǎng)。這種方法也許不能將DMSO去除得很干凈，但...

原代細胞直接來自于組織，因而更貼近地還原了生物系統(tǒng)的生理特性。它們在生命科學(xué)研究、ADME/毒性研究、藥物開發(fā)以及細胞系不能復(fù)制目標(biāo)生物系統(tǒng)的多種應(yīng)用中越來越有用。我們可提供來自PromoCell（在特定地區(qū)提供）和CellApplications,Inc.（CAI）的原代細胞。我們的制造商已完善了100多種原代細胞的分離、純化、繼代培養(yǎng)和生長。細胞具有純凈、低傳代數(shù)、嚴格表征和嚴格質(zhì)量控制的承諾。統(tǒng)一的培養(yǎng)基和試劑可提供比較好性能，確保了您能滿懷信心地將這些細胞及其支持性產(chǎn)品用于自身應(yīng)用。原代細胞哪個好？歡迎咨詢上海中喬新舟生物科技有限公司。浙江巨噬原代細胞中喬新舟 細胞一般儲存在...

貼壁型原代細胞1)原代培養(yǎng)的分離細胞在初次接觸體外環(huán)境時，它們之間會互相影響，在這些細胞之間能產(chǎn)生一些促生長的活性物質(zhì)，使細胞彼此互相促進存活和生長。如果接種的細胞密度過低，細胞之間的促生長作用很小，也很難使細胞適應(yīng)從體內(nèi)的組織環(huán)境到被分散后進入單獨生存環(huán)境的變化過程。如果接種的細胞密度過大，會導(dǎo)致營養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng)不足，代謝廢物積累較快需要經(jīng)常換液和傳代。2）適當(dāng)增大原代培養(yǎng)接種的細胞密度，給培養(yǎng)的細胞提供更多的類似于在體內(nèi)時細胞之間的相互作用，會極大提高原代培養(yǎng)的細胞在體外存活率。待細胞適應(yīng)體外環(huán)境后進行傳代培養(yǎng)時再以較低的密度接種和培養(yǎng)。3）盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養(yǎng)能否成功...

原代細胞顧名思義就是分離培養(yǎng)的離體細胞干細胞顧名思義就是具有自我更新能力和多分化潛能的細胞，不管是離體的還是在體的都可以叫干細胞當(dāng)然一些分離的原代細胞里是存在成體干細胞的，比如骨髓間充質(zhì)干細胞、造血干細胞等。但本質(zhì)上兩者之間沒有必然聯(lián)系，通常用于不同的場合和語境。原代細胞可用來轉(zhuǎn)染siRNA、antisenseRNA、microRNA等200bp以內(nèi)的小分子RNA和DNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細胞。目前，無論國外還是國內(nèi)，原代細胞的核酸轉(zhuǎn)染都是個熱點難題，市場還缺乏真正有效的商品化的原代細胞核酸轉(zhuǎn)染試劑。原代細胞能夠高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細胞，獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對一些寄生...

原代培養(yǎng)即直接從有機體取下細胞、組織或，讓它們在體外維持與生長。原代培養(yǎng)的特點是細胞或組織剛離開機體，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內(nèi)的狀態(tài)，表現(xiàn)出來源組織或細胞的特性，因此用于藥物實驗，尤其是藥物對細胞活動、結(jié)構(gòu)、代謝、有無毒性或殺傷作用等，是極好的工具。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法。組織塊培養(yǎng)法許多實驗室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進行原代培養(yǎng)，因為方法簡單，細胞也較容易生長。尤其是培養(yǎng)心肌，有時還可觀察到心肌組織塊搏動。細胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后，即可進行傳代。設(shè)備材料培養(yǎng)箱、冰箱、超凈工作臺／無菌間、無菌吸管、離心管、酒...

錯誤：原代細胞可以很容易地重新凍存正確做法：通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進細胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代細胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細胞死亡或損傷。錯誤：原代細胞可以無限增殖正確做法：與細胞系不同，原代細胞具有有限的擴增能力。我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移。此外，如果你正在使用一個增值困難的細胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測細胞形態(tài)，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細胞。像原代神經(jīng)元細胞，作為研究神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)生機制、藥物療效的重要實驗對象，不能傳代、分離純度低、培養(yǎng)條件要求高！行話就是“養(yǎng)細胞難、養(yǎng)原代細胞更難、...

常用于組織消化的酶包括胰蛋白酶粗制品、膠原酶、彈性蛋白酶、鏈霉蛋白酶、裂解酶、脫氧核糖核酸酶、透明質(zhì)酸酶。這些酶既可單獨使用，又可聯(lián)合使用。例如彈性蛋白酶與脫氧核糖核酸酶用于Ⅱ型肺泡細胞的分離，膠原酶與裂解酶聯(lián)用，膠原酶與透明質(zhì)酸酶聯(lián)用。還有其他非哺乳動物酶類也可用于初的解離，如胰蛋白酶，一種重組的、來自玉米的胰蛋白酶；TrypLE(Invitrogen)，重組的微生物來源的胰蛋白酶以及Accutase和Accumax(InnovativeCellTechnologies)。因為粗制品常混雜有其他蛋白酶，所以粗制品通常比精制品更有效，而精制品更具有特異性，并且毒性小。胰蛋白酶和鏈霉...

細胞凍存：通常我們不推薦重新凍存原代細胞，因為這可以促進細胞衰老和/或?qū)е鹿δ茏兓?。原代細胞非常敏感，重新凍結(jié)可能導(dǎo)致細胞死亡或損傷。與細胞系不同，原代細胞增殖有限，我們建議盡早使用原代細胞進行實驗以防止遺傳漂移，如果你正在使用一個增殖困難的細胞類型，你應(yīng)該密切監(jiān)測細胞形態(tài)，因為少量混雜的細胞（如成纖維細胞）可能隨著時間的推移，大量生長從而成為主要細胞。正常的原代細胞培養(yǎng)，在無污染的情況下，建議培養(yǎng)基中不加抗體，抗體會影響細胞的某些基因變異從而導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)有差異，所以cellsystems的細胞在分離提取時就考慮到這點，他們不會采用任何抗體去分離和純化的同時，通過酶消化或者離心洗滌的方法讓細胞...

雖然各種組織培養(yǎng)要滿足不同的條件，但有許多因素是大多數(shù)原代培養(yǎng)共同需要的：（1）在取材時需去除脂肪和壞死的組織。（2）為減小對組織的損傷，需用鋒利的器具。（3）適度離心以去除用于解離的酶。（4）由于原代培養(yǎng)組織細胞的存活率很低，故用于原代培養(yǎng)的細胞的密度應(yīng)高于正常的傳代培養(yǎng)的細胞密度。（5）營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基如Ham’sF12比簡單的培養(yǎng)基更可取。如果可以添加血清，胎牛血清比牛或馬的血清更好，細胞成活率更高。特殊細胞類型的分離可能需要選擇性培養(yǎng)基。（6）與成體組織相比，原代培養(yǎng)時用胚胎組織更易分離，細胞更易存活，增殖速度更快。原代細胞哪里便宜？歡迎咨詢上海中喬新舟生物科技有限公司。海南雞胚原代細...

原代細胞培養(yǎng)，也稱初代培養(yǎng)，是從供體取得組織細胞后在體外進行的培養(yǎng)。方法包括組織塊培養(yǎng)法，消化培養(yǎng)法，培養(yǎng)法和懸浮細胞培養(yǎng)法。注意事項：1、組織塊培養(yǎng)法：（1）剛接種后，組織塊粘附不牢固，觀察和轉(zhuǎn)移過程中動作要輕，以防引起液體振蕩，使組織塊漂起（2）培養(yǎng)初期，要注意觀察有無細菌、霉菌污染（3）原代培養(yǎng)要及時觀察，記錄（4）過3-5天，需要換液以除去漂浮組織塊和殘留的血細胞，保證原代細胞正常生長2、消化培養(yǎng)法：某些特殊類型細胞如內(nèi)皮細胞需用特殊的消化手段和步驟進行。3、培養(yǎng)和組織塊培養(yǎng)類似；4、懸浮細胞培養(yǎng)法:注意調(diào)整細胞濃度。原代細胞服務(wù)哪家好？歡迎咨詢上海中喬新舟生物科技有限公司。江蘇雞胚原...

原代細胞體外培養(yǎng)現(xiàn)狀：原代細胞自然生長有兩種方式，錨定依賴或非錨定依賴，這主要取決于它們在體內(nèi)的組織來源：外周血（非錨定依賴）或固體組織部位（錨定依賴）。原代細胞一旦分離后，24-48h內(nèi)需要進行貼壁或起始，開始培養(yǎng)。廣義地說，所有的哺乳動物細胞，無論其類型或來源，都需要在與人類生理條件非常相似的條件下生長。此外，它們還需要一個pH可調(diào)節(jié)的生長環(huán)境，并且培養(yǎng)基中需包含細胞類型特定的營養(yǎng)因子、生長因子、葡萄糖和/或物品。為了確定一種特定細胞類型在低至無血清培養(yǎng)基中正常生長和功能所需的較低條件，相關(guān)研究工作已經(jīng)揭示了生長培養(yǎng)基必須包含的基本成分：胰島素、轉(zhuǎn)鐵蛋白、葡萄糖和各種鹽、維生素...

原代細胞顧名思義就是分離培養(yǎng)的離體細胞干細胞顧名思義就是具有自我更新能力和多分化潛能的細胞，不管是離體的還是在體的都可以叫干細胞當(dāng)然一些分離的原代細胞里是存在成體干細胞的，比如骨髓間充質(zhì)干細胞、造血干細胞等。但本質(zhì)上兩者之間沒有必然聯(lián)系，通常用于不同的場合和語境。原代細胞可用來轉(zhuǎn)染siRNA、antisenseRNA、microRNA等200bp以內(nèi)的小分子RNA和DNA，可轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細胞。目前，無論國外還是國內(nèi)，原代細胞的核酸轉(zhuǎn)染都是個熱點難題，市場還缺乏真正有效的商品化的原代細胞核酸轉(zhuǎn)染試劑。原代細胞能夠高效轉(zhuǎn)染絕大多數(shù)原代細胞，獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對一些寄生...

人或動物體內(nèi)（或胚胎）的組織，將其剪碎至1mm3的組織塊，再采用如下方法進行原代細胞分離培養(yǎng)：一、懸浮細胞的分離方法1、將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉(zhuǎn)至離心管中，1000rpm/分鐘離心5分鐘。2、去掉上清，離心沉淀用無鈣、鎂的PBS清洗后1000rpm/分鐘離心5分鐘。此步重復(fù)兩次。3、用培養(yǎng)基重懸，調(diào)整適當(dāng)細胞濃度后分瓶培養(yǎng)。4、如選用懸液中某種細胞，可采用離心后的細胞分層液收獲目的細胞。二、實體組織材料的分離方法（一）機械分散法1、纖維成分很少的腦組織，部分胚胎組織，用剪刀剪碎至1mm3的組織塊。2、用PBS清洗兩次后①用吸管吹打，分散組織細胞。②或?qū)⒁殉浞旨羲榉稚⒌慕M...

消化培養(yǎng)法它與上述組織塊培養(yǎng)法的主要區(qū)別有2點。一要用酶制劑（常用的是胰蛋白酶）處理組織塊，除去細胞間質(zhì)，使細胞相互分離，形成細胞懸液；二細胞生長方式多為單層(monolayer)。本方法的優(yōu)點在于單層細胞更易攝取營養(yǎng)、排出代謝產(chǎn)物，因此生長較快，可較快地應(yīng)用于實驗研究；缺點是步驟頗為繁瑣，操作不慎易污染。此外，消化處理要恰到好處，不然對細胞會有一定的損傷作用。需要說明及注意的問題（1）用何種酶進行消化可視所培養(yǎng)細胞而定，除胰蛋白酶外，常用1型膠原酶消化睪丸支持細胞、血管平滑肌細胞和內(nèi)皮細胞；用II型膠原酶消化大鼠腺垂體細胞等。（2）如果沒有不銹鋼篩，可用4層紗布代替，但紗布要預(yù)先...

原代細胞與細胞系該如何選？原代細胞生長緩慢，一般認為，原代細胞培養(yǎng)的第1代和傳代到第10代以內(nèi)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細胞的生長會出現(xiàn)停滯，大部分細胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細胞能夠度過“危機”而繼續(xù)傳下去，這些存活的細胞一般能夠傳到40-50代，這種傳代細胞叫做細胞株。當(dāng)細胞傳至50代以后又會出現(xiàn)“危機”，這時有部分細胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в凶兊奶攸c，從而可能無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱為細胞系。細胞系因其容易培養(yǎng)、種類多、產(chǎn)量可觀的優(yōu)點一直是細胞水平研究的優(yōu)先，且價格相對低廉，但細胞系“價廉卻不一定物美”。研究發(fā)現(xiàn)，細胞系在連續(xù)...

原代細胞與細胞系有什么區(qū)別？根據(jù)傳統(tǒng)定義，自組織一次收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney,.(1987)..(NewYork,.)].這類細胞直接從組織分離，生命周期有限，經(jīng)數(shù)次傳代后會逐漸停止生長。原代細胞在有限的生命周期內(nèi)需掌握好細胞的比較大生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性。細胞系是不斷生長、分化的細胞群，因其經(jīng)過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫(yī)療或科研。但實際上，經(jīng)過長時間、連續(xù)的傳代培養(yǎng)后，細胞系隨著代數(shù)的增加，細胞的基因型和表型都有可能發(fā)生改變。需要指出的是，在不同的科研小組中這些術(shù)語的定義會有所不同。許多研究員不用細胞系...

需要說明及注意的問題（1）如果是用培養(yǎng)瓶而不是培養(yǎng)皿，則接種組織塊千培養(yǎng)瓶底壁后，要輕輕地翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，令瓶底在上，蓋好瓶蓋后輕輕置入37°C的CO2培養(yǎng)箱，2~4h后，取出培養(yǎng)瓶，在超凈工作臺內(nèi)打開瓶蓋，仍令組織塊在上方。在組織塊對面瓶壁加入適量上述培養(yǎng)液。然后，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，讓組織塊浸沒于培養(yǎng)液中。蓋好瓶蓋后放回二氧化碳孵箱，繼續(xù)培養(yǎng)。（2）從培養(yǎng)皿表面游離下來的組織塊，棄去即可。（3）如果使用玻璃培養(yǎng)瓶，而不是新的塑料培養(yǎng)瓶，則比較好在玻璃底表面包被大鼠鼠尾膠原，這樣不但有利于組織塊的黏附，而且可使細胞生長得更好。（4）本方法適于各種組織的培養(yǎng)，操作者還可根據(jù)自己的實驗需要和細胞種類加以...

原代細胞的培養(yǎng)與建系細胞的來源多樣，培養(yǎng)方法也各不相同，凡是來源于胚胎、組織部位及外周血，經(jīng)特殊分離方法制備而來的原初培養(yǎng)的細胞稱之為原代細胞。原代細胞經(jīng)分散接種之手段稱為傳代。凡能經(jīng)傳代方式進行再次培養(yǎng)的細胞稱為傳代細胞。若能穩(wěn)定生長傳至10~20代以上的細胞可確立為細胞系。若有條件能開展單細胞克隆、純化，經(jīng)大量擴增后所形成的生物學(xué)特性穩(wěn)定的克隆化細胞群，稱之為細胞株或克隆細胞。此過程稱為細胞的純化或細胞克隆。這些基本技術(shù)是從事細胞培養(yǎng)工作的基礎(chǔ)，只有熟悉和掌握了基本技術(shù),才可能更快捷地學(xué)習(xí)和掌握其他方法,本章重點敘述常用的基本技術(shù)?？壳肮?jié)原代細胞的取材人和動物細胞的取材是原代細胞培養(yǎng)成功的...