現(xiàn)在您知道了如何傳代細(xì)胞，讓我們?cè)賮?lái)看看傳代的一些不同應(yīng)用。前面已經(jīng)提到，人胚胎干細(xì)胞是一類必須傳代的細(xì)胞。它們通常與小鼠成纖維細(xì)胞MEF共培養(yǎng)，后者能提供幫助干細(xì)胞保持其多能性的因子。生長(zhǎng)于飼養(yǎng)細(xì)胞上的干細(xì)胞到了合適的發(fā)育階段時(shí)需挑出來(lái)。可用微型移液管挑出或用玻璃工具輕輕將其刮下然后接種于新的培養(yǎng)液中進(jìn)行擴(kuò)增。有一些細(xì)胞系對(duì)酶消化敏感，或者貼壁很緊無(wú)法使用胰酶處理來(lái)重懸。細(xì)胞刮常用來(lái)輕輕將細(xì)胞從培養(yǎng)板的底部刮下來(lái)。如果細(xì)胞貼壁特別緊，可加入培養(yǎng)液或適當(dāng)溶液后用血清吸管用力刮擦。使用該方法時(shí)要小心，細(xì)胞比較脆弱，容易在這種機(jī)械剝離的方法中受損。為了更快并可重復(fù)性的大量擴(kuò)增細(xì)胞到超過(guò)...

幾種慢性肝病(CLD)，包括慢性病毒性肝炎、酒精性肝病和非酒精性脂肪肝/非酒精性脂肪性肝炎(NAFLD/NASH)，引起肝細(xì)胞損傷和壞死，進(jìn)而引發(fā)炎癥和以細(xì)胞外基質(zhì)(ECM)積累為特征的傷口愈合反應(yīng)。如果損傷是急性的或自限性的，傷口愈合反應(yīng)會(huì)迅速恢復(fù)正常組織穩(wěn)態(tài)和肝臟結(jié)構(gòu)。然而，如果損傷持續(xù)存在，隨之而來(lái)的慢性炎癥和ECM積累會(huì)超過(guò)肝臟再生的能力，導(dǎo)致纖維化并終導(dǎo)致肝硬化，這是一種預(yù)后不佳的肝臟疾病，也是發(fā)展為肝細(xì)胞(HCC)的主要危險(xiǎn)因素。原代肝細(xì)胞的詳細(xì)介紹。歡迎來(lái)電咨詢上海中喬新舟！北京動(dòng)物原代肝細(xì)胞培養(yǎng)技巧 原代肝細(xì)胞培養(yǎng)越來(lái)越多地用作細(xì)胞和分子生物學(xué)的主要工具，為研究細(xì)胞的...

細(xì)胞傳代常用的儀器和試劑傳代細(xì)胞時(shí)，使用無(wú)菌技術(shù)和合適的試劑及設(shè)備尤為重要。針對(duì)您的細(xì)胞系選擇合適的培養(yǎng)液來(lái)得到比較好的生長(zhǎng)和擴(kuò)增很關(guān)鍵。每一個(gè)細(xì)胞系都有特定的生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)組分配方，但是大多數(shù)細(xì)胞系起碼需要的添加物有以下這些：血清，如胎牛血清，需熱處理滅活其胎牛成分，它為細(xì)胞生長(zhǎng)提供重要的生長(zhǎng)因子。，如青霉素和鏈霉素用于防止細(xì)胞污染。其他的生長(zhǎng)因子，如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子，有助于延長(zhǎng)細(xì)胞系的生長(zhǎng)和擴(kuò)增。不使用時(shí)，要將這些添加物或者“完全”細(xì)胞培養(yǎng)液保存于4攝氏度。首先要注意細(xì)胞培養(yǎng)液的顏色，富含營(yíng)養(yǎng)的新鮮培養(yǎng)液由于添加了pH指示劑酚紅故為透明橙色。當(dāng)細(xì)胞耗盡培養(yǎng)液中的營(yíng)養(yǎng)成分時(shí)，開(kāi)始在培...

小鼠原代肝細(xì)胞的分離與培養(yǎng)詳細(xì)操作步驟，工作液配制：：：10%水合氯醛，三蒸水5ml（4℃保存，）（1L）：16401袋，，NaHCO32g，酸鈉，加青霉素、鏈霉素，3nMinsulin15μl（），1nM1μl（1mM）1000ml水。調(diào)節(jié)PH值至，過(guò)濾除菌。（也可以用DMEM含酸鈉培養(yǎng)基）μg/ml膠原溶液：1μl純乙酸+μl水=（200μl乙酸+），過(guò)濾除菌。在(）。7.肝素2mg/ml:肝素鈉20mg,水10ml。8.灌流夜1:50ml/次：Kreb液50ml,50mMEGTA液。9.灌流夜2:30ml/次：Kreb液30ml，μl，膠原酶I15mg(現(xiàn)用現(xiàn)加)。 原代肝細(xì)...

肝臟的一個(gè)明顯特征是其在受傷后具有突出的再生能力。對(duì)于失去再生能力的晚期肝病，的方法是肝移植。然而，由于短缺，肝移植的實(shí)際應(yīng)用受到限制。在臨床和動(dòng)物模型中，已經(jīng)評(píng)估了原代肝細(xì)胞的移植作為移植的替代方案。具有有效肝臟再增殖能力的人肝細(xì)胞（HH）對(duì)肝病的需求很大。然而，肝細(xì)胞移植的實(shí)際使用受到供體肝細(xì)胞的有限可用性和體外不能擴(kuò)增原代HH（PHH）的阻礙。已經(jīng)做出一些努力來(lái)揭示肝再生的機(jī)制并將這些發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化為改善HH培養(yǎng)物。據(jù)報(bào)道，含氧或微制造的共培養(yǎng)物可使HHs保持代謝功能數(shù)周;然而，這些細(xì)胞失去了它們的增殖能力。另一項(xiàng)使用高通量篩選的研究發(fā)現(xiàn)，支持HH的小分子在一周內(nèi)擴(kuò)增約10倍。此外...

常見(jiàn)的肝細(xì)胞系有HepG2，Hepa1-6等，HepG2是來(lái)源于一個(gè)15歲白人的肝組織；Hepa1-6來(lái)源于小鼠肝，兩者都屬于永生細(xì)胞系，當(dāng)然也有永生細(xì)胞系具有的通性缺點(diǎn)，如與正常肝臟細(xì)胞相比遺傳物質(zhì)發(fā)生改變，生物學(xué)特性會(huì)隨著細(xì)胞分裂次數(shù)的增加而發(fā)生遷移等。原代細(xì)胞是指從機(jī)體獲取組織細(xì)胞后的培養(yǎng)。由于離體時(shí)間短，因此其能夠保持在體內(nèi)的生物學(xué)特性，與細(xì)胞系相比，是更接近體內(nèi)環(huán)境的研究模型。肝臟是作為機(jī)體“”的代謝，其組成是極其復(fù)雜的，除了肝細(xì)胞，還包含眾多內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞等組分，各類細(xì)胞功能各異并相互交流，共同決定肝臟的代謝表型。因此，當(dāng)我們要研究某一表型究竟是由于肝細(xì)胞自身的變化...

藥物性肝損傷（DILI）是臨床常見(jiàn)的肝損傷類型，是嚴(yán)重的藥物不良反應(yīng)之一。細(xì)胞死亡是DILI的重要特征，藥物可通過(guò)誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和死亡受體等方式凋亡通路，誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡或壞死，誘發(fā)肝損傷。除凋亡和壞死外，DILI過(guò)程中還伴隨著自噬、焦亡和鐵死亡。自噬可以去除受損的蛋白質(zhì)以及細(xì)胞器，是肝細(xì)胞存活的重要機(jī)制，但也可能誘導(dǎo)肝細(xì)胞死亡。焦亡和鐵死亡是近發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞死亡方式，其在DILI中的作用尚未完全闡明。阻斷肝細(xì)胞死亡通路，是DILI的重要手段。水飛薊素、柚皮素、人參皂苷等可以抑制肝細(xì)胞死亡通路，是DILI的潛在藥。針對(duì)不同細(xì)胞死亡方式的機(jī)制和特點(diǎn)，研究改善肝細(xì)胞死亡的藥物對(duì)DILI具有重...

肝臟表面有一薄層致密的結(jié)締組織構(gòu)成的被膜。被膜深入肝內(nèi)形成網(wǎng)狀支架，將肝實(shí)質(zhì)分隔為許多具有相似形態(tài)和相同功能的基本單位，稱為肝小葉。人類肝臟約有50萬(wàn)個(gè)肝小葉。肝小葉呈多角棱柱體，約l毫米×2毫米大小，小葉的中軸貫穿一條靜脈，為靜脈。肝細(xì)胞以靜脈為中心呈放射狀排列，形成肝細(xì)胞索。肝細(xì)胞索相互吻合成網(wǎng)，網(wǎng)眼間有竇狀隙和血竇。肝細(xì)胞間的管狀間隙形成毛細(xì)膽管。因此可以說(shuō)，肝小葉是由肝細(xì)胞、毛細(xì)膽管、血竇和相當(dāng)于毛細(xì)淋巴管的竇周隙(狄氏間隙)所組成。上海中喬新舟 原代肝細(xì)胞安心售后。歡迎來(lái)電咨詢上海中喬新舟！青海小鼠肝細(xì)胞 CD-1原代肝細(xì)胞系 細(xì)胞傳代常用的儀器和試劑傳代細(xì)胞時(shí)，使用無(wú)菌技...

肝臟是人體“的”代謝，與、、糖尿病等代謝性疾病密切相關(guān)。肝細(xì)胞在肝臟參與的各種代謝過(guò)程中發(fā)揮了主要作用。肝細(xì)胞是實(shí)質(zhì)細(xì)胞，在肝臟中的比例多；此外實(shí)質(zhì)細(xì)胞還包括少量的膽管內(nèi)皮細(xì)胞。而非實(shí)質(zhì)細(xì)胞則包括星狀細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，NK細(xì)胞，成纖維細(xì)胞等，只占整個(gè)肝臟細(xì)胞的20%左右。原代肝細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)：①原代肝細(xì)胞由于離體時(shí)間短，因此其能夠保持在體內(nèi)的生物學(xué)特性，是更接近體內(nèi)環(huán)境的研究模型。②原代肝細(xì)胞能夠避免體內(nèi)實(shí)驗(yàn)時(shí)肝臟其他細(xì)胞對(duì)肝細(xì)胞的影響，從而得出更加準(zhǔn)確的研究結(jié)果。③原代細(xì)胞相比體內(nèi)實(shí)驗(yàn)具有更好的可控性。 原代肝細(xì)胞去哪找？上海中喬新舟告訴您。江蘇原代肝細(xì)胞可以存活多久結(jié)合國(guó)內(nèi)外小鼠原代肝細(xì)胞分...

肝臟原位灌注法：（為分離肝細(xì)胞的經(jīng)典方法）1，在38度-39度的水浴槽中預(yù)熱hepes緩沖液和膠原酶液，使其在肝內(nèi)達(dá)到37度。2，給大鼠（180-200g）腹腔注射巴比妥鈉100ul/100g，從古靜脈注射肝素1000u，打開(kāi)腹腔，在門(mén)靜脈的肝外5mm處松松的放一個(gè)結(jié)扎線環(huán)，將血管套管插入至肝掌，結(jié)扎，快速切開(kāi)肝下血管與面壓力過(guò)高，關(guān)注500ml無(wú)鈣hepes緩沖液，流速為30ml/min，數(shù)秒鐘肝臟即變白。3，灌注300ml膠原酶液，流速15ml/min，持續(xù)20min。肝臟腫大。4，切下肝臟。用hepes緩沖液沖洗。切開(kāi)肝纖維囊，收集消化清洗液被并混入100mlleibovit...

然而，這些復(fù)雜的方法無(wú)法進(jìn)行大規(guī)模的實(shí)驗(yàn)，在2D單層培養(yǎng)中維持分化的PHH依然重要。在這方面，近測(cè)試了一組化學(xué)物質(zhì)，而且鑒定了5種補(bǔ)充劑的一個(gè)組合（5C-medium，5C培養(yǎng)基），包括Forskolin（腺苷酸環(huán)化酶抑制劑），SB431542(TGF-β抑制劑)，IWP2（Wnt抑制劑），DAPT(Notch抑制劑)以及LDN193189(BMP抑制劑)，可以維持PHH分化狀態(tài)30天。不同于DMSO處理需要14天，F(xiàn)orskolin可以在72h內(nèi)誘導(dǎo)HepaRG細(xì)胞發(fā)生功能性極化。SB431542和DAPT也被用于在3D培養(yǎng)條件下使肝祖細(xì)胞樣細(xì)胞分化，并用HBV它們。盡管這些發(fā)現(xiàn)...

實(shí)驗(yàn)步驟1麻醉小鼠，酒精消毒，暴露腹腔，帶線縫合針從下腔靜脈下穿過(guò)，打一松松的假結(jié)，從假結(jié)下方的靜脈插入靜脈留置針，將假結(jié)系緊。注意：穿帶線縫合針時(shí)不要扎破血管，打的結(jié)不要包進(jìn)太多肉，否則結(jié)系不緊。靜脈留置針如成功扎進(jìn)血管，里面的針時(shí)會(huì)出現(xiàn)回血現(xiàn)象。2通過(guò)留置針注入肝素1ml后(快速推注)，準(zhǔn)備給予灌流液1，同時(shí)剪開(kāi)肝門(mén)靜脈，灌注時(shí)間3-5min。330ml灌注液2灌流3-6min（灌注時(shí)間很重要，兩次灌注時(shí)嚴(yán)格保持針不要?jiǎng)?，否則容易扎破血管）。翻開(kāi)肝臟取出膽囊。4摘下肝臟放入置于冰上的平皿中，將肝臟轉(zhuǎn)移至細(xì)胞間內(nèi)，放于400目篩網(wǎng)上，用4度預(yù)冷的1640無(wú)血清培養(yǎng)液反復(fù)吹打肝臟，...

實(shí)驗(yàn)步驟1麻醉小鼠，酒精消毒，暴露腹腔，帶線縫合針從下腔靜脈下穿過(guò)，打一松松的假結(jié)，從假結(jié)下方的靜脈插入靜脈留置針，將假結(jié)系緊。注意：穿帶線縫合針時(shí)不要扎破血管，打的結(jié)不要包進(jìn)太多肉，否則結(jié)系不緊。靜脈留置針如成功扎進(jìn)血管，里面的針時(shí)會(huì)出現(xiàn)回血現(xiàn)象。2通過(guò)留置針注入肝素1ml后(快速推注)，準(zhǔn)備給予灌流液1，同時(shí)剪開(kāi)肝門(mén)靜脈，灌注時(shí)間3-5min。330ml灌注液2灌流3-6min（灌注時(shí)間很重要，兩次灌注時(shí)嚴(yán)格保持針不要?jiǎng)樱駝t容易扎破血管）。翻開(kāi)肝臟取出膽囊。4摘下肝臟放入置于冰上的平皿中，將肝臟轉(zhuǎn)移至細(xì)胞間內(nèi)，放于400目篩網(wǎng)上，用4度預(yù)冷的1640無(wú)血清培養(yǎng)液反復(fù)吹打肝臟，...

原代肝細(xì)胞可以懸浮培養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)。一些細(xì)胞自然地懸浮在懸浮液中，而不附著在表面上（例如，來(lái)源于外周血的細(xì)胞）。也有一些細(xì)胞系經(jīng)過(guò)修飾可以在懸浮培養(yǎng)中存活，它們的生長(zhǎng)密度高于粘附條件所允許的密度。對(duì)于依賴貼壁的原代細(xì)胞，貼壁細(xì)胞（例如實(shí)體組織）需要一個(gè)表面才能在體外正常生長(zhǎng)。這些細(xì)胞大多在沒(méi)有涂層的扁平塑料容器中培養(yǎng)，但有時(shí)在微載體上培養(yǎng)，可以用細(xì)胞外基質(zhì)蛋白（如膠原蛋白和層粘連蛋白）包被，以增加粘附特性并提供生長(zhǎng)和分化所需的其他信號(hào)。細(xì)胞培養(yǎng)基由補(bǔ)充了適當(dāng)?shù)纳L(zhǎng)因子和細(xì)胞因子的基礎(chǔ)培養(yǎng)基組成，細(xì)胞在細(xì)胞培養(yǎng)箱中生長(zhǎng)，并維持在適當(dāng)?shù)臏囟群突旌蠚怏w中（對(duì)于哺乳動(dòng)物細(xì)胞，通常為37°C，...

隨著各型肝炎、肝硬化、肝等慢性肝病的發(fā)病率日益升高，體外培養(yǎng)的肝細(xì)胞也被普遍地用千肝病基礎(chǔ)研究中。盡管細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)不斷改進(jìn)和成熟，國(guó)內(nèi)外也先后建立了多株人肝細(xì)胞系，但體外分離和培養(yǎng)人正常肝細(xì)胞仍是非常有價(jià)值的研究材料。一材料與設(shè)備1.設(shè)備與器材超凈工作臺(tái)、離心機(jī)、CO2培養(yǎng)箱、－70℃冰箱、－20℃冰箱。2.無(wú)菌材料大培養(yǎng)皿、青霉素小瓶、50ml離心管、刻度吸管、彎頭吸管、T25培養(yǎng)瓶、手術(shù)剪、刀、鏤、細(xì)胞篩（100目）、消毒用乙醇棉球、流產(chǎn)胚胎、高糖DMEM培養(yǎng)液、胎牛血清、青／鏈霉素、D-Hanks溶液、0.25％胰蛋白酶/0.03%EDTA消化液。原代肝細(xì)胞的定制尺寸。歡迎來(lái)電咨詢上海中...

原代培養(yǎng)：1.取出小鼠后瀝干酒精，放入超凈臺(tái)內(nèi)，固定在泡沫板上。2.用鑷子提起皮膚，用解剖剪剪開(kāi)皮膚一個(gè)橫切口，將皮膚向上撕開(kāi)，然后剪開(kāi)肌肉等，暴露出腹腔，在左側(cè)找到脾臟，用彎頭眼科鑷取出脾臟，置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中。3.用生理鹽水將取出的脾臟清洗多次，并剔除多余無(wú)用的組織。4.將篩網(wǎng)置于平皿中，脾臟置于篩網(wǎng)上，用彎頭鑷鑷住，輕輕在篩網(wǎng)上進(jìn)行碾磨，同時(shí)不停滴加不含血清的培養(yǎng)液沖洗。5.將碾磨好的細(xì)胞懸液吸入至離心管中，離心(1000rpm,5min)，吸去上清（去除血液等）。6.加入10ml培養(yǎng)液，吹打混勻，取樣計(jì)數(shù)。7.將稀釋好的細(xì)胞懸液分裝于培養(yǎng)瓶中，輕輕搖晃混勻，在培養(yǎng)瓶上。面做好...

藥物性肝損傷（DILI）是臨床常見(jiàn)的肝損傷類型，是嚴(yán)重的藥物不良反應(yīng)之一。細(xì)胞死亡是DILI的重要特征，藥物可通過(guò)誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激和死亡受體等方式凋亡通路，誘導(dǎo)肝細(xì)胞凋亡或壞死，誘發(fā)肝損傷。除凋亡和壞死外，DILI過(guò)程中還伴隨著自噬、焦亡和鐵死亡。自噬可以去除受損的蛋白質(zhì)以及細(xì)胞器，是肝細(xì)胞存活的重要機(jī)制，但也可能誘導(dǎo)肝細(xì)胞死亡。焦亡和鐵死亡是近發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞死亡方式，其在DILI中的作用尚未完全闡明。阻斷肝細(xì)胞死亡通路，是DILI的重要手段。水飛薊素、柚皮素、人參皂苷等可以抑制肝細(xì)胞死亡通路，是DILI的潛在藥。針對(duì)不同細(xì)胞死亡方式的機(jī)制和特點(diǎn)，研究改善肝細(xì)胞死亡的藥物對(duì)DILI具有重...

原代肝細(xì)胞培養(yǎng)物可用作置換組織或。利用原代細(xì)胞重建受損組織或替換無(wú)功能的細(xì)胞或組織的研究正在進(jìn)行中。培養(yǎng)技術(shù)和研究正在胚胎和成人干細(xì)胞培養(yǎng)上進(jìn)行。這些細(xì)胞具有分化為許多不同類型的細(xì)胞和的能力。通過(guò)控制這些細(xì)胞的發(fā)育和分化，我們也許能夠多種醫(yī)學(xué)疾病。原代細(xì)胞也已普遍用于3D生物打印應(yīng)用中。干細(xì)胞療法：從骨髓、血液或胚胎中分離出來(lái)的干細(xì)胞涉及原代細(xì)胞培養(yǎng)?；颊咦约旱母杉?xì)胞或來(lái)自供體的干細(xì)胞在體外生長(zhǎng)，以產(chǎn)生足夠的細(xì)胞，這些細(xì)胞可用于再生組織或替代功能缺陷的細(xì)胞。這個(gè)領(lǐng)域正在探索中，以設(shè)計(jì)針對(duì)遺傳疾病、脊髓損傷、退行性疾病和的療法。 上海中喬新舟的 原代肝細(xì)胞教學(xué)質(zhì)量可靠嗎？歡迎來(lái)電咨詢上海中喬...

肝臟是人體“的”代謝，與、、糖尿病等代謝性疾病密切相關(guān)。肝細(xì)胞在肝臟參與的各種代謝過(guò)程中發(fā)揮了主要作用。肝細(xì)胞是實(shí)質(zhì)細(xì)胞，在肝臟中的比例多；此外實(shí)質(zhì)細(xì)胞還包括少量的膽管內(nèi)皮細(xì)胞。而非實(shí)質(zhì)細(xì)胞則包括星狀細(xì)胞，巨噬細(xì)胞，NK細(xì)胞，成纖維細(xì)胞等，只占整個(gè)肝臟細(xì)胞的20%左右。原代肝細(xì)胞的優(yōu)點(diǎn)：①原代肝細(xì)胞由于離體時(shí)間短，因此其能夠保持在體內(nèi)的生物學(xué)特性，是更接近體內(nèi)環(huán)境的研究模型。②原代肝細(xì)胞能夠避免體內(nèi)實(shí)驗(yàn)時(shí)肝臟其他細(xì)胞對(duì)肝細(xì)胞的影響，從而得出更加準(zhǔn)確的研究結(jié)果。③原代細(xì)胞相比體內(nèi)實(shí)驗(yàn)具有更好的可控性。 原代肝細(xì)胞的價(jià)格分析。歡迎來(lái)電咨詢上海中喬新舟！上海火雞Turkey Hepatocyte...

原代肝細(xì)胞屬于高度分化的細(xì)胞，對(duì)體外培養(yǎng)條件的要求比傳代細(xì)胞高，其在體外存活時(shí)間也比傳代細(xì)胞短，采用單層膠原培養(yǎng)法進(jìn)行體外培養(yǎng)的原代肝細(xì)胞存活時(shí)間為1周左右[25]。本實(shí)驗(yàn)是在Seglen兩步灌流法的基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)，結(jié)合逆向灌流、多次低速離心等方法成功分離獲取活率高、純度高的原代肝細(xì)胞，且體外存活時(shí)間可達(dá)1周，與文獻(xiàn)[25]報(bào)道一致。體外培養(yǎng)48h后給予不同濃度的FFA混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)進(jìn)行誘導(dǎo)，誘導(dǎo)24h后油紅O染色顯示肝細(xì)胞內(nèi)有脂滴沉積，肝細(xì)胞內(nèi)TG含量增加，且隨著FFA濃度升高而增加，成功構(gòu)建了肝脂肪變性細(xì)胞模型。本方法操作簡(jiǎn)單、時(shí)間短、成功率高，因此具有廣泛應(yīng)用價(jià)值。原代肝...

在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)原代分離實(shí)驗(yàn)得到的原代細(xì)胞，與永生化的細(xì)胞系相比，能夠忠實(shí)模擬體內(nèi)生理狀態(tài)和功能，屬于“高階”的細(xì)胞模型，但是獲得高純度的原代細(xì)胞是一個(gè)非常艱巨的過(guò)程，科學(xué)合理的原代細(xì)胞提取和培養(yǎng)方法對(duì)于任何實(shí)驗(yàn)室都是一筆不可多得的財(cái)富。上次小編整理了脂肪原代細(xì)胞提取的教程，得到了大家的一致好評(píng)。應(yīng)廣大讀者要求，小編快馬加鞭“肝”出了小鼠原代肝細(xì)胞的提取“密鑰”，趕緊收好~肝臟是人體“”代謝，在包括葡萄糖、蛋白質(zhì)和脂肪等多種物質(zhì)代謝過(guò)程中發(fā)揮重要作用。肝臟參與多種生理病理過(guò)程，與、、糖尿病等代謝性疾病密切相關(guān)。肝臟中的細(xì)胞主要分為實(shí)質(zhì)細(xì)胞和非實(shí)質(zhì)細(xì)胞兩類：實(shí)質(zhì)細(xì)胞的占比達(dá)到整個(gè)肝...

原代肝細(xì)胞的分離與培養(yǎng)采用Seglen門(mén)靜脈兩步灌流法及其改良方法分離小鼠原代肝細(xì)胞，多次低速離心純化肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞，采用單層膠原培養(yǎng)法進(jìn)行體外培養(yǎng)[15-18]。具體操作：雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射1%鈉(50mg/kg)麻醉后，浸泡于75%乙醇中消毒1～2min，在無(wú)菌條件下(超凈工作臺(tái)中)剪開(kāi)腹部并暴露下腔靜脈與肝門(mén)靜脈。將靜脈留置針插入下腔靜脈后，迅速剪斷肝門(mén)靜脈。用無(wú)鈣無(wú)鎂的PBS緩沖液(含EDTA)灌流約50mL，在整個(gè)過(guò)程中，灌流液的灌流速度保持在7～8mL/min，溫度保持在37℃左右。待肝臟血液排出，肝臟變白后，用IV型膠原酶緩沖液()進(jìn)行原位消化，灌注膠原酶時(shí)...

小鼠原代肝細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察本實(shí)驗(yàn)在Seglen兩步灌流法的基礎(chǔ)上改進(jìn)，平均每只小鼠肝臟可獲得3×107～5×107個(gè)細(xì)胞。臺(tái)盼藍(lán)染色結(jié)果顯示，即時(shí)分離的原代肝細(xì)胞活率可達(dá)到85%～90%。即時(shí)分離的原代肝細(xì)胞胞體呈圓形或類圓形，多為單核或雙核，細(xì)胞間邊界清晰(圖1A)。接種后的肝細(xì)胞4h開(kāi)始貼壁，24h大部分肝細(xì)胞貼壁，細(xì)胞形態(tài)多呈多角形或不規(guī)則形，細(xì)胞核大而圓，可見(jiàn)明顯的雙核或多核，細(xì)胞有向外延展趨勢(shì)，細(xì)胞間邊界不清(圖1B)。此外，按上述方法分離出的原代肝細(xì)胞在體外可存活1周左右，其中3～5d狀態(tài)比較好，第6天開(kāi)始細(xì)胞凋亡增加 原代肝細(xì)胞的應(yīng)用范圍十分廣闊。歡迎來(lái)電咨詢上海中喬新舟！內(nèi)...

注意事項(xiàng)1.取材要求新鮮，無(wú)菌，解剖小鼠時(shí)，注意不要損傷脾臟及其周圍的臟器，尤其是腸道等，防止污染脾臟。2.沖洗脾臟時(shí)要盡量洗凈血污，去除無(wú)用組織，并要防止組織干燥。3.碾磨后及時(shí)用清水沖洗篩網(wǎng)，防止組織、細(xì)胞阻塞網(wǎng)孔。4.計(jì)數(shù)前，注意吸盡平皿里的細(xì)胞，充分混勻，使細(xì)胞分散成單個(gè)細(xì)胞。5.實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在操作臺(tái)無(wú)菌區(qū)域內(nèi)進(jìn)行，勿在邊緣非無(wú)菌區(qū)域操作。6.金屬器械不能在火焰中燒的時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，燒過(guò)的金屬鑷要待冷卻后才能挾取組織，以免造成組織損傷。7.另外膠塞過(guò)火焰時(shí)也不能時(shí)間長(zhǎng)，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞。8.吸取過(guò)營(yíng)養(yǎng)液后的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管頭中營(yíng)養(yǎng)液能燒焦形成炭膜...

復(fù)蘇細(xì)胞接收后的處理：1.收到細(xì)胞后，請(qǐng)首先檢查培養(yǎng)瓶是否破損或漏液，培養(yǎng)液是否混濁，如有漏液及培養(yǎng)液混濁情況請(qǐng)立即拍照把圖片發(fā)給我們。2.75%酒精消毒瓶身后放培養(yǎng)箱中靜置4-6h后，在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)并拍照100倍和200倍的照片，若有貼壁細(xì)胞脫落，可收集上清離心，將沉淀用新的培養(yǎng)基接種至新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中。3.建議收到當(dāng)天不要消化處理，如果細(xì)胞長(zhǎng)滿90%，可選擇傳代處理。4.如您收到細(xì)胞3天內(nèi)沒(méi)有反饋相關(guān)問(wèn)題，出現(xiàn)的細(xì)胞問(wèn)題將不提供重發(fā)服務(wù)。上海中喬新舟 原代肝細(xì)胞值得信賴。歡迎來(lái)電咨詢上海中喬新舟！廣東馬肝細(xì)胞原代肝細(xì)胞中喬新舟 肝前體樣細(xì)胞HepLPCs在基礎(chǔ)研究及臨床應(yīng)用方...

實(shí)驗(yàn)步驟1麻醉小鼠，酒精消毒，暴露腹腔，帶線縫合針從下腔靜脈下穿過(guò)，打一松松的假結(jié)，從假結(jié)下方的靜脈插入靜脈留置針，將假結(jié)系緊。注意：穿帶線縫合針時(shí)不要扎破血管，打的結(jié)不要包進(jìn)太多肉，否則結(jié)系不緊。靜脈留置針如成功扎進(jìn)血管，里面的針時(shí)會(huì)出現(xiàn)回血現(xiàn)象。2通過(guò)留置針注入肝素1ml后(快速推注)，準(zhǔn)備給予灌流液1，同時(shí)剪開(kāi)肝門(mén)靜脈，灌注時(shí)間3-5min。330ml灌注液2灌流3-6min（灌注時(shí)間很重要，兩次灌注時(shí)嚴(yán)格保持針不要?jiǎng)?，否則容易扎破血管）。翻開(kāi)肝臟取出膽囊。4摘下肝臟放入置于冰上的平皿中，將肝臟轉(zhuǎn)移至細(xì)胞間內(nèi)，放于400目篩網(wǎng)上，用4度預(yù)冷的1640無(wú)血清培養(yǎng)液反復(fù)吹打肝臟，...

目前，NAFLD動(dòng)物模型和細(xì)胞模型仍然是研究NAFLD發(fā)病機(jī)制及藥物防治的重要手段。動(dòng)物模型雖然能很好地模擬體內(nèi)環(huán)境，但是存在造模周期長(zhǎng)、個(gè)體差異大、實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以控制等問(wèn)題，而細(xì)胞模型個(gè)體差異小、影響因素較少、實(shí)驗(yàn)條件可控性強(qiáng)[8-11]。鑒于細(xì)胞模型能較好地克服動(dòng)物模型的不利因素，因此，建立NAFLD體外細(xì)胞模型對(duì)于研究其發(fā)病機(jī)制，為進(jìn)一步防治NAFLD具有重要的理論意義與普遍的實(shí)用價(jià)值。肝脂肪變性細(xì)胞模型是公認(rèn)的研究NAFLD有效的細(xì)胞模型，目前多采用肝細(xì)胞株HepG2，通過(guò)給予不同比例與濃度的游離脂肪酸(freefattyacids,FFA)混合物(油酸∶棕櫚酸=2∶1)，誘...

生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中常常會(huì)用到細(xì)胞系，因?yàn)樗鼈兛梢钥焖偕L(zhǎng)和擴(kuò)增提供實(shí)驗(yàn)分析要用到的細(xì)胞。細(xì)胞系與新分離的或原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件相類似，但也有一些基本不同的地方：（1）每個(gè)細(xì)胞系需要其特定的生長(zhǎng)因子混合物。（2）與原代細(xì)胞相比，它們的生長(zhǎng)需要更嚴(yán)密的監(jiān)測(cè)，因?yàn)槭顾鼈儫o(wú)限生長(zhǎng)的突變同時(shí)也會(huì)造成它們很快達(dá)到過(guò)度生長(zhǎng)。因此，當(dāng)細(xì)胞系生長(zhǎng)到了幾乎覆蓋整個(gè)培養(yǎng)器皿底部，也就是90%的密度時(shí)，細(xì)胞需要重懸洗滌用于實(shí)驗(yàn)或凍存以備將來(lái)使用，或者重新接種到新的培養(yǎng)器皿進(jìn)一步擴(kuò)增。細(xì)胞傳代或續(xù)代培養(yǎng)是將細(xì)胞從現(xiàn)有的培養(yǎng)物分開(kāi)或分出來(lái)開(kāi)始新的培養(yǎng)，并加入新鮮培養(yǎng)液來(lái)促進(jìn)擴(kuò)增的常用手段。盡管它的概念本身相對(duì)簡(jiǎn)單，...

原代肝細(xì)胞培養(yǎng)越來(lái)越多地用作細(xì)胞和分子生物學(xué)的主要工具，為研究細(xì)胞的正常生理學(xué)和生物化學(xué)（例如，代謝研究、衰老、信號(hào)研究），藥物和有毒化合物的作用提供了出色的模型系統(tǒng)。細(xì)胞以及誘變和致作用。它也可用于藥物篩選以及大規(guī)模開(kāi)發(fā)生物化合物（例如，疫苗、性蛋白質(zhì)）。3D細(xì)胞培養(yǎng)：由于原代細(xì)胞是未轉(zhuǎn)化的且不會(huì)永生化，因此它們緊密模擬了模型，產(chǎn)生了更具生理意義的結(jié)果，可用于模擬3D組織。這些細(xì)胞可以作為模型系統(tǒng)來(lái)研究細(xì)胞生物學(xué)和生物化學(xué)，研究細(xì)胞與致病因子（如細(xì)菌、病毒）之間的相互作用，研究藥物的作用，研究衰老過(guò)程，研究細(xì)胞信號(hào)和代謝調(diào)節(jié)。在許多情況下，使用原代細(xì)胞可使研究人員避免使用動(dòng)物模型...

細(xì)胞復(fù)蘇：①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化，時(shí)間1min左右，加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。②在1000RPM左右條件下離心4min，棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻，將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種①棄去培養(yǎng)上清，用PBS或生理鹽水清洗1-2次，加入（T25瓶）②1-2min后，顯微鏡下觀察細(xì)胞，大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落，輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化；③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min，棄上清，加1ml凍存液重懸細(xì)胞；④將凍存管放入程序降溫盒，放入-80℃冰箱，4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存...